滑菇多糖的乙醇醇析分級(jí)制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬食品領(lǐng)域,涉及一種滑燕(Phol1ta nameko)多糖乙醇醇析分級(jí)制備的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]滑燕(Phol1ta nameko),又名真珠燕、滑子蘑,擔(dān)子菌綱,散菌目，蓋球燕科,磷傘屬?；揭蚓w表面有粘液而得名，滑菇口味鮮美，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，在世界上享有較高聲譽(yù)，是當(dāng)今世界第五、日本第三的食用菌品種，是食用、藥用兼?zhèn)涞氖秤镁滦??；街泻袑?duì)腫瘤起抑制作用的多糖物質(zhì)，并可預(yù)防葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎桿菌、結(jié)核桿菌的感染。
[0003]分級(jí)沉淀法是指在混合組分的溶液中加入能與該溶液互溶的溶劑，改變混合組分溶液中某些組分的溶解度，使其從溶液中逐步析出。當(dāng)在含有溶質(zhì)的水溶液中加入一定量的乙醇，從而降低溶質(zhì)的溶解度，使其沉淀吸析出。具體地，當(dāng)乙醇加入溶液中時(shí)，介質(zhì)的介電常數(shù)降低，溶質(zhì)分子之間的靜電引力增加，聚集形成沉淀。
[0004]滑菇在我國(guó)廣泛種植，但是還未見(jiàn)到滑菇加工產(chǎn)品的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種滑菇多糖的乙醇醇析分級(jí)制備方法。利用水提法經(jīng)酶處理所得滑菇多糖溶液是多種不同分子量的多糖的混合組分，根據(jù)以上乙醇分級(jí)沉淀原理，向滑菇多糖的水溶液中逐次加入一定體積分?jǐn)?shù)的乙醇，便可以逐級(jí)沉淀出分子量由大到小的多糖，乙醇醇析得到的多糖經(jīng)醋酸纖維薄膜電泳都可以達(dá)到單一條帶。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0007]滑菇多糖的乙醇醇析分級(jí)制備，它包括以下步驟:
[0008](I)選剔
[0009]選購(gòu)新鮮滑菇，在購(gòu)得的新鮮滑菇中挑選無(wú)明顯組織傷痕、大小均一且干凈的優(yōu)良滑菇備用；
[0010]⑵稱重
[0011]將挑選好的優(yōu)良滑菇置于提前清洗并烘干的500ml燒杯中，用電子天平稱取300g供實(shí)驗(yàn)使用；
[0012]⑶浸泡
[0013]在稱取好的300g滑菇中加蒸餾水1500ml (滑菇與水的比例為1:5)，室溫下浸泡2h,其間每隔20min對(duì)浸泡液在速度60rpm下進(jìn)行攪拌5min。
[0014]⑷破碎打漿
[0015]將浸泡過(guò)的滑菇與水一同倒入高速組織搗碎機(jī)中，對(duì)滑菇進(jìn)行破碎打漿l_2min，得滑菇組織漿液。
[0016](5)水浴浸提
[0017]將上一步所得滑菇組織漿液等分為若干份分別置于500ml燒杯中，每份適量以確保漿液恰好完全浸入水浴鍋的熱水中，再將盛有滑菇組織漿液的燒杯置于恒溫水浴鍋中，85 °C下水浴浸提3h。
[0018](6)過(guò)濾
[0019]用三層紗布對(duì)水浴過(guò)后的滑菇組織漿液進(jìn)行過(guò)濾，所得若干份濾液混合留存，所得濾渣集中在一個(gè)燒杯中進(jìn)行下一步。
[0020](7)洗渣
[0021]上一步所得濾渣加I倍水于85°C下水浴浸提lh，過(guò)濾，保留濾液；所得濾渣再加0.5倍水于851:下水浴浸提111，過(guò)濾，棄渣，保留濾液。所得所有濾液充分混合。
[0022](8)分級(jí)醇析
[0023]根據(jù)多糖醇析分層操作工藝流程圖1和圖2，分步按比例對(duì)“過(guò)濾”、“洗渣”兩步所得混合濾液進(jìn)行醇析，具體操作如下:
[0024]①第一步
[0025]所得濾液平均分為若干份，每份150_200ml，分別置于500ml燒杯中，每份按1:1比例加無(wú)水乙醇醇析，靜置2h分三層，分別是上層絮狀多糖、中間清液以及下層膠狀多糖。取上層多糖去酒精后，棄中間清液，下層保留。上層多糖和下層多糖獲得后在4000rpm離心20min后除去液體，獲得上層多糖和下層多糖的固體。
[0026]②第二步
