一種銀耳發(fā)酵提取物的制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種銀耳發(fā)酵提取物的制備方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 銀耳，又名白木耳、雪耳，營(yíng)養(yǎng)豐富，食味鮮美，不但是營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高食用菌，也是 藥用價(jià)值較高藥用菌，是世界公認(rèn)保健品。銀耳內(nèi)含有碳水化合物、蛋白質(zhì)、多糖、維生素和 多種氨基酸等，是滋補(bǔ)強(qiáng)壯、扶正固本的良藥。我國(guó)銀耳資源豐富，為開(kāi)發(fā)應(yīng)用銀耳提供有 利條件。隨著銀耳栽培業(yè)迅速發(fā)展及應(yīng)用范圍拓寬，對(duì)銀耳營(yíng)養(yǎng)成分及在醫(yī)療保健作用方 面研究也逐步深入。對(duì)銀耳活性物質(zhì)的提取工藝也不斷完善，但是提取方法主要以浸提法 為主。
[0003] 銀耳提取物在美容護(hù)膚中的應(yīng)用已經(jīng)有了很多，銀耳對(duì)于皮膚的功效主要是抗衰 老、保濕補(bǔ)水等方面。但由于銀耳提取物的成本限制，在護(hù)膚品中的添加量很低，僅為〇. 2 %~2 %，因此在護(hù)膚品中能起到的作用微乎其微，而主要依靠其它成分的原料起主導(dǎo)作 用，使得這種產(chǎn)品的生產(chǎn)成本比較高，效果并不盡然，沒(méi)有充分發(fā)揮銀耳提取液所起到的作 用。究其原因，除了制作工藝復(fù)雜、生產(chǎn)成本的因素外，主要是還沒(méi)有對(duì)銀耳發(fā)酵物提取液 在護(hù)理人體肌膚上所產(chǎn)生的作用和機(jī)理具有充分的認(rèn)識(shí)。
[0004] 發(fā)酵技術(shù)在護(hù)膚品中應(yīng)用已有大量報(bào)道，最著名的例子就是SKII的神仙水，專(zhuān)利 成分Pitera(覆膜酵母菌發(fā)酵產(chǎn)物濾液），利用一種特殊的天然酵母"Saccharomycopsis" 發(fā)酵后提煉出的成分，含有健康皮膚不可或缺的氨基酸、礦物質(zhì)、有機(jī)酸、無(wú)機(jī)酸等自然成 分。即使是SKII的神仙水，專(zhuān)利成分Pitera在產(chǎn)品中也只是作為一種功效性成分加入其 中，產(chǎn)品中還含有其它大量化學(xué)成分?；瘖y品中一般添加的化學(xué)成分有：硅油、增稠劑、pH 調(diào)節(jié)劑、乳化劑、香精、抗氧化劑、色素等，這些成分對(duì)皮膚并沒(méi)有實(shí)際功效，反而會(huì)增加潛 在的皮膚刺激性。
[0005] 目前較為常用的提取方法為熱水浸提法、酸提取法、堿提取法、酶提取法，而使用 微生物發(fā)酵法提取銀耳活性物還未見(jiàn)報(bào)道。微生物法又可稱(chēng)為發(fā)酵法，是以細(xì)菌、霉菌等微 生物為體系對(duì)外源底物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾的化學(xué)反應(yīng)，微生物轉(zhuǎn)化不需要添加其它的催化劑， 只需先培養(yǎng)出大量的微生物菌種，然后加入底物進(jìn)行能實(shí)現(xiàn)的反應(yīng)，所以微生物法比化學(xué) 試劑的反應(yīng)法更專(zhuān)一、更有效；反應(yīng)條件溫和，微生物發(fā)酵一般都是在常溫和pH為7左右的 條件下進(jìn)行催化反應(yīng)，不需要高溫、高壓等苛刻的條件；設(shè)備的運(yùn)行操作也比較簡(jiǎn)單、安全， 產(chǎn)生的公害較少，一般不會(huì)造成環(huán)境污染，后處理也相對(duì)簡(jiǎn)單；篩選不同的菌種與優(yōu)化反應(yīng) 條件可提高轉(zhuǎn)化率，對(duì)同一底物進(jìn)行微生物轉(zhuǎn)化的菌種可能有多種，通過(guò)篩選選出最佳菌 種，可以保證較高的轉(zhuǎn)化率。當(dāng)今國(guó)內(nèi)外許多研究者采用生物法生產(chǎn)多糖，即微生物法、酶 法、植物細(xì)胞組織培養(yǎng)等多種生物轉(zhuǎn)化法結(jié)合，已經(jīng)呈現(xiàn)出明顯優(yōu)勢(shì)。