一種蒲公英多糖的提取方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種蒲公英多糖的提取方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]蒲公英，性平、味甘、微苦?？汕鍩峤舛荆[散結(jié)。有顯著的催乳作用，治療乳腺炎十分有效。無(wú)論煎汁口服，還是搗泥外敷，皆有效驗(yàn)。此外，蒲公英還有利尿、緩瀉、退黃疸、利膽、助消化，增食欲，治療胃及十二指腸潰瘍，還可防治各種腫瘤。它具有豐富的維生素A、C及礦物質(zhì)，對(duì)消化不良、便秘都有改善的作用。另外葉子還有改善濕疹、舒緩皮膚炎、關(guān)節(jié)不適的凈血功效，根則具有消炎作用，可以治療膽結(jié)石、風(fēng)濕，花朵煎成藥汁可以去除雀斑，可說(shuō)是非常有用的一種香藥草。蒲公英植物體中含有蒲公英醇、蒲公英素、膽堿、有機(jī)酸、菊糖等多種健康營(yíng)養(yǎng)成分，有利尿、緩瀉、退黃疸、利膽等功效。蒲公英同時(shí)含有蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、微量元素及維生素等，有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，可生吃、炒食、做湯，是藥食兼用的植物。蒲公英屬植物富含留醇、棕櫚酸和多糖，多糖是重要的信息分子，具有抗腫瘤、抗病毒、抗衰老、抗輻射、抗突變、降血糖、增強(qiáng)免疫等多方面的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了彌補(bǔ)已有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種蒲公英多糖的提取方法及其應(yīng)用。
[0004]—種蒲公英多糖的提取方法，其具體步驟為:
(1)將全草蒲公英洗凈，晾干，45°C烘干，粉碎，過(guò)60~100目篩；
(2)取干粉100g，按料液比1:8~12，加入去離子水，95~100°C水浴，回流4~5次，每次I小時(shí)，過(guò)濾，得提取液；
(3)向提取液中緩慢加入環(huán)己酮，邊加入邊攪拌，至加入量為提取液體積的8~12%，1000轉(zhuǎn)/分鐘，磁力攪拌20~30分鐘，靜置140~160分鐘，10000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，取上清，40~45°C真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/3，收集環(huán)己酮，重復(fù)使用；
(4)向3)得到的上清中加入無(wú)水乙醇，邊加入邊攪拌，至乙醇體積占總體積的85%，置于4°C冰箱中，靜置過(guò)夜，8000轉(zhuǎn)/分鐘，離心15分鐘，取沉淀；
(5)向4)得到的沉淀中加入3~4倍量的去離子水，真空旋轉(zhuǎn)濃縮至無(wú)乙醇，得粗多糖溶液；
(6)將粗多糖溶液倒入7000道爾頓的透析袋中，將透析袋置于裝滿(mǎn)去離子水的燒杯中，4°C透析36~48小時(shí)，更換燒杯中的去離子水3~4次，透析袋可以重復(fù)使用；
(7)將透析后的粗多糖溶液以0.5ml/min的速率上樣于DEAE-52纖維素層析柱，依次用lmol/L的NaCl溶液及去離子水洗脫，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法檢測(cè)多糖含量，繪制洗脫曲線(xiàn)，根據(jù)洗脫曲線(xiàn)收集各部位多糖洗脫液，DPPH法測(cè)定各部位多糖的抗氧化活性，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后真空冷凍干燥；
(8)將經(jīng)DEAE-52纖維素層析柱初步分離純化的各部位多糖用去離子水配制成5mg/ml的溶液，吸取2ml上樣于SephadexG-ΙΟΟ凝膠層析柱，用去離子水進(jìn)行洗脫，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法檢測(cè)多糖含量，繪制洗脫曲線(xiàn)，合并糖峰洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后真空冷凍干燥，得純化蒲公英多糖。
[0005]優(yōu)選地，所述步驟I)將蒲公英粉碎后過(guò)80目篩。
[0006]優(yōu)選地，所述步驟2)蒸餾水回流的料液比1:12，100°C水浴，回流5次。
[0007]本發(fā)明所述的一種蒲公英多糖的應(yīng)用，是以所述蒲公英多糖作為抗氧化活性成分用于制備保健食品或藥品。
[0008]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:
