而進(jìn)行擴(kuò)增。
[0073] 如本文所用，術(shù)語"載體"是指可以攜帶插入的DNA并且可以為維持在宿主細(xì)胞中 的DNA分子。載體也可以為克隆載體，克隆媒介物等。術(shù)語"載體"包括主要功能為將核酸 分子插入到細(xì)胞中的載體，主要功能在于復(fù)制核酸的復(fù)制載體，和用于轉(zhuǎn)錄和/或翻譯DNA 或RNA的表達(dá)載體，還包括提供多余一種上述功能的載體。
[0074] 如本文所用，術(shù)語"宿主細(xì)胞"是指單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)物，其可以是或已經(jīng)是載 體或核酸分子和/或蛋白質(zhì)整合的接受體。宿主細(xì)胞包括單一宿主細(xì)胞的子代，并且由于 天然的、隨機(jī)的或有意突變，所述子代可能未必與親代完全相同（在形態(tài)上或在總DNA互補(bǔ) 序列上）。宿主細(xì)胞包括用本發(fā)明的多核苷酸轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。"分離的宿主細(xì)胞"是指已經(jīng)與 它來源的生物在物理上分離的宿主細(xì)胞。
[0075] 宿主細(xì)胞可以是原核細(xì)胞，如細(xì)菌細(xì)胞；或是低等真核細(xì)胞，如酵母細(xì)胞；或是高 等真核細(xì)胞，如哺乳動(dòng)物細(xì)胞。代表性例子有：大腸桿菌，鏈霉菌屬的細(xì)菌細(xì)胞；真菌細(xì)胞 如酵母；植物細(xì)胞；昆蟲細(xì)胞；動(dòng)物細(xì)胞等。
[0076] 用重組DNA轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)技術(shù)進(jìn)行。當(dāng)宿主為原 核生物如大腸桿菌時(shí)，能吸收DNA的感受態(tài)細(xì)胞可在指數(shù)生長期后收獲，用0 &(：12法處理， 所用的步驟在本領(lǐng)域眾所周知。另一種方法是使用MgCl2。如果需要，轉(zhuǎn)化也可用電穿孔的 方法進(jìn)行。當(dāng)宿主是真核生物，可選用如下的DNA轉(zhuǎn)染方法：磷酸鈣共沉淀法，常規(guī)機(jī)械方 法如顯微注射、電穿孔、脂質(zhì)體包裝等。
[0077] 抗精神病藥物
[0078] 常用的抗精神病藥物可分為經(jīng)典抗精神病藥和非經(jīng)典抗精神病藥，而經(jīng)典抗精神 病藥又可按照其化學(xué)結(jié)構(gòu)分為吩噻嗪類（phenothiazines)，硫雜蒽類（thioxanthenes) 和丁酰苯類（buty-rophenones)。目前臨床常用的非經(jīng)典抗精神病藥物主要是通過阻斷 5-HT (5-羥色胺）受體而發(fā)揮抗精神病作用。這些藥物多數(shù)對5-HT受體阻斷作用強(qiáng)于其 阻斷DA (多巴胺）受體的作用，協(xié)調(diào)5-HT與DA系統(tǒng)的相互作用和平衡，即使長期應(yīng)用也幾 無錐體外系反應(yīng)發(fā)生。隨著非典型抗精神病藥的應(yīng)用，其對代謝綜合征的影響引起人們越 來越多的重視，明顯的代謝紊亂不良反應(yīng)嚴(yán)重影響治療依從性及療效。多種抗精神病藥，特 別是奧氮平、氯氮平等更易引起代謝綜合征。有關(guān)非典型抗精神病藥誘發(fā)代謝綜合征的機(jī) 制還不清楚，當(dāng)前主要還是在中樞層面存在著不同路徑的假說。抗精神病藥物引起的代謝 綜合征可能與藥物所作用的神經(jīng)遞質(zhì)受體有關(guān)，例如多巴胺、5-HT、組胺等。通常人們認(rèn)為， 下丘腦釋放的內(nèi)源性胺類物質(zhì)（如兒茶酚胺、5-HT、組胺）可以減少食欲，降低食物攝取，控 制體重。很多抗精神病藥通過對5-HT受體的阻滯（如1B、2A、2C受體），增進(jìn)食欲，加強(qiáng)攝 食，從而引起肥胖和體重增加。非典型抗精神病藥還會(huì)引起糖耐量受損，這可能是因?yàn)樗幬?影響多巴胺調(diào)節(jié)中樞血糖水平，或者由于藥物刺激在PRL的分泌導(dǎo)致糖代謝紊亂。
[0079] 試劑盒及其用途
[0080] 本發(fā)明還包括可用于檢測抗精神病藥物相關(guān)代謝綜合征易感性的試劑盒，所述的 試劑盒中可包括特異性擴(kuò)增含SNP位點(diǎn)的擴(kuò)增產(chǎn)物的引物。更優(yōu)選的，它還含有選自下組 的試劑：（a)與SNP部位結(jié)合的探針；(b)識別SNP位點(diǎn)的限制性內(nèi)切酶。
[0081] 應(yīng)理解，在本發(fā)明首次揭示了本發(fā)明SNP與抗精神病藥物相關(guān)代謝綜合征的相關(guān) 性之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以方便地設(shè)計(jì)出可特異性擴(kuò)增出含所述SNP位置的擴(kuò)增產(chǎn)物， 然后通過測序等方法確定是否存在這些SNP。
[0082] 通常，引物的長度為15_50bp，較佳地為20_30bp。雖然引物與模板序列完全互補(bǔ) 是優(yōu)選的，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，在引物與模板存在一定的不互補(bǔ)（尤其是引物的5' 端）的情況下，也能夠特異性地?cái)U(kuò)增（即僅擴(kuò)增出所需的片段）。含有這些引物的試劑盒和 使用這些引物的方法都在本發(fā)明范圍之內(nèi)，只要該引物擴(kuò)增出的擴(kuò)增產(chǎn)物含有本發(fā)明SNP 的對應(yīng)位置。