因?yàn)榻^大多數(shù)的發(fā)酵 過(guò)程所需條件非常溫和，而且反應(yīng)產(chǎn)物單純和能耗少，是一個(gè)與環(huán)境友善的綠色化學(xué)過(guò)程。 隨著基因工程、細(xì)胞工程、酶工程技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，微生物發(fā)酵技術(shù)有了突飛猛進(jìn)的 發(fā)展，在天然活性物質(zhì)的研究開(kāi)發(fā)中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。
[0006] 現(xiàn)有的銀耳活性物提取最常采用的是水提法：銀耳干品粉碎后加去離子水，調(diào)pH 后攪拌浸提一段時(shí)間，離心后取上清液濃縮，最后使用乙醇沉淀，干燥后粉碎得到產(chǎn)物。但 是該方法在提取過(guò)程中引入有機(jī)物，不僅破壞環(huán)境，且在應(yīng)用的過(guò)程中存在潛在的安全隱 患。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種銀耳發(fā)酵提取物的制備方法。
[0008] 本發(fā)明提供的銀耳發(fā)酵提取物的制備方法包括如下步驟：用菌種或其培養(yǎng)液或其 懸浮液發(fā)酵培養(yǎng)銀耳，得到發(fā)酵產(chǎn)物，即為銀耳發(fā)酵提取物；
[0009]所述菌種為如下至少一種：魯氏結(jié)合酵母Zygosaccharomycesrouxii、巴氏 酵母Saccharomycespastorianus、釀酒酵母Saccharomycescerevisiae、葡萄酒酵母 Saccharomycesellipsoideus、木醋桿菌Acetobacterxylinus、德氏乳桿菌保加利亞亞 種Lactobacillusdelbrueckiibulgaricus、嗜熱鏈球菌Streptococcusthermophilus、 兩歧雙歧桿菌Bifidobacteriumbifidum、乳酸乳球菌LactococusIactis和奠腸球菌 Enterococcusfaecalis。
[0010] 上述方法中，所述菌種培養(yǎng)液中的菌種總量和銀耳的配比為IO6-IO9CFU:5-10g。
[0011] 上述方法中，所述菌種培養(yǎng)液為如下1)-3)中任一種：
[0012] 1)含有釀酒酵母和嗜熱鏈球菌的培養(yǎng)液；
[0013] 2)含有德氏乳桿菌和魯氏結(jié)合酵母的培養(yǎng)液；
[0014] 3)含有兩歧雙歧桿菌和乳酸乳球菌的培養(yǎng)液。
[0015] 上述方法中，所述釀酒酵母和所述嗜熱鏈球菌的菌落形成單位比為1 :1 ;
[0016] 所述德氏乳桿菌和所述魯氏結(jié)合酵母的菌落形成單位比為1 :1 ;
[0017] 所述兩歧雙歧桿菌和所述乳酸乳球菌的菌落形成單位比為1 :1。
[0018] 上述方法中，所述發(fā)酵培養(yǎng)的時(shí)間為24-72h;所述發(fā)酵培養(yǎng)的溫度35-45°C;所述 菌種培養(yǎng)液的PH值為6. 5-7. 5。
[0019] 上述方法中，所述方法中在得到發(fā)酵產(chǎn)物后還包括如下步驟：將所述發(fā)酵液離心， 取上清液，為銀耳發(fā)酵提取物。
[0020] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述方法制備得到的銀耳發(fā)酵提取物。
[0021] 本發(fā)明的最后一個(gè)目的是提供一種用于保濕的產(chǎn)品。
[0022] 本發(fā)明提供的用于保濕的產(chǎn)品的活性成分為上述銀耳發(fā)酵提取物。
[0023] 上述產(chǎn)品中，所述產(chǎn)品為化妝品，具體為面膜或精華液或爽膚水。
