一種羅伊氏乳桿菌及其應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物制劑領(lǐng)域，特別是涉及一種羅伊氏乳桿菌及其應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 羅伊氏乳桿菌，也稱路氏乳桿菌，與人類、動物的生活關(guān)系密切，是一種常見于人、 豬、家禽及其他動物腸道中的乳酸菌，能通過胃并定植于腸道發(fā)揮有益作用，例如擁有維 持腸道內(nèi)菌群的平衡、促進營養(yǎng)物質(zhì)吸收、緩解乳糖不耐癥及抑制腫瘤細胞的形成等多種 功能，目前研究報道較多的應用領(lǐng)域包括食品、飼料、醫(yī)療保健、化妝品、美容、水產(chǎn)養(yǎng)殖、工 農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、生物防腐劑、益生菌制劑等等。
[0003] 羅伊氏乳桿菌的多種生理功能，可作為宿主氮的來源。但當菌體耐酸，耐膽鹽能力 不足時進不到腸道，就會失去它的作用。
[0004] 因此，要發(fā)揮這些益生作用，須首先能耐受人體胃腸的消化過程，能抵御胃液和膽 汁對其的殺滅作用。Berrada等報導食物在胃中排空的時間是90min，胃內(nèi)PH值為3. 0,最 低可達1. 3,人體小腸膽汁液濃度在0. 03% -0. 3%之間。
[0005] 本發(fā)明針對人體及動物腸胃的生理條件從健康豬腸道中選育一株可以耐受人體 及動物胃酸和膽鹽濃度的羅伊氏乳桿菌，從而可以在人體及動物體內(nèi)定植，發(fā)揮益生作用。 同時該菌株對大腸菌有較好的抑制作用，可起到調(diào)節(jié)腸道微生物菌群的功能。
[0006] 根據(jù)目前的相關(guān)報導，要得到能夠耐人體及動物膽鹽的羅伊氏乳桿菌的方法有三 種：一是從自然界中篩選，二是從傳統(tǒng)發(fā)酵食品中篩選，三是對現(xiàn)有菌種進行馴化。本發(fā)明 針對人體及動物腸胃的生理條件進行篩選，培育一株可以耐受人體及動物體胃酸和膽鹽濃 度的羅伊氏乳桿菌，從而有可能在人體及動物體內(nèi)定植，發(fā)揮其益生作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種來源于健康豬腸道的羅伊氏乳桿菌，使得該羅伊氏乳 桿菌對酸、膽鹽、有較好的耐受性，對大腸桿菌有較強的抑制效果，從而更加適于實用。
[0008] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種羅伊氏乳桿菌的應用，該羅伊氏乳桿菌應用廣 泛。
[0009] 本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題是通過采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的。依據(jù)本 發(fā)明提出的一種羅伊氏乳桿菌，也稱路氏乳桿菌，它是羅伊氏乳桿菌LZ262,保藏號為 CGMCCNo. 11240,保藏日期為2015年08月14日。保藏單位是中國微生物菌種保藏管理委 員會普通微生物中心。
[0010] 本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題還可采用以下技術(shù)措施進一步實現(xiàn)。
[0011] 本發(fā)明的第一方面，所述的羅伊氏乳桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基有較高的活菌量。
[0012] 本發(fā)明的第二方面，所述的羅伊氏乳桿菌對酸、膽鹽有較好的耐受性，可以在人體 及動物體內(nèi)定植。
[0013] 本發(fā)明的第三方面，所述的羅伊氏乳桿菌在噴霧干燥后有較高的存活，具有一定 的耐溫性，可以在顆粒飼料生產(chǎn)中直接參與造粒。
[0014] 本發(fā)明的第四方面，所述的羅伊氏乳桿菌對大腸桿菌有較強的抑制作用。
[0015] 本發(fā)明的第五方面，所述的羅伊氏乳桿菌對指定乳酸菌有良好的復配性。所述 的羅伊氏乳桿菌LZ262與下列乳酸菌之一或一種以上復配，有協(xié)同生長作用；嗜酸乳桿 菌（Lactobacillusacidophius);德氏乳桿菌保加利亞種（Lactobacillusdelbrueckii subsp.bulgaricus);干酪乳桿菌亞種（Lactobacilluscaseisubsp.Casei);嗜熱鏈球 菌（Streptococcusthermophius);乳酸鏈球菌（Streptococcuslactis);乳酸乳球菌乳 酸亞種（Lactococcuslactissubsp.lactis);動物雙歧桿菌乳亞種（Bifidobacterium animalissubsp.lactis);植物乳桿菌（Lactobacillusplantarum) 〇
[0016] 本發(fā)明的第六方面，所述的羅伊氏乳桿菌有較強的產(chǎn)蛋白酶能力。
[0017] 本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題還采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)。依據(jù)本發(fā)明提出的 一種羅伊氏乳桿菌的應用，其中所述的羅伊氏乳桿菌LZ262用于動物飼料添加劑、抑菌液、 食品、保健品和水產(chǎn)養(yǎng)殖。
