提取分離木犀草素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖-8-C-β-吡喃木糖苷的方法和系統(tǒng)的制作方法
【專利說明】提取分禹木犀草素-6-G- β -D-批喃葡萄糖-8-G- β — B比喃木糖苷的方法和系統(tǒng)
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于植物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明涉及一種從廣金錢草中提取分離木犀草素-6-C- β -D-吡喃葡萄糖-8-C- β -吡喃木糖苷的方法和系統(tǒng)。
【背景技術(shù)】
[0002]廣金錢草為豆科山螞幢屬植物Desmodium styracifolium(Osbeck)Merr.，其藥用部位為干燥地上部分，主要化學(xué)成分為黃酮、皂苷、多糖、生物堿等化合物。具有清熱除濕，利尿通淋之功效。用于熱淋、沙淋、石淋、小便澀痛、水腫尿少、黃疸尿赤、尿路結(jié)石。
[0003]木犀草素-6-C- β -D-吡喃葡萄糖-8-C- β -吡喃木糖苷，其結(jié)構(gòu)式如圖1所示，為黃色粉末；分子式:C26H28O15;分子量:580。該化合物存在于廣金錢草藥材中，作為廣金錢草鑒別和含量測定用的對照品，以及廣金錢草及其相關(guān)藥物制劑如廣金錢草總黃酮膠囊的質(zhì)量控制用?，F(xiàn)有提取分離圖1所示化合物的方法和系統(tǒng)亟待改進。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決相關(guān)技術(shù)中的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的一個目的在于提出一種從廣金錢草中提取分離圖1所示化合物的方法和系統(tǒng)，利用該提取分離方法和系統(tǒng)得到的圖1所示化合物，純度高，有利于作為廣金錢草鑒別和含量測定用的對照品、以及作為廣金錢草及其相關(guān)藥物制劑的質(zhì)量控制。
[0005]依據(jù)本發(fā)明的一方面，本發(fā)明提供一種提取分離木犀草素-e-C-β -D-吡喃葡萄糖-s-c-β -吡喃木糖苷，即圖1所示化合物的方法，該方法包括以下步驟:利用乙醇對廣金錢草進行回流提取，獲得廣金錢草提取物；利用醇體系對所述提取物進行多級色譜分離，其中包括，利用第一醇體系對所述提取物進行第一色譜分離，獲得第一分離部分，利用第二醇體系對所述第一分離部分進行第二色譜分離，獲得第二分離部分，利用第三醇體系對所述第二分離部分進行第三色譜分離，以獲得所述圖1所示化合物。
[0006]本發(fā)明的該方法，利用多級色譜分離，包括組合利用大孔樹脂純化技術(shù)，中壓制備及凝膠色譜技術(shù)，采用醇-水體系，從廣金錢草提取物中分離提取圖1所示化合物，該工藝操作簡單，生產(chǎn)時間短，產(chǎn)品收率高，純度高，能夠獲得純度達到93%以上的圖1所示化合物，獲得的圖1所示化合物可作為含量測定用化學(xué)對照品。該工藝步驟以及各個步驟的參數(shù)條件，是發(fā)明人綜合考慮、多次調(diào)整試驗大孔樹脂色譜、反相中壓色譜和凝膠色譜的組合及其各自的洗脫條件對廣金錢草中的圖1所示化合物的分離純化效果的影響而確定下來的，該提取純化過程不涉及毒性相對強的有機溶劑，提取分離操作過程及提取物都安全可
A+-.與巨O
[0007]圖2為本發(fā)明的一個實施例中的提取分離圖1所示化合物的方法的步驟流程圖。根據(jù)本發(fā)明的實施例，上述本發(fā)明一方面的圖1所示化合物提取分離方法，還可以具有以下技術(shù)特征至少之一:
[0008]根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，所述利用乙醇對廣金錢草進行回流提取，獲得廣金錢草提取物，包括:利用濃度50-95%的乙醇對所述廣金錢草進行兩次回流提取，合并兩次回流提取所得的提取液，獲得合并提取液，除去所述合并提取液中的乙醇，和/或除去所述合并提取液中的乙醇和離子，以及任選的，進行干燥，以獲得所述提取物。兩次濃度為50-95%乙醇回流提取獲得提取物，是發(fā)明人經(jīng)過多次試驗摸索確定的，既能充分利用原料也能節(jié)省時間，利于規(guī)?；a(chǎn)制備；去除提取液中的乙醇和/或離子，利于排除它們對后續(xù)分離純化的干擾。
