用hla等位基因評估抗癲癇藥物苯妥英引發(fā)藥物過敏反應(yīng)的方法
【專利說明】用HLA等位基因評估抗癲癇藥物苯妥英引發(fā)藥物過敏反應(yīng) 的方法
[0001] 本發(fā)明為進(jìn)入國家申請日為2013年12月19日，申請?zhí)枮?01180071752. 1，發(fā)明 名稱為"評估抗癲癇藥物苯妥英引發(fā)藥物不良反應(yīng)風(fēng)險的方法"的專利申請的分案申請。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及一種用于預(yù)測患者對于藥物不良反應(yīng)的風(fēng)險之方法，尤指抗癲癇藥物 苯妥英引發(fā)過敏反應(yīng)的風(fēng)險評估。
【背景技術(shù)】
[0003] 藥物不良反應(yīng)（簡稱ADRs)是指在正常劑量下使用藥物而引起傷害之表現(xiàn)。藥物 過敏反應(yīng)是一種在用藥治療中常見的不良反應(yīng)且約占通報藥物不良反應(yīng)案件的20%。這些 過敏反應(yīng)可能從輕微的皮膚起紅疹（MPE)到造成生命威脅的藥物疹合并嗜伊紅血癥及全 身癥狀（DRESS)，史帝文生強(qiáng)生癥候群（SJS)和毒性表皮壞死溶解癥（TEN)。
[0004] 許多芳香環(huán)類抗癲癇藥物（AEDs)，如苯妥英，卡馬西平或拉莫三嗪經(jīng)常與過敏反 應(yīng)有關(guān)。特別是，苯妥英是第一線芳香環(huán)類抗癲癇用藥，然而，超過19%使用苯妥英治療的 病人會發(fā)生過敏反應(yīng)。先前文獻(xiàn)指出微胞體環(huán)氧化物水解酶缺失及人類白血球組織抗原基 因型（HLA)可能與芳香環(huán)類抗癲癇藥物引起的過敏反應(yīng)有關(guān)聯(lián)。然而，藥物代謝/遺傳基 因易感性和苯妥英引發(fā)過敏反應(yīng)之間的關(guān)系仍尚未明了。
[0005] 因此，仍然需要一種新穎并改進(jìn)的方法用來預(yù)測苯妥英引發(fā)藥物過敏反應(yīng)的風(fēng) 險，其中該風(fēng)險可以通過評估包括CYP2C9的基因多型性，苯妥英血中濃度和HLA基因型等 因素進(jìn)行預(yù)估。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供一種評估病患發(fā)生苯妥英引發(fā)之不良反應(yīng)風(fēng)險的方法，特別是史帝 文生強(qiáng)生癥候群（SJS)，毒性表皮壞死溶解癥（TEN)及藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀 (DRESS)等嚴(yán)重型皮膚不良反應(yīng)。針對58位苯妥英引發(fā)嚴(yán)重型皮膚不良反應(yīng)（SCARs)病 患，包括史帝文生強(qiáng)生癥候群，毒性表皮溶解癥及藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀及198 位對照組進(jìn)行全基因掃目苗（Affymetrix 6.0)。在一實(shí)施例中，評估病患發(fā)生苯妥英引發(fā)不 良反應(yīng)風(fēng)險的方法包括檢測10號染色體上CYP2Cs區(qū)域的單點(diǎn)核苷酸變異（SNPs)的步驟， 如 CYP2C18 上的 rsl7110192，rs7896133 ;CYP2C9 上的 rsl057910(CYP2C9*3)，rsl7110321， rs9332093, rs9332245 ;CYP2C19 基因上的 rs3758581，rs2860905, rs4086116 及 CYP2C8 上 的 rs7899038, rsl592037, rsl934952, rsll572139, rs6583967。
[0007] 另一實(shí)施例中，評估病患發(fā)生苯妥英引發(fā)之不良反應(yīng)風(fēng)險的方法包含了偵測 結(jié)合 rsl057910(CYP2C9*3)， rs3758581， rsl7110192, rs9332245 或 rsl592037(尤其 是rsl7110192, rsl057910和rs3758581)之單倍型的步驟，此單倍型會增加統(tǒng)計學(xué)上 的顯著相關(guān)性當(dāng)苯妥英引發(fā)之史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥/藥物疹合并嗜 伊紅血癥及全身癥狀病患與苯妥英耐受性對照組相比較時。