[0083] 雖然擴(kuò)增產(chǎn)物的長度沒有特別限制，但是通常擴(kuò)增產(chǎn)物的長度為100_3000bp，較 佳地為 150-2000bp，更佳地為 200-1000bp。
[0084] 本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于：
[0085] (1)首次發(fā)現(xiàn)1個(gè)SNP與抗精神病藥物相關(guān)代謝綜合征易感性存在相關(guān)性，從而為 抗精神病藥物相關(guān)代謝綜合征的診斷與治療提供了新的途徑。
[0086] (2)基于本發(fā)明人的新發(fā)現(xiàn)，可用于選擇治療抗精神病藥物相關(guān)代謝綜合征藥物 的標(biāo)志、篩選治療抗精神病藥物相關(guān)代謝綜合征的藥物、評估抗精神病藥物相關(guān)代謝綜合 征疾病的轉(zhuǎn)歸、預(yù)后的分子標(biāo)志，為抗精神病藥物相關(guān)代謝綜合征藥物的進(jìn)一步開發(fā)提供 了一種良好的靶點(diǎn)。
[0087] (3)本發(fā)明不僅可用于早期較準(zhǔn)確地診斷抗精神病藥物相關(guān)代謝綜合征，而且可 以未雨綢繆地使攜帶者在未發(fā)病前就采取合理的預(yù)防措施，從而提高攜帶者的生存期和生 存質(zhì)量，因此具有極其重大的應(yīng)用價(jià)值和社會(huì)效益。
[0088] (4)本發(fā)明SNP能夠作為合適的抗精神病藥物的生物學(xué)指標(biāo)，從而實(shí)現(xiàn)對精神病 患者個(gè)體化用藥。
[0089] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本 發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照 常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克?。簩?shí)驗(yàn)室手冊（New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否 則百分比和份數(shù)是重量百分比和重量份數(shù)。
[0090] 通用方法
[0091] -、DNA樣品準(zhǔn)備
[0092] 基因組DNA樣品應(yīng)電泳檢測完整性，并測濃度。用去離子水或Tris-Cl稀釋為濃 度10-20ng/ul。由于樣品量大，必須做好樣品標(biāo)記。
[0093] 二、PCR 反應(yīng)
[0094] 1.在384孔板上一定要做好標(biāo)記：橫6,縱4的24個(gè)孔為一組。以一組為將來點(diǎn) 樣時(shí)候的一針。
[0095] 2.按多出來10-15%的量來配制Mix，如需檢測40個(gè)樣，則配50-55個(gè)樣的量
[0096] 反應(yīng)體系：均按ul計(jì)算
[0097]
[0098] *如果做27個(gè)Plex以上的PCR，應(yīng)用0· 2ul
[0099] 3.在384孔板中每孔加入4ul Mix，最后在加入Iul模板DNA。
[0100] 4.用ABI的PCR封口膜封緊，防止樣品蒸發(fā)。本實(shí)驗(yàn)的每一步反應(yīng)揭開PCR封口 膜后都應(yīng)該換一張新膜。
[0101] 5.板子vertex后甩離。
[0102] 6.在ABI9700PCR儀上進(jìn)行如下反應(yīng)：
[0103]
[0104] 反應(yīng)結(jié)束時(shí)，取出384PCR反應(yīng)板。
[0105] 三、SAP消化反應(yīng)
[0106] L前述PCR后的板子2000rpm離心lmin。
[0107] 2.配制SAP酶Mix，按多出10-15%的量。
[0108] 反應(yīng)體系：
[0109]
[0110] 3.取2ul的Mix加入到每個(gè)孔中，來回吸打，保證混勾，將封口膜蓋緊
[0111] 4.在PCR儀中進(jìn)行SAP酶消化：
[0112] 37 度 40min
[0113] 85 度 5min
[0114] 4 度 hold
[0115] 消化完畢，取出384孔反應(yīng)板，目測液體揮發(fā)情況。
[0116] 四、單堿基延伸
[0117] I. SAP反應(yīng)板放入離心機(jī)中2000rpm離心lmin。
[0118] 2.配制延伸Mix
[0121] 3.取2ul的Mix加入到每個(gè)孔中，并來回吸打，保證混勻，將封口膜蓋緊
[0122] 4.甩離后，上ABI9700儀進(jìn)行下列反應(yīng)：
[0123]
[0124] 5.反應(yīng)完畢，取出384反應(yīng)板，目測液體揮發(fā)情況。
[0125] 五、樹脂純化
[0126] L 384板2000rpm離心2min，每孔加16ul水。如有必要可再離心一次。
[0127] 2.取一張干凈的A4紙，將6MG 384板置于其上，用小勺取適量resin。用塑料蓋 板反復(fù)左右推平resin，壓實(shí)，使每孔樹脂含量均勻。