[0009]根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，所述兩次回流提取，其中一次的乙醇和廣金錢草的重量比為12:1，回流提取的時間為1.5h_3h，任選的為2h，另一次的乙醇和廣金錢草的重量比為10:1，回流提取的時間為lh-2h，任選的為1.5h。回流時，濃度為50-95%乙醇和廣金錢草的比例以及回流時間，是發(fā)明人經(jīng)過多次試驗檢測確定的，能夠使原料得到高提取。
[0010]根據(jù)本發(fā)明的一些實施例，所述第一醇體系為乙醇-水體系，該乙醇-水體系中的乙醇的濃度為30-35 %，較佳的，所述乙醇-水體系中的乙醇的濃度為30 %，所述第一色譜為大孔樹脂。該乙醇-水洗脫體系中乙醇的濃度是發(fā)明人結(jié)合后續(xù)色譜分離條件、多次試驗檢測洗脫下來的峰中的圖1所示化合物比例，經(jīng)過多次調(diào)整優(yōu)化確定的。
[0011 ] 根據(jù)本發(fā)明的一些實施例，所述第二醇體系為乙醇-水體系，該乙醇-水體系中的乙醇的濃度為10-30 %，所述第二色譜為反向色譜，較佳的，選擇的反向色譜為反向中壓色譜，更佳的，選擇C18柱，其柱壓為l-10bar，洗脫流速為5?30ml/min。該乙醇-水洗脫體系中的乙醇濃度是發(fā)明人結(jié)合第一分離部分中目標成分的比例，以及第一色譜分離中的乙醇-水洗脫體系，多次試驗優(yōu)化確定的，利于在簡單操作和短時間內(nèi)，獲得收率高、純度高的圖1所示化合物。
[0012]根據(jù)本發(fā)明的一個實施例，所述利用第二醇體系對第一分離部分進行第二色譜分離，獲得第二分離部分，包括:利用乙醇濃度為a的乙醇-水體系對所述第一分離部分進行等度洗脫25-40min，接著換用乙醇濃度為[a，b]的乙醇-水體系對所述第一分離部分進行梯度洗脫180-220min，收集以獲得所述第二分離部分，其中，a的取值范圍為10_15%，b的取值范圍為20-30%。先利用一個濃度的乙醇-水體系等度洗脫，再進行梯度洗脫，能夠提高分離提取效率；等度洗脫和梯度洗脫的乙醇濃度或濃度范圍，以及洗脫時間，是發(fā)明人考慮收率、時間、回收的分離部分的復(fù)雜度、分離部分中目標成分的比例等，多次試驗確定的。
[0013]如圖3所示，根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，所述利用第二醇體系對第一分離部分進行第二色譜分離，獲得第二分離部分，包括:利用乙醇濃度為c的乙醇-水體系對所述第一分離部分進行等度洗脫30min，接著換用乙醇濃度為[c，d]的乙醇_水體系對所述第一分離部分進行梯度洗脫200min，收集獲得初級第二分離部分；利用乙醇濃度為e的乙醇-水體系對所述初級第二分離部分進行等度洗脫30min，接著換用乙醇濃度為[e，f]的乙醇-水體系對所述初級第二分離部分進行梯度洗脫200min，收集獲得所述第二分離部分，其中，c和e的取值范圍為10-15%，d和f的取值范圍為20-30%，e>c，d>f。前后兩次，都先利用一個濃度的乙醇-水體系等度洗脫，再進行梯度洗脫，能夠提高分離提取圖1所示化合物的效率；前后兩次的等度洗脫和梯度洗脫的乙醇濃度或濃度范圍、各自的洗脫時間、速度，是發(fā)明人結(jié)合考慮兩次等度-梯度洗脫的條件、收率、時間、回收的分離部分的復(fù)雜度、分離部分中目標成分的比例等，多次試驗優(yōu)化確定的，利于在簡單操作和短時間內(nèi)，獲得收率高、純度高的圖1所示化合物。在本發(fā)明的一個較佳實施例中，C = 10%, d = 30%, e =12%, f = 20%，能夠使最終獲得的提取純化產(chǎn)物的純度達93%以上。
[0014]根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，所述第三醇體系為純甲醇，所述第三色譜為凝膠色譜。在本發(fā)明的一個實施例中，所選凝膠色譜為葡聚糖凝膠色譜Sephadex G_50。利于進一步提尚目標化合物的純度。
[0015]依據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供一種提取分離圖1所示化合物的系統(tǒng)，該系統(tǒng)能夠用以實施上述本發(fā)明一方面或者任一實施例中的圖1所示化合物提取分離方法，該系統(tǒng)包括:回流提取裝置，用以利用乙醇對廣金錢草進行回流提取，獲得廣金錢草提取物；色譜分離裝置，用于利用醇體系對所述提取物進行多級色譜分離，其包括，第一色譜分離單元，與所述回流提取裝置相連，用于利用第一醇體系對所述提取物進行第一色譜分離，獲得第一分離部分，第二色譜分離單元，與所述第一色譜分離單元相連，用于利用第二醇體系對所述第一分離部分進行第二色譜分離，獲得第二分離部分，第三色譜分離單元，與所述第二色譜分離單元相連，用于利用第三醇體系對所述第二分離部分進行第三色