胞，其中將細(xì)胞(可能從貯存物取出）接種進(jìn)適合于促進(jìn) 生長(zhǎng)和高生存力的培養(yǎng)基中。通過(guò)將新鮮培養(yǎng)基加入宿主細(xì)胞培養(yǎng)物中，可以將細(xì)胞維持 在生長(zhǎng)期合適的時(shí)間段。
[0062] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，設(shè)計(jì)了補(bǔ)料分批或傳代細(xì)胞培養(yǎng)條件以增強(qiáng)處于細(xì)胞 培養(yǎng)的生長(zhǎng)期的哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)。在生長(zhǎng)期中，在使生長(zhǎng)最大化的條件下培養(yǎng)細(xì)胞一 段時(shí)間。培養(yǎng)條件諸如溫度、PH、溶解氧（d02)等是與特定宿主一起使用的那些，且是普通 技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的。通常，使用酸（例如，C02)或堿（例如，Na2C03或NaOH)，將pH調(diào)至 約6. 5和7. 5之間的水平。用于培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞諸如CH0細(xì)胞的合適溫度范圍是在約 30-38°C之間，且優(yōu)選約37°C，且合適的d02是在空氣飽和度的5-90%之間。
[0063] 在特別的階段，可以使用細(xì)胞接種細(xì)胞培養(yǎng)的生產(chǎn)期或步驟。可選地，如上所述， 所述生產(chǎn)期或步驟可以與接種或生長(zhǎng)期或步驟連續(xù)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述細(xì)胞培養(yǎng)是 補(bǔ)料分批細(xì)胞培養(yǎng)。
[0064] "多肽"、"肽"和"蛋白"在本文中互換地用于表示氨基酸殘基的聚合物。多肽可 以具有天然的（組織來(lái)源的）起源，從原核或真核細(xì)胞制備物重組或天然表達(dá)，或經(jīng)由合 成方法化學(xué)產(chǎn)生。該術(shù)語(yǔ)適用于這樣的氨基酸聚合物：其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基是對(duì)應(yīng) 的天然存在的氨基酸的人工化學(xué)模擬物，以及適用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存 在的氨基酸聚合物。氨基酸模擬物表示這樣的化學(xué)化合物：其結(jié)構(gòu)不同于氨基酸的一般化 學(xué)結(jié)構(gòu)，但是其作用方式類似于天然存在的氨基酸。在科學(xué)和專利文獻(xiàn)中充分描述了非天 然殘基；在下面描述了可用作天然氨基酸殘基的模擬物的幾種示例性非天然組合物和指 南。芳族氨基酸的模擬物可以通過(guò)用例如以下氨基酸替換而產(chǎn)生：D_或L-萘基（naphyl) 丙氨酸；D-或L-苯基甘氨酸；D-或L-2噻吩基丙氨酸；D-或L-l、-2、3-或4-芘基丙氨 酸；D-或L-3噻吩基丙氨酸；D-或L- (2-吡啶基）-丙氨酸；D-或L- (3-吡啶基）-丙氨酸； D-或L-(2-吡嗪基）-丙氨酸；D-或L-(4-異丙基）-苯基甘氨酸：D-(三氟甲基）-苯基甘 氨酸；D-(三氟甲基）-苯丙氨酸：D-對(duì)氟-苯丙氨酸；D-或L-對(duì)聯(lián)苯基苯丙氨酸；K-或 L-對(duì)甲氧基-聯(lián)苯基苯丙氨酸：D-或L-2-吲哚（烷基）丙氨酸；和D-或L-烷基丙氨酸 (ainine)，其中烷基可以是被取代的或未被取代的甲基、乙基、丙基、己基、丁基、戊基、異丙 基、異丁基、sec-isotyl、異戊基或非酸性的氨基酸。非天然氨基酸的芳族環(huán)包括，例如，噻 唑基、苯硫基、吡唑基、苯并咪唑基、萘基、呋喃基、吡咯基和吡啶基芳族環(huán)。
