的退火溫度具體可為58°C。
[0034] 進一步，所述PCR擴增的反應條件具體為：94 °C 5min ;94 °C 30s，58 °C 30s， 72°C 40s，35 個循環(huán)；72°C lOmin ;12°C保存。
[0035] 在前述三種方法中，所述電泳具體可為聚丙烯酰胺凝膠電泳，所述聚丙烯酰胺凝 膠電泳中，所述聚丙烯酰胺凝膠的濃度為8% (質量百分含量）。所述聚丙烯酰胺凝膠電泳 為非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳。
[0036] 本發(fā)明的第六個目的是提供一種與玉米穗行數性狀相關的分子標記。
[0037] 本發(fā)明所提供的與玉米穗行數性狀相關的分子標記，具體為以玉米基因組DNA為 模板，采用所述引物對（序列1和序列2)進行PCR擴增所得的DNA片段。
[0038] 其中，所述PCR擴增時采用的退火溫度具體可為58°C。進一步，所述PCR擴增的反 應條件具體為 ：94￡€51^11;941€3〇8,581€3〇8,72 1€4〇8,35個循環(huán)；72°(：1〇111111;12°(：保存。
[0039] 所述引物對（序列1和序列2)或所述試劑盒或所述分子標記在如下任一中的應 用也屬于本發(fā)明的保護范圍：
[0040] (1)鑒定或輔助鑒定玉米穗行數性狀；
[0041] (2)玉米育種。
[0042] 本發(fā)明首先通過QTL初定位，在玉米第9號染色體上檢測到一個穗行數QTL qKRN9,其加性效應為0. 9-1. 3行，可解釋的表型變異為3. 72% -10. 78%，該QTL與SSR標 記jsr21051緊密連鎖，jsr21051可有效用于苗期穗行數的選擇，同時可用于玉米穗行數的 分子標記育種，為玉米穗行數QTL的精細定位提供標記基礎，加速玉米高產育種的進程。
【附圖說明】
[0043] 圖1為玉米第9號染色體的遺傳連鎖圖譜及目標區(qū)間上的遺傳連鎖圖譜。其中， A為第9號染色體的遺傳連鎖圖譜；B為目標區(qū)間上的遺傳連鎖圖譜。
[0044] 圖2為利用jsr21051對B73(父本）X西五211(母本）的？6代中選擇的在目標 區(qū)段（um C1191-Umc2343)上雜合的單株自交后產生的分離群體中部分單株的基因型檢測 結果。其中，A表示與父本B73基因型相同（電泳帶型相同）表示與母本西五211基因 型相同（電泳帶型相同）表示雜合帶型；-表示缺失。
[0045] 圖3為由B73(父本）X西五211(母本）的匕代中選擇的在目標區(qū)段 (umcl 191-umc2343)上雜合的單株自交后產生的分離群體的穗行數分布圖。
【具體實施方式】
[0046] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0047] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0048] 玉米自交系B73 :記載于"趙永平.玉米自交系B73低硝酸鹽響應miRNA及其靶基 因鑒定.中國農業(yè)科學院，2013年碩士論文"一文，公眾可從申請人處獲得用于重復本發(fā)明 實驗。
[0049] 玉米自交系西五211 :記載于"李雁，王江民.玉米自交系"西五211"的選育與利 用.云南農業(yè)科技，1998年01期"一文，公眾可從申請人處獲得用于重復本發(fā)明實驗。
[0050] 實施例1、玉米穗行數主效QTLqKRN9的定位
[0051] -、實驗材料
[0052] 1、優(yōu)良玉米自交系B73和西五211的幼嫩葉片提取DNA后用于差異引物的篩選。
[0053] 2、B73(父本）X西五211(母本）的？2群體，共148個單株，用于遺傳圖譜構建及 穗行數QTL的初定位。