[0024] 上述方法或上述銀耳發(fā)酵提取物或上述產(chǎn)品在提高皮膚含水量中的應(yīng)用也屬于 本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0025] 上述方法或上述銀耳發(fā)酵提取物或上述產(chǎn)品在制備提高皮膚含水量的產(chǎn)品中的 應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0026] 上述方法或上述銀耳發(fā)酵提取物或上述產(chǎn)品在皮膚保濕中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明 的保護(hù)范圍。
[0027] 上述方法或上述銀耳發(fā)酵提取物或上述產(chǎn)品在制備具有皮膚保濕功能的產(chǎn)品中 的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0028] 上述方法或上述銀耳發(fā)酵提取物或上述產(chǎn)品在作為化妝品中的應(yīng)用也屬于本發(fā) 明的保護(hù)范圍。
[0029] 上述應(yīng)用中，所述化妝品具體為面膜或精華液或爽膚水。
[0030] 本發(fā)明提供了一種銀耳發(fā)酵物的提取方法，該方法選擇更加合適的菌種，使產(chǎn)品 更加天然，且不需要添加酶等外來(lái)物質(zhì)，不僅節(jié)約生產(chǎn)成本，而且最大化的簡(jiǎn)化了生產(chǎn)步 驟，使該發(fā)酵技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)大量生產(chǎn)、工業(yè)化生產(chǎn)，并能夠充分保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。通 過(guò)實(shí)驗(yàn)證明：本發(fā)明制備的銀耳發(fā)酵提取物不含任何化學(xué)成分，可以直接作為面膜或精華 液或爽膚水的成品使用，比現(xiàn)有市面上的其他產(chǎn)品更加天然，不會(huì)給肌膚造成任何負(fù)作用； 而且比普通提取方法獲得更小的成分，更易讓皮膚充分吸收。
【附圖說(shuō)明】
[0031] 圖1為實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)組1得到的銀耳發(fā)酵提取物的保濕補(bǔ)水檢測(cè)結(jié)果。
[0032] 圖2為實(shí)施例2的實(shí)驗(yàn)組2得到的銀耳發(fā)酵提取物的保濕補(bǔ)水檢測(cè)結(jié)果。
[0033] 圖3為實(shí)施例3的實(shí)驗(yàn)組3得到的銀耳發(fā)酵提取物的保濕補(bǔ)水檢測(cè)結(jié)果。
[0034] 圖4為實(shí)施例1的實(shí)驗(yàn)組1得到的銀耳發(fā)酵提取物的活性多肽分子量分布HPLC 圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0035] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0036] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0037] 下述實(shí)施例中的液體培養(yǎng)基由溶質(zhì)和溶劑組成，溶劑為水，溶質(zhì)及其在液體培養(yǎng) 基中的濃度為：葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，pH值為7. 0。
[0038] 下述實(shí)施例中的YTO培養(yǎng)基由溶質(zhì)和溶劑組成，溶劑為水，溶質(zhì)及其在液體培養(yǎng) 基中的濃度為：酵母提取物1% (質(zhì)量分?jǐn)?shù)），胰蛋白胨2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù)），葡萄糖2% (質(zhì) 量分?jǐn)?shù)），PH值為7. 0。
[0039] 下述實(shí)施例中的銀耳是中國(guó)同仁堂有限責(zé)任公司的產(chǎn)品，下述實(shí)施例中的銀耳粉 是將銀耳粉碎成粉得到的。
[0040] 下述實(shí)施例中的釀酒酵母Saccharomycescerevisiae的ATCC編號(hào)為26603,公眾 可從北京工商大學(xué)獲得，也可從ATCC獲得。
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