[0065]本文中使用的"肽"包括為本文具體舉例說(shuō)明的那些肽的保守變異的肽。本文中使 用的"保守變異"表示使用另一種生物學(xué)上相似的殘基替代氨基酸殘基。保守變異的例子包 括、但不限于，一個(gè)疏水殘基諸如異亮氨酸、纈氨酸、亮氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、苯 丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸、正亮氨酸或甲硫氨酸置換另一個(gè)疏水殘基，或一個(gè)極性殘 基置換另一個(gè)極性殘基，諸如精氨酸置換賴氨酸、谷氨酸置換天冬氨酸、或谷氨酰胺置換天 冬酰胺等。可互相置換的中性親水氨基酸包括天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸和蘇氨酸。"保 守變異"還包括使用取代的氨基酸替代未取代的母體氨基酸，前提條件是，針對(duì)取代的多肽 的抗體也與未取代的多肽發(fā)生免疫反應(yīng)。這樣的保守置換是在本發(fā)明的肽的種類的定義之 內(nèi)。本文中使用的"陽(yáng)離子的"表示在pH7.4具有凈正電荷的任何肽。通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人 員已知的和本文描述的標(biāo)準(zhǔn)方法，可以確定肽的生物活性。
[0066] 當(dāng)關(guān)于蛋白使用"重組"時(shí)，表示該蛋白已經(jīng)通過(guò)引入異源核酸或蛋白或者改變天 然核酸或蛋白進(jìn)行了修飾。
[0067]本文中使用的"治療性蛋白"表示這樣的任何蛋白和/或多肽：其可以施用給哺乳 動(dòng)物以引起組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或人的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)應(yīng)答，所述應(yīng)答是例如研究人員或臨床醫(yī) 師所尋求的。治療性蛋白可以引起超過(guò)一種生物學(xué)或醫(yī)學(xué)應(yīng)答。此外，術(shù)語(yǔ)"治療有效量" 是指這樣的任何量：與未接受該量的相應(yīng)受試者相比，該量導(dǎo)致、但不限于疾病、病癥或副 作用的痊愈、預(yù)防或改善，或者疾病或障礙的進(jìn)展速率的下降。該術(shù)語(yǔ)在其范圍內(nèi)還包括有 效地增強(qiáng)正常生理功能的量、以及在患者中有效地造成增強(qiáng)或有助于第二種藥學(xué)試劑的治 療效果的生理功能的量。
[0068]本文中鑒定的所有"氨基酸"殘基呈天然的L-構(gòu)型。與標(biāo)準(zhǔn)多肽命名法一致，氨 基酸殘基的縮寫(xiě)如下： 1個(gè)字母 3個(gè)字母 氨基酸 Y Tyr L-酪氨酸 G Gly L-甘氨酸 F Phe L-苯丙氨酸 M Met L-甲硫氨酸 A Ala L-丙氨酸 S Ser L_絲氨酸 I lie L-異亮氨酸 LLeu 亮氨酸 TThrL-蘇氨酸 VValL-纈氨酸 PProL-脯氨酸 KLysL-賴氨酸 HHisL-組氨酸 QGinL_谷氨酰胺 EGluL-谷氨酸 ffTrpL-色氨酸 RArgL-精氨酸 DAspL-天冬氨酸 NAsnL-天冬酰胺 CCysL-半胱氨酸。
[0069] 應(yīng)當(dāng)指出，所有的氨基酸殘基序列在本文用式表示，所述式從左至右的方向?yàn)閺?氨基端至羧基端的常規(guī)方向。
[0070] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述多肽是抗原結(jié)合多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗原結(jié) 合多肽選自可溶性的受體、抗體、抗體片段、免疫球蛋白單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域、Fab、F(ab'）2、Fv、 二硫鍵連接的Fv、scFv、閉合構(gòu)象多特異性抗體、二硫鍵連接的scFv或雙抗體。
[0071] 本文中使用的術(shù)語(yǔ)"抗原結(jié)合多肽"表示能夠結(jié)合抗原的抗體、抗體片段和其它蛋 白構(gòu)建體。
[0072] 術(shù)語(yǔ)Fv、Fc、Fd、Fab或F(ab)2使用它們的標(biāo)準(zhǔn)含義（參見(jiàn)，例如，Harlow等人， AntibodiesALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory, (1988))。
[0073]"嵌合抗體"表示一類經(jīng)工程改造的抗體，其含有來(lái)源于供體抗體的天然存在的可 變區(qū)（輕鏈和重鏈）以及來(lái)源于受體抗體的輕鏈和重鏈恒定區(qū)。