[0027]上一步所得下層多糖用水復(fù)溶(每g加水400ml水)，再按1:1(溶液:乙醇)比例加乙醇醇析，靜置2h，分層情況同上。取上層多糖去乙醇，棄中間清液，下層保留。
[0028]③第三步
[0029]上一步所得下層多糖用水復(fù)溶(每g加水400ml水)，再按1:1(溶液:乙醇)比例加乙醇醇析，靜置2h，分層情況同上。取上層多糖去乙醇，棄中間清液，下層保留。
[0030]④第四步
[0031]上一步所得下層多糖用水復(fù)溶(每g加水400ml水)，再按1:2(溶液:乙醇)比例加乙醇醇析，靜置2h，分層情況同上。取上層多糖去乙醇，棄中間清液，下層保留。
[0032]⑤第五步
[0033]上一步所得下層多糖用水復(fù)溶(每g加水400ml水)，再按1:3(溶液:乙醇)比例加乙醇醇析，靜置2h，分層情況同上。取上層多糖去乙醇，棄中間清液，下層保留。
[0034]⑥第六步
[0035]上一步所得下層多糖用水復(fù)溶(每g加水400ml水)，再按1:5(溶液:乙醇)比例加乙醇醇析，靜置2h分兩層，分別是上層絮狀多糖和下層清液。取上層多糖去乙醇，棄下層清液。
[0036]注:每一步所得上層多糖復(fù)溶后取一定量按以上步驟重復(fù)操作；
[0037]以上各步驟樣品均標(biāo)記留樣；
[0038]以下為標(biāo)記原則:E表示經(jīng)過(guò)醇析的樣品，下標(biāo)U、D分別表示多糖醇析液的上、下層多糖，stepX(X= 1.2.3......)表示第X步醇析，其后用連接符連接這一步的醇析比例。例如第三步1:1醇析所得多糖標(biāo)記為Eustap3 1:1。
[0039](9)凍干
[0040]分級(jí)醇析所得全部多糖樣品均用冷凍干燥機(jī)冷凍干燥24h，得粉狀多糖樣品。
[0041]本發(fā)明具有如下有益效果:
[0042]本發(fā)明將滑菇多糖通過(guò)醇析制備，簡(jiǎn)單方便經(jīng)濟(jì)，制備過(guò)程多糖損失少(質(zhì)量百分比小于10% )，而且醇析后的多糖純度達(dá)到電泳純(圖3-1、圖3-2、圖3-3、圖3-4、圖3_5電泳圖上是單一條帶，出一條帶表示多糖達(dá)到電泳純)，完全能達(dá)到其功能研究、制作食品飲料和食品營(yíng)養(yǎng)添加劑等的用途。
【附圖說(shuō)明】
[0043]圖1為本發(fā)明的滑菇多糖乙醇醇析操作工藝流程圖；
[0044]圖2為本發(fā)明經(jīng)乙醇醇析分級(jí)的多糖電泳圖；
[0045]圖3-1滑菇多糖樣品Eustepl1:1的電泳結(jié)果圖；
[0046]圖3-2滑菇多糖樣品Eustep21:1的電泳結(jié)果圖；
[0047]圖3-3滑菇多糖樣品Eustap31:1的電泳結(jié)果圖；
[0048]圖3-4滑菇多糖樣品Eustep41:2的電泳結(jié)果圖；
[0049]圖3-5滑菇多糖樣品EDstep61:4的電泳結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0050]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述。
[0051]實(shí)施例1:工藝步驟如下:
[0052](I)選剔
[0053]選購(gòu)新鮮滑菇，在購(gòu)得的新鮮滑菇中挑選無(wú)明顯組織傷痕、大小均一且干凈的優(yōu)良滑菇備用。
[0054](2)稱重
[0055]將挑選好的優(yōu)良滑菇置于提前清洗并烘干的500ml燒杯中，用電子天平稱取300g供實(shí)驗(yàn)使用。
[0056](3)浸泡
[0057]在稱取好的300g滑菇中加蒸餾水1500ml，室溫下浸泡2h，其間每隔20min對(duì)浸泡液以60rpm的速度進(jìn)行攪拌5min。
[0058](4)破碎打漿
[0059]將浸泡過(guò)的滑菇與水一同倒入高速組織搗碎機(jī)中，對(duì)滑菇進(jìn)行破碎打漿l_2min，得滑菇組織漿液。
[0060](5)水浴浸提
[0061]將上一步所得滑菇組織漿液等分為若干份分別置于500ml燒杯中，每份適量以確保漿液恰好完全浸入水浴鍋的熱水中，再將盛有滑菇組織漿液的燒杯置于恒溫水浴鍋中，在85 °C條件下水浴浸提3h。
[0062](6)過(guò)濾
[0063]用三層紗布對(duì)水浴過(guò)后的滑菇組織漿液進(jìn)行過(guò)濾，所得若干份濾液混合留存，所得若干份濾渣集中在一個(gè)燒杯中進(jìn)行下一步。