沒有苯妥英耐受性個體帶 有結(jié)合的 rsl057910 (CYP2C9*3)，rs3758581，rsl7110192, rs9332245 或 rsl592037 (尤 其是rsl057910和rs3758581，0/95)，然而，近三分之一的苯妥英過敏患者帶有此組合 (30/96)。這些SNPs中有一些會造成胺基酸序列改變，例如CYP2C19exon7上造成錯義改變 的rs3758581顯著與苯妥英-史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥/藥物疹合并嗜伊紅 血癥及全身癥狀相關(guān)，進(jìn)一步更發(fā)現(xiàn)CYP2C9*3與苯妥英引發(fā)之史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性 表皮溶解癥/藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀有顯著相關(guān)性。
[0008] 在又一實(shí)施例中，本發(fā)明提供評估病患發(fā)生苯妥英引發(fā)之過敏反應(yīng)風(fēng)險的方法， 包括利用候選基因（CYP2Cs和HLA)檢測152位苯妥英藥物過敏病患，包含53例苯妥英-史 帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥，24例苯妥英-藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀和 75例苯妥英-皮膚紅疹，以及118位耐受性對照組病人為服用苯妥英超過3個月，但沒有任 何不良反應(yīng)。結(jié)果顯示高達(dá)30. 2 %的苯妥英-史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥病 患及37. 5%的苯妥英-藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀病患帶有CYP2C9*3基因型，相 比之下，14. 7%的苯妥英-皮膚紅疹病患及只有2. 5%的耐受性對照組病人帶有CYP2C9*3。 本發(fā)明也指出CYP2C9以及CYP2C19, CYP2C8和CYP2C18的基因變異型涉及苯妥英低下 代謝能力并會增加血漿中的藥物累積進(jìn)而導(dǎo)致過敏反應(yīng)。除了 CYP2CS的基因關(guān)連之外， HLA-A*0207, HLA-A*2402, HLA-B*1301，HLA-B*1502, HLA-B*4001，HLA-B*4609, HLA-B*5101， HLA-DRB1*1001或HLA-DRB1*1502也顯示出與苯妥英引發(fā)過敏反應(yīng)有顯著關(guān)系。因此，這些 數(shù)據(jù)表明CYP2C9/2C19/2C8/2C18的基因多型性或其缺陷之等位基因，苯妥英血中濃度和 特定之HLA基因型都有助于苯妥英引發(fā)嚴(yán)重皮膚藥物不良反應(yīng)。
【附圖說明】
[0009] 圖1說明苯妥英引發(fā)嚴(yán)重皮膚藥物不良反應(yīng)（SCARs)的全基因組關(guān)聯(lián)研究，其中 每個點(diǎn)代表一個SNP。x軸表示的SNP在染色體上的位置，y軸表示SNP在病患-對照關(guān)聯(lián) 研究的-l〇gl〇的顯著性差異。此研究包含58例苯妥英-史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮 溶解癥/藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀及198例一般人控制組。顯著性差異〈10 6的 SNP以紅色突顯。強(qiáng)度信號座落于在10號染色體上的CYP2C區(qū)域。
[0010] 圖2顯示苯妥英藥物不良反應(yīng)病患及耐受性控制組的苯妥英血中濃度。苯妥英的 正常治療濃度通常介于10-20微克/毫升，耐受性控制組的苯妥英血中濃度介于5-15微克 /毫升。然而，苯妥英-史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥患者的苯妥英血中濃度介于 40-50微克/毫升，高于耐受性控制組。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 以下詳細(xì)描述的目的在于作為一個根據(jù)本發(fā)明的各方面提供了現(xiàn)前的示例性描 述，而不是旨在表示本發(fā)明可以制備或利用的唯一形式。而可被理解的是，能在不同實(shí)施例 中被實(shí)施的相同或等同之功能及要素也包括在本發(fā)明的精神和范圍之內(nèi)。