[0074]"人源化抗體"表示一類經(jīng)工程改造的抗體，其具有來(lái)源于非人供體免疫球蛋白的 它的CDR，該分子的剩余的免疫球蛋白衍生的部分來(lái)源于一種（或多種）人免疫球蛋白。此 外，可以改變框架支持殘基以保持結(jié)合親和力（參見(jiàn)，例如，Queen等人，Proc.Natl.Acad SciUSA, 86:10029-10032 (1989)，Hodgson等人，Bio/Technology，9:421 (1991))〇 合適的人受體抗體可以是這樣的抗體：其通過(guò)與供體抗體的核苷酸和氨基酸序列的同源性 而選自常規(guī)數(shù)據(jù)庫(kù)，例如，KABAT.RTM.數(shù)據(jù)庫(kù)、LosAlamos數(shù)據(jù)庫(kù)和SwissProtein數(shù)據(jù) 庫(kù)。特征在于與供體抗體的框架區(qū)的同源性（在氨基酸基礎(chǔ)上）的人抗體可能適于為供體 CDR的插入提供重鏈恒定區(qū)和/或重鏈可變框架區(qū)?？梢砸灶愃频姆绞竭x擇能夠提供輕鏈 恒定或可變框架區(qū)的合適受體抗體。應(yīng)當(dāng)指出，不要求受體抗體重鏈和輕鏈源自相同受體 抗體?，F(xiàn)有技術(shù)描述了幾種生產(chǎn)這樣的人源化抗體的方法一參見(jiàn)例如EP-A-0239400和 EP-A-054951。
[0075] 術(shù)語(yǔ)"供體抗體"表示這樣的抗體（單克隆的和/或重組的）：其將它的可變區(qū)、 CDR或它們的其它功能片段或類似物的氨基酸序列貢獻(xiàn)給第一免疫球蛋白配偶體，從而提 供改變的免疫球蛋白編碼區(qū)并產(chǎn)生表達(dá)的改變的抗體，該抗體具有所述供體抗體表征的抗 原特異性和中和活性。
[0076] 術(shù)語(yǔ)"受體抗體"表示與供體抗體異源的抗體（單克隆的和/或重組的），其將編 碼它的重鏈和/或輕鏈框架區(qū)和/或它的重鏈和/或輕鏈恒定區(qū)的全部（或任何部分，但 在一些實(shí)施方案中全部）氨基酸序列貢獻(xiàn)給第一免疫球蛋白配偶體。在某些實(shí)施方案中， 人抗體是受體抗體。
[0077] "CDR"被定義為抗體的互補(bǔ)性決定區(qū)氨基酸序列，其為免疫球蛋白重鏈和輕鏈的 高變區(qū)。參見(jiàn)，例如，Kabat等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest, 第 4 版，U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NationalInstitutesof Health(1987)。在免疫球蛋白的可變部分中存在三個(gè)重鏈和三個(gè)輕鏈CDR(或CDR區(qū)）。因 此，本文中使用的"CDR"表示所有三個(gè)重鏈CDR或所有三個(gè)輕鏈CDR(或如果合適，所有的重 鏈CDR和所有的輕鏈CDR)。抗體的結(jié)構(gòu)和蛋白折疊可能意味著其它殘基被視作抗原結(jié)合區(qū) 的組成部分，且被技術(shù)人員理解為這樣。參見(jiàn)例如Chothia等人，（1989)Conformations ofimmunoglobulinhypervariableregions;Nature342,第 877-883 頁(yè)。
[0078] 本文中使用的術(shù)語(yǔ)"結(jié)構(gòu)域"表示一種折疊的蛋白結(jié)構(gòu)，其具有獨(dú)立于該蛋白的其 它部分的三級(jí)結(jié)構(gòu)。通常，結(jié)構(gòu)域會(huì)引起蛋白的不同功能特性，且在許多情況下，可以將結(jié) 構(gòu)域添加、除去或轉(zhuǎn)移至其它蛋白，而不損失所述蛋白的剩余部分和/或所述結(jié)構(gòu)域的功 能。"抗體單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域"是一種折疊的多肽結(jié)構(gòu)域，其包含表征抗體可變結(jié)構(gòu)域的序列。 因此，它包括完全的抗體可變結(jié)構(gòu)域和修飾的可變結(jié)構(gòu)域，例如，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)已經(jīng)被 這樣的序列替換：所述序列不是表征抗體可變結(jié)構(gòu)域的序列，或已被截短的抗體可變結(jié)構(gòu) 域，或者包含N-端或C-端延伸，以及至少保留全長(zhǎng)結(jié)構(gòu)域的結(jié)合活性和特異性的可變結(jié)構(gòu) 域的折疊的片段。
[0079] 短語(yǔ)"免疫球蛋白單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域"表示獨(dú)立于不同的V區(qū)域或結(jié)構(gòu)域而特異性 地結(jié)合抗