[0054] 3、連續(xù)選取B73(父本）X西五211(母本）的？2^、？4、？ 5中在目標區(qū)段上雜合 的株系進行自交產生分離群體，進行穗行數主效QTL的檢測。
[0055] 二、玉米穗行數主效QTLqKRN9的定位
[0056] 1、玉米基因組DNA大量提?。ǜ牧糃TAB法）
[0057] (1)取玉米植株幼嫩葉片10_20mg，置于1. 5ml Eppendorf管中，加入液氮，研成細 粉。
[0058] (2)在離心管中加入65°C預熱的1 XCTAB提取緩沖液600 y 1，輕輕振蕩混勻。
[0059] (3)在65°C水浴鍋中溫浴30min，且每lOmin小心搖動離心管一次。
[0060] (4) 30min后取出離心管，在通風櫥中加入等體積氯仿：異戊醇（體積比24:1)，并 小心充分搖動離心管2-3min，然后靜置至有機相由無色一綠色一深綠色。
[0061] (5)室溫下，lOOOOrpm離心10min，然后吸上清500 y 1至新的離心管中。
[0062] (6)在上清中加入等體積預冷的異丙醇（_20°C )，小心混勻后于-20°C放置15min。
[0063] (7)室溫下，lOOOOrpm離心5min，小心倒掉上清后加入70 %乙醇600 y 1進行漂 洗，輕微搖動離心管，使DNA懸浮起來。
[0064] (8)室溫下，lOOOOrpm離心3min，然后小心倒掉上清并放置常溫干燥。
[0065] (9)待DNA晾干后，加入適量的滅菌ddH20,充分溶解DNA。
[0066] (10)用紫外分光光度計檢測DNA的濃度和純度，存在-20°C冰箱中備用。
[0067] 2、目標片段的擴增
[0068] PCR 反應體系（10 y 1 體系）如下：40ng y L 1模板 DNA 2. 0 y L ;10XPCR buffer 1. 0 y L ;dNTPs 0? 2 y L ;引物 1. 0 y L ;rTaqDNA 聚合酶 0? 1 y L ;ddH20 5. 7 y L〇
[0069] PCR 反應程序（10 y 1 體系）如下：94°C 5min ;94°C 30s，55°C 30s，72°C 30s，36 個 循環(huán)；72°C lOmin ;12°C保溫。
[0070] 3、聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測
[0071] A?制膠
[0072] (1)將干凈的兩塊玻璃板及墊片用夾子加緊，8%的膠〇111):20%4?3(111) : TEMED ( y 1)按1:10:1的比例配好混勻，快速封底；
[0073] (2)準備干凈的梳子，待封底的膠凝固，依每板35ml的8%的膠按同樣的比例配 膠，立即灌膠；如有氣泡，則輕輕敲打玻璃板趕出氣泡，平行插入干凈的梳子；
[0074] (3)為防止殘膠，待膠凝固后及時小心拔出梳子，將膠板固定在電泳槽上，加入 1XTBE緩沖液。
[0075] 40% PAGE溶液（5L):去離子水2000ml;N，N' -甲叉雙丙烯酰胺50g ;丙烯酰胺 1950g ;攪拌器攪拌，充分溶解，定容至5L。
[0076] 8% PAGE溶液：40% PAGE溶液稀釋5倍即按40% PAGE: 5XTBE緩沖液：去離子 水=1:1:3的比例稀釋。
[0077] 5XTBE 緩沖液（5L) :Tris 270. 00g ;硼酸 137. 50g ;EDTA-Na218. 61g ;去離子水定 容至1L。
[0078] B?電泳
[0079] (1)在擴增的PCR產物中加入2.0yl的6XLoading Buffer，離心后，每孔點樣 4 y 1 且每板有 1 孔點 4 y 1 的 100bp DNA Ladder ;
[0080] (2)常溫下，在:Secpi-Gen⑩GT核酸電泳系統(tǒng)（Bio-Rad, USA)中200V預電泳2min， 然后在120V恒壓下電泳5h左右。
[0081] 6XLoa