1、本發(fā)明提供的一種蒲公英多糖的提取方法及其應(yīng)用，提取方法簡(jiǎn)單，提取率為8.58%，純度為86.3%，用環(huán)己酬沉淀蛋白，去除提取液中的蛋白質(zhì)，去除率尚，能夠明顯提尚多糖提取液的純度，而且使用量少，節(jié)約成本；
2、將蒲公英粉碎后過(guò)篩，提高粉碎度，細(xì)胞的破碎程度高，提高提取率；用熱水代替乙醇進(jìn)行回流提取，減少提取液中的脂肪含量，提高多糖的純度，減少后續(xù)純化過(guò)程，降低成本；
3、利用DEAE-52纖維素層析柱和SephadexG-ΙΟΟ凝膠層析柱對(duì)粗多糖進(jìn)行分離純化，不使用有機(jī)溶劑，減少純化過(guò)程中對(duì)多糖的浪費(fèi)，提高提取率，有利于分管收集，測(cè)定不同部位的糖含量及抗氧化活性；
4、蒲公英多糖可作為抗氧化活性成分用于制備保健食品或藥品，抗氧化作用明顯，安全，無(wú)副作用，具有很大的市場(chǎng)價(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景。
【附圖說(shuō)明】
[0009]圖1為本發(fā)明所述的DEAE-52纖維素層析柱洗脫曲線(xiàn)圖；
圖2為本發(fā)明所述的SephadexG-ΙΟΟ凝膠層析柱各收集峰的抗氧化活性圖；
圖3為本發(fā)明所述的SephadexG-ΙΟΟ凝膠層析柱洗脫曲線(xiàn)圖；
圖4為本發(fā)明所述的SephadexG-ΙΟΟ凝膠層析柱洗脫曲線(xiàn)圖；
圖5為本發(fā)明所述的SephadexG-ΙΟΟ凝膠層析柱洗脫曲線(xiàn)圖；
圖6為本發(fā)明所述的SephadexG-ΙΟΟ凝膠層析柱洗脫曲線(xiàn)圖；
圖7為本發(fā)明所述的SephadexG-ΙΟΟ凝膠層析柱洗脫曲線(xiàn)圖；
圖8為本發(fā)明所述的SephadexG-ΙΟΟ凝膠層析柱洗脫曲線(xiàn)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0010]下面用具體實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明。
[0011]實(shí)施例1
一種蒲公英多糖的提取方法，其具體步驟為:
(1)將全草蒲公英洗凈，晾干，45°C烘干，粉碎，過(guò)80目篩；
(2)取干粉100g，按料液比1:12，加入去離子水，100°C水浴，回流5次，每次I小時(shí)，過(guò)濾，得提取液；
(3)向提取液中緩慢加入環(huán)己酮，邊加入邊攪拌，至加入量為提取液體積的12%，1000轉(zhuǎn)/分鐘，磁力攪拌20分鐘，靜置160分鐘，10000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，取上清，45°C真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/3，收集環(huán)己酮，重復(fù)使用；
(4)向3)得到的上清中加入無(wú)水乙醇，邊加入邊攪拌，至乙醇體積占總體積的85%，置于4°C冰箱中，靜置過(guò)夜，8000轉(zhuǎn)/分鐘，離心15分鐘，取沉淀；
(5)向4)得到的沉淀中加入3倍量的去離子水，真空旋轉(zhuǎn)濃縮至無(wú)乙醇，得粗多糖溶液；
(6)將粗多糖溶液倒入7000道爾頓的透析袋中，將透析袋置于裝滿(mǎn)去離子水的燒杯中，4°C透析48小時(shí)，更換燒杯中的去離子水4次，透析袋可以重復(fù)使用；
(7)將透析后的粗多糖溶液以0.5ml/min的速率上樣于DEAE-52纖維素層析柱，依次用lmol/L的NaCl溶液及去離子水洗脫，分管收集，收集液用苯酚_硫酸法檢測(cè)多糖含量，繪制洗脫曲線(xiàn)(見(jiàn)圖1)，根據(jù)洗脫曲線(xiàn)收集各部位多糖洗脫液，DPPH法測(cè)定各部位多糖的抗氧化活性(見(jiàn)圖2)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后真空冷凍干燥；
(8)將經(jīng)DEAE-52纖維素層析柱初步分離純化的各部位多糖用去離子水配制成5mg/ml的溶液，吸取2ml上樣于SephadexG-ΙΟΟ凝膠層析柱，用去離子水進(jìn)行洗脫，分管收集，收集液用苯酚-硫酸法檢測(cè)多糖含量(見(jiàn)圖3~8)，繪制洗脫曲線(xiàn)，合并糖峰洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后真空冷凍干燥，得純化蒲公英多糖，提取率為全草質(zhì)量的8.58%，純度為86.3%。
[0012]本發(fā)明所述的一種蒲公英多糖的應(yīng)用，是以所述蒲公英多糖作為抗氧化活性成分用于制備保健食品或藥品。