[0018] 前述的羅伊氏乳桿菌的應用，其中所述的羅伊氏乳桿菌LZ262用于動物飼料添加 劑時是將所述羅伊氏乳桿菌LZ262和其它益生菌組配，其中所述羅伊氏乳桿菌LZ262與其 它益生菌之間的比例為：羅伊氏乳桿菌LZ262:嗜酸乳酸桿菌：干酪乳桿菌：植物乳桿菌= (1 ~2) : (3 ~5) : (2 ~3) : (1 ~2)。
[0019] 前述的羅伊氏乳桿菌的應用，其中所述的羅伊氏乳桿菌LZ262用于動物飼料添加 劑進行育肥豬飼喂，結(jié)果是有效地促進育肥豬的的生長，降低仔豬的腹瀉率，抑制有害菌群 和刺激腸道免疫反應方面發(fā)揮重要作用，降低豬的死亡率。
[0020] 借由上述技術(shù)方案，本發(fā)明至少具有下列優(yōu)點：本發(fā)明從健康原料中分離得到，經(jīng) 鑒定為羅伊氏乳桿菌；以上發(fā)明的得到的羅伊氏乳桿菌對人體和動物體腸胃環(huán)境有很好的 耐受性，并且可以產(chǎn)蛋白酶幫助消化，有較強的耐溫性，與乳酸菌有較好的協(xié)同生長作用， 擴大了該菌的應用范圍，發(fā)酵有較高的活菌量，減少了發(fā)酵成本。
[0021] 此外，所述羅伊氏乳桿菌對大腸桿菌有較好的抑制作用，通過改良發(fā)酵配方有較 高的發(fā)酵密度，噴霧干燥后有較高的存活率。
【附圖說明】
[0022] 圖1是本發(fā)明羅伊氏乳桿菌LZ262的光學顯微鏡圖。
【具體實施方式】
[0023] 實例為：這種羅伊氏乳桿菌，它是羅伊氏乳桿菌（Lactobacillusreuteri)LZ262， 保藏號為CGMCCNo. 11240,保藏日期為2015年08月14日，保藏單位：中國微生物菌種保藏 管理委員會普通微生物中心。
[0024] 羅伊氏乳桿菌LZ262的分離及鑒定方法如下：
[0025] 1、分離方法
[0026] 稱取樣品（健康豬腸道）5g至45ml無菌緩沖鹽溶液中（加適量玻璃珠）作為母 液，震蕩l〇min充分混勻，以無菌緩沖鹽溶液做梯度稀釋，選擇三到五個合適的梯度，吸取 0.lml于MRS培養(yǎng)基中進行涂布分離，每個稀釋梯度做兩個重復。培養(yǎng)皿放入37°C培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)48~72小時后挑選光滑、凸園、邊緣整齊、白色或乳白色菌落鏡檢。對疑似菌落按 上述步驟在MRS培養(yǎng)基中進行再此分離、純化，直到菌落完全純化。
[0027] 形態(tài)學鑒定：革蘭氏染色，細胞形態(tài)，有無芽孢
[0028] 生理生化鑒定：接觸酶，氧化酶，碳水化合物產(chǎn)酸
[0029] 分子生物學鑒定：16SrRNA序列分析
[0030] 2?實驗結(jié)果
[0031] 2. 1生理生化特性及形態(tài)特征
[0032] 表1 LZ262的生理生化特性
[0033]
[0034] 2. 2 16S rRNA序列測定結(jié)果
[0035] ATACATGCAGTCGTACGCACTGGCCCAACTGATTGATGGTGCTTGCACCTGATTGACGATGGATCACCA GTGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTAGGTAACCTGCCCCGGAGCGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAAT ACCGCATAACAACAAAAGCCACATGGCTTTTGTTTGAAAGATGGCTTTGGCTATCACTCTGGGATGGACCTGCGGTG CATTAGCTAGTTGGTAAGGTAACGGCTTACCAAGGCGATGATGCATAGCCGAGTTGAGAGACTGATCGGCCACAATG GAACTGAGACACGGTCCATACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGGCGCAAGCCTGATGGAGC AACACCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAGCTCTGTTGTTGGAGAAGAACGTGCGTGAGAGTAACTGTT CACGCAGTGACGGTATCCAACCAGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGC GTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTGCTTAGGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTTAACCGA AGAAGTGCATCGGAAACCGGGCGACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGTAG ATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCG AACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGC CGGAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCG CACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTACCA