一種小分子蛹蟲草活性肽及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物活性物質(zhì)提取領(lǐng)域，具體涉及一種小分子蛹蟲草活性肽及其制備 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蛹蟲草又名北冬蟲夏草、北蟲草等，是一種名貴的中藥和高級(jí)滋補(bǔ)品，其活性成分 和功能與著名的藥用真菌冬蟲夏草極其相似，含有蟲草多肽、蟲草腺苷，蟲草酸，蟲草多糖 以及多種氨基酸、維生素、微量元素等生物活性物質(zhì)。蛹蟲草和野生冬蟲夏草的關(guān)鍵功效成 分一致，但在含量上和某些特殊的功效成分上，蛹蟲草是冬蟲夏草的10倍至幾十倍。蛹蟲 草中的蟲草素是冬蟲夏草的35倍，蛹蟲草中的腺嘌呤是冬蟲夏草的40倍，蛹蟲草中的核苷 酸總含量是野生冬蟲夏草的6. 25倍。
[0003] 蛹蟲草具有抗腫瘤、提高機(jī)體免疫功能、抗氧化、抗衰老、保護(hù)肝腎及心血管等方 面多種生理功能。蛹蟲草的蟲草素、蟲草多糖、蟲草酸方面的生產(chǎn)研究較多，但是對(duì)于蛋白 質(zhì)活性肽方面的生產(chǎn)研究較少。蛹蟲草中含蛋白質(zhì)26%、糖28%、脂肪2. 9%，蛋白質(zhì)含量 比較豐富。
[0004] 蛹蟲草中含豐富的蛋白質(zhì)和氨基酸，通過酶解蛋白質(zhì)，可以生產(chǎn)多種具有生理活 性的多肽氮和氨基酸，這些肽可以被人體直接吸收利用，進(jìn)而更加快速有效的調(diào)節(jié)身體機(jī) 制，促進(jìn)人體健康。在民間，蛹蟲草多通過煎煮燉等方式服用，食用和攜帶不方便。目前市 場上利用蛹蟲草生產(chǎn)的相關(guān)產(chǎn)品，大多數(shù)均為蛹蟲草粉碎細(xì)磨，雖然顆粒較小，但是其中仍 含有大量纖維素和大分子蛋白質(zhì)等物質(zhì)，達(dá)不到直接吸收的效果，同時(shí)因?yàn)槔w維素等物質(zhì) 的包埋，也影響了功效成分的吸收利用。目前市場上還未出現(xiàn)通過酶解蛹蟲草子實(shí)體的方 法來制備蛹蟲草肽粉的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種小分子蛹蟲草活性 肽及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：一種小分子蛹蟲草活性肽的制備方 法，依次包括以下步驟：干燥粉碎、提取、酶解、過濾和干燥；
[0007] 所述酶解包括一次酶解、二次酶解和三次酶解，經(jīng)過三次酶解獲得小分子蛹蟲草 活性肽溶液；所述一次酶解過程為：向蛹蟲草經(jīng)過提取獲得的蛹蟲草提取液中加入相當(dāng)于 提取所用蛹蟲草干重〇. 5% -1 %的0 -葡聚糖酶，調(diào)節(jié)溶液pH為4-5. 5, 一次酶解溫度為 40°C -60°C，一次酶解時(shí)間為4h-6h。
[0008] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明利用0 _葡聚糖酶酶解技術(shù)破除了蛹蟲草堅(jiān)硬的細(xì) 胞壁，有利于細(xì)胞內(nèi)溶物的溶出，有利于提取過程的順利進(jìn)行，提高蛋白質(zhì)、蟲草多糖及蟲 草腺苷等功效成分的提取效率；本發(fā)明利用多次酶解方法對(duì)蛹蟲草進(jìn)行酶解，可對(duì)蛹蟲草 中的蛋白質(zhì)進(jìn)行充分酶解。
[0009] 在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)。
[0010] 進(jìn)一步，所述二次酶解過程為：將經(jīng)過一次酶解后的酶解液煮沸l(wèi)rnin-5min后降 溫離心，離心除雜后，在一次酶解液中加入木瓜蛋白酶進(jìn)行二次酶解，木瓜蛋白酶的加入量 相當(dāng)于蛹蟲草干重0. 5% -1 % ;調(diào)節(jié)酶解液的pH為6-7. 5,二次酶解溫度為45°C -55°C，二 次酶解時(shí)間為2h-4h。
[0011] 進(jìn)一步，所述三次酶解過程為：將經(jīng)過二次酶解后的酶解液中加入相當(dāng)于蛹蟲草 干重1% -1. 5%的胰蛋白酶，調(diào)節(jié)酶解液的pH值為7. 5-8. 5,三次酶解溫度為45°C -55°C， 三次酶解時(shí)間為4h-6h。
[0012] 進(jìn)一步，所述過濾過程為：將經(jīng)過酶解獲得的小分子蛹蟲草活性肽溶液煮沸 lmin-5min后降至室溫，將煮沸滅酶后的小分子蛹蟲草活性肽溶液經(jīng)過板框壓濾，去除溶液 中的大分子成分和不溶性成分。
[0013] 進(jìn)一步，所述干燥粉碎過程為：將蛹蟲草干燥并粉碎至40目-60目。
[0014] 進(jìn)一步，所述提取過程為：將經(jīng)過干燥粉碎的蛹蟲草粉加入提取罐中，往提取罐中 加入蒸餾水并攪拌均勻，提取罐中的固液比為1:8-10。
[0015] 采用上述進(jìn)一步方案的有益效果是：采用低溫水提與酶解結(jié)合，避免了傳統(tǒng)工藝 中高溫提取對(duì)蛹蟲草中活性物質(zhì)的破壞，保證了腺苷等功效成分的生物活性，同時(shí)大大縮 短了提取時(shí)間，提高了生產(chǎn)效率。
[0016] 進(jìn)一步，所述干燥過程采用噴霧干燥。
[0017] 采用上述方法即制得本發(fā)明所述的一種小分子蛹蟲草活性肽，所述小分子蛹蟲草 活性肽為平均分子量小于1000道爾頓的低聚肽。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 結(jié)合以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明， 并非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0019] 實(shí)施例1
[0020] 本實(shí)施例的一種小分子蛹蟲草活性肽的制備方法，具體包括以下步驟：
[0021] 1)干燥粉碎：將蛹蟲草干燥并粉碎至40目。
[0022] 2)提取：將經(jīng)過干燥粉碎的蛹蟲草粉加入提取罐中，往提取罐中加入20°C的蒸餾 水并攪拌均勻，提取罐中的固液比為1:8。本實(shí)施例采用低溫水提與酶解結(jié)合，避免了傳統(tǒng) 工藝中高溫提取對(duì)蛹蟲草中活性物質(zhì)的破壞，保證了腺苷等功效成分的生物活性，同時(shí)大 大縮短了提取時(shí)間，提高了生產(chǎn)效率。
[0023] 3)酶解：所述酶解包括一次酶解、二次酶解和三次酶解，經(jīng)過三次酶解獲得小分 子蛹蟲草活性肽溶液；所述一次酶解過程為：向蛹蟲草提取液中加入相當(dāng)于提取所用蛹蟲 草干重0. 5%的0 -葡聚糖酶，調(diào)節(jié)溶液pH為4, 一次酶解溫度為40°C，一次酶解時(shí)間為4h。
[0024] 二次酶解過程為：將經(jīng)過一次酶解后的酶解液煮沸l(wèi)min后降溫離心，離心除雜 后，在一次酶解液中加入木瓜蛋白酶進(jìn)行二次酶解，木瓜蛋白酶的加入量相當(dāng)于蛹蟲草干 重0. 5% ;調(diào)節(jié)酶解液的pH為6,二次酶解溫度為45°C，二次酶解時(shí)間為2h。
[0025]三次酶解過程為：將經(jīng)過二次酶解后的酶解液中加入相當(dāng)于蛹蟲草干重1 %的胰 蛋白酶，調(diào)節(jié)酶解液的pH值為7. 5,三次酶解溫度為45°C，三次酶解時(shí)間為4h。
[0026] 本實(shí)施例利用P_葡聚糖酶酶解技術(shù)破除了蛹蟲草堅(jiān)硬的細(xì)胞壁，有利于細(xì)胞內(nèi) 容物的溶出，有利于提取過程的順利進(jìn)行，提高蛋白質(zhì)、蟲草多糖及蟲草腺苷等功效成分的 提取效率；本實(shí)施例利用多次酶解方法對(duì)蛹蟲草進(jìn)行酶解，可對(duì)蛹蟲草中的蛋白質(zhì)進(jìn)行充 分酶解。
[0027] 4)過濾：將經(jīng)過酶解獲得的小分子蛹蟲草活性肽溶液煮沸l(wèi)min后降至室溫，將煮 沸滅酶后的小分子蛹蟲草活性肽溶液經(jīng)過板框壓濾，去除溶液中的大分子成分和不溶性成 分。
[0028] 5)干燥：所述干燥過程采用噴霧干燥，干燥結(jié)束后即得到本發(fā)明所述的小分子蛹 蟲草肽粉成品。
[0029] 實(shí)施例2
[0030] 本實(shí)施例的一種小分子蛹蟲草活性肽的制備方法，具體包括以下步驟：
[0031] 1)干燥粉碎：將蛹蟲草干燥并粉碎至50目。
[0032] 2)提?。簩⒔?jīng)過干燥粉碎的蛹蟲草粉加入提取罐中，往提取罐中加入22°C的蒸餾 水并攪拌均勻，提取罐中的固液比為1:9。本實(shí)施例采用低溫水提與酶解結(jié)合，避免了傳統(tǒng) 工藝中高溫提取對(duì)蛹蟲草中活性物質(zhì)的破壞，保證了腺苷等功效成分的生物活性，同時(shí)大 大縮短了提取時(shí)間，提高了生產(chǎn)效率。
[0033] 3)酶解：所述酶解包括一次酶解、二次酶解和三次酶解，經(jīng)過三次酶解獲得小分 子蛹蟲草活性肽溶液；所述一次酶解過程為：向蛹蟲草提取液中加入相當(dāng)于提取所用蛹蟲 草干重0. 8%的0 -葡聚糖酶，調(diào)節(jié)溶液pH為5, 一次酶解溫度為50°C，一次酶解時(shí)間為5h。
[0034] 二次酶解過程為：將經(jīng)過一次酶解后的酶解液煮沸3min后降溫離心，離心除雜 后，在一次酶解液中加入木瓜蛋白酶進(jìn)行二次酶解，木瓜蛋白酶的加入量相當(dāng)于蛹蟲草干 重0. 8% ;調(diào)節(jié)酶解液的pH為7,二次酶解溫度為50°C，二次酶解時(shí)間為3h。
[0035] 三次酶解過程為：將經(jīng)過二次酶解后的酶解液中加入相當(dāng)于蛹蟲草干重1. 5%的 胰蛋白酶，調(diào)節(jié)酶解液的pH值為8,三次酶解溫度為50°C，三次酶解時(shí)間為5h。
[0036] 本實(shí)施例利用0-葡聚糖酶酶解技術(shù)破除了蛹蟲草堅(jiān)硬的細(xì)胞壁，有利于細(xì)胞內(nèi) 容物的溶出，有利于提取過程的順利進(jìn)行，提高蛋白質(zhì)、蟲草多糖及蟲草腺苷等功效成分的 提取效率；本實(shí)施例利用多次酶解方法對(duì)蛹蟲草進(jìn)行酶解，可對(duì)蛹蟲草中的蛋白質(zhì)進(jìn)行充 分酶解。
[0037] 4)過濾：將經(jīng)過酶解獲得的小分子蛹蟲草活性肽溶液煮沸3min后降至室溫，將煮 沸滅酶后的小分子蛹蟲草活性肽溶液經(jīng)過板框壓濾，去除溶液中的大分子成分和不溶性成 分。
[0038] 5)干燥：所述干燥過程采用噴霧干燥，干燥結(jié)束后即得到本發(fā)明所述的小分子蛹 蟲草肽粉成品。
[0039] 實(shí)施例3
[0040] 本實(shí)施例的一種小分子蛹蟲草活性肽的制備方法，具體包括以下步驟：
[0041] 1)干燥粉碎：將蛹蟲草干燥并粉碎至60目。
[0042] 2)提?。簩⒔?jīng)過干燥粉碎的蛹蟲草粉加入提取罐中，往提取罐中加入25°C的蒸餾 水并攪拌均勻，提取罐中的固液比為1:10。本實(shí)施例采用低溫水提與酶解結(jié)合，避免了傳統(tǒng) 工藝中高溫提取對(duì)蛹蟲草中活性物質(zhì)的破壞，保證了腺苷等功效成分的生物活性，同時(shí)大 大縮短了提取時(shí)間，提高了生產(chǎn)效率。
[0043] 3)酶解：所述酶解包括一次酶解、二次酶解和三次酶解，經(jīng)過三次酶解獲得小分 子蛹蟲草活性肽溶液；所述一次酶解過程為：向蛹蟲草提取液中加入相當(dāng)于提取所用蛹蟲 草干重1 %的0 _葡聚糖酶，調(diào)節(jié)溶液pH為5. 5, 一次酶解溫度為60°C，一次酶解時(shí)間為6h。
[0044] 二次酶解過程為：將經(jīng)過一次酶解后的酶解液煮沸5min后降溫離心，離心除雜 后，在一次酶解液中加入木瓜蛋白酶進(jìn)行