[0012] 除非另有定義，在本文中所使用的所有技術(shù)性和科學(xué)性術(shù)語對于本發(fā)明所屬領(lǐng)域 的任一普通技術(shù)人員都具有通常理解的相同含義。雖然任何類似或等同于本發(fā)明所述的方 法、裝置和材料都能在本發(fā)明的實(shí)踐或試驗(yàn)中使用，現(xiàn)在開始描述該示例性方法、裝置和材 料。
[0013] 所有提及的發(fā)表文獻(xiàn)都被并入?yún)⒖嘉墨I(xiàn)并目的在于描述和揭露，舉例來說，在發(fā) 表文獻(xiàn)描述過的設(shè)計和方法可能被用來和本發(fā)明連結(jié)。本文上下及全文中所列出或討論的 發(fā)表文獻(xiàn)僅在提供其在本發(fā)明申請日之前的發(fā)現(xiàn)，不應(yīng)被解釋為承認(rèn)本發(fā)明人沒有資格由 于先前發(fā)明早于這些公開內(nèi)容。
[0014] 史蒂文生癥候群（SJS)和毒性表皮壞死溶解癥（TEN)的診斷是依照具共識性標(biāo) 準(zhǔn)的臨床癥狀來定義（Bastuji-Garin S，Rzany B等人，1993)。史帝文生強(qiáng)生癥候群被定 義為皮膚剝離面積小于體表面積的10%，重迭史帝文生強(qiáng)生癥候群_毒性表皮溶解癥為皮 膚剝離介于10-29%，毒性表皮溶解癥為大于等于30%。藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥 狀（DRESS)的診斷標(biāo)準(zhǔn)為皮疹（如彌漫性斑丘疹、剝脫性皮炎）伴隨嗜酸粒細(xì)胞增多、非 典型淋巴細(xì)胞循環(huán)，急性肝細(xì)胞損傷或腎功能惡化等癥狀（Kardaun SH，Sidoroff A等人， 2007)。符合由苯妥英引發(fā)史帝文生強(qiáng)生癥候群、毒性表皮溶解癥或藥物疹合并嗜伊紅血癥 及全身癥狀診斷標(biāo)準(zhǔn)之患者將經(jīng)長庚紀(jì)念醫(yī)院體系鑒定并選入本研究。
[0015]本發(fā)明發(fā)現(xiàn)特定CYP2C基因變異型，包括CYP2C9, CYP2C19, CYP2C8和CYP2C18涉 及苯妥英的低代謝活性并與苯妥英引發(fā)過敏反應(yīng)有關(guān)。除了CYP2C變異型，HLA-A*0207， HLA-A*2402, HLA-B*1301，HLA-B*1502, HLA-B*4001，HLA-B*4609, HLA-B*5101， HLA-DRB1*1001或HLA-DRB1*1502也被發(fā)現(xiàn)與苯妥英引發(fā)過敏反應(yīng)或皮膚藥物不良反應(yīng)有 顯著關(guān)聯(lián)。
[0016] 因此，本發(fā)明提供一種評估苯妥英引發(fā)過敏反應(yīng)風(fēng)險的方法，系檢測染色體10號 上CYP2C區(qū)域的單點(diǎn)核苷酸變異（SNPs)之存在，包括CYP2C9, CYP2C19, CYP2C8和CYP2C18。 透過58位苯妥英引發(fā)嚴(yán)重型皮膚藥物不良反應(yīng)患者（包括史帝文生強(qiáng)生癥候群、毒性表 皮溶解癥及藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀）和198位一般人對照組進(jìn)行全基因掃 目苗（Affymetrix 6. 0)，發(fā)現(xiàn)最有顯著相關(guān)的單點(diǎn)核苷酸變異（SNP)大部分皆都位于10號 染色體上的CYP2C區(qū)域（見圖1)，例如CYP2C18上的rsl7110192, rs7896133 ;CYP2C9上 的rsl7110321，rs9332093, rs9332245 ;CYP2C19上的rs3758581，rs2860905, rs4086116 ; 和CYP2C8上的rs7899038, rsl592037, rsl934952, rsll572139, rs6583967(見表1)。 其他位于CYP2C區(qū)域附近之SNP如rs2274222, rslll88183, rs7921561，rsl0882544， rs7084271,rs644437,rsl2769577,rs617848,rsl0882551,rs585381,rs648638,rs664093, rsl2262878,rsl7524438,rsl2413028,rslll88246,rsl2415795, rsll