一種新骨架生物堿化合物及其提取分離方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥提取、分離領(lǐng)域，尤其涉及一種馬齒莧藥材中的新骨架生物堿化 合物及其提取分離方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 馬齒覽（ZfertoJaca oJeracea Z.)為馬齒覽科植物，用于熱毒血痢，癰腫疔瘡，濕 疹，丹毒，蛇蟲咬傷，便血，痔血，崩漏下血等。2010版《中華人民共和國藥典》中收載馬齒莧 的干燥地上部分入藥，具有清熱解毒，涼血止血，止痢等功效；現(xiàn)代藥理學研究表明，馬齒莧 具有抗炎止痛、抗菌抗病毒、降血壓、血脂、抗氧化、抗癌、松弛骨骼肌和平滑肌、調(diào)節(jié)免疫功 能等作用。
[0003] 馬齒莧的藥理作用與其主要化學成分包括黃酮類、香豆素、萜類、留類、生物堿、氨 基酸、各種色素類和礦物質(zhì)類等有很大關(guān)系。其中，生物堿是馬齒莧中一類重要的化學成 分，其結(jié)構(gòu)類型眾多。如馬齒莧中含有去甲腎上腺素、多巴胺、少量多巴、腺苷、尿嘧啶、腺嘌 呤、N，N-二環(huán)己基脲、尿囊素、N-反式-阿魏?；野?；還有環(huán)二肽生物堿和酰胺類生物 堿 ：馬齒莧酰胺六、8、(：、0、￡、？、6、11(016^〇6111八-1〇等。但是對本申請中馬齒莧的新骨 架化合物的分離和藥理活性研究未見報道，目前從馬齒莧中分離出的化學成分大多數(shù)是已 知的，并且是藥理活性比較弱，因此，對馬齒莧中新化合物的開發(fā)和分離是亟待需要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對上述問題，本發(fā)明提供一種簡便、快速、純度高的新骨架生物堿化合物及其提 取分離方法。
[0005] 為實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供一種新骨架生物堿化合物，分子式為 C18H 26N2O,命名為Oleracimine,化學結(jié)構(gòu)式如下。
[0006] 本發(fā)明還提供一種新骨架生物堿化合物的提取分離方法，具體步驟為。
[0007] 步驟1 :取馬齒莧干燥藥材，采用水煎煮提取，水提液過濾，合并濾液直接加熱濃 縮，得藥液備用。
[0008] 步驟2 :將步驟1中所得藥液直接經(jīng)預處理過的大孔吸附樹脂吸附除雜，分別以水 和乙醇梯度洗脫，對乙醇洗脫液進行減壓濃縮，得到濃縮液備用。
[0009] 步驟3 :將步驟2中濃縮液用乙酸乙酯反復多次萃取，減壓回收乙酸乙酯至浸膏， 得到乙酸乙酯萃取物。
[0010] 步驟4 :將步驟3中乙酸乙酯萃取物經(jīng)硅膠柱層析分離，依次用石油醚-丙酮梯度 洗脫得到若干洗脫部位，經(jīng)薄層色譜進行檢測，顯色，合并顯色的部分洗脫部位，將合并后 的洗脫部位經(jīng)減壓濃縮至干，備用。
[0011] 步驟5 :將步驟4中所得物再經(jīng)ODS柱（Octadecylsilyl，十八烷基硅烷鍵合硅膠 填料)層析分離，用甲醇-水等度洗脫，得到若干洗脫部位，經(jīng)薄層色譜進行檢測，顯色，合并 部分洗脫部位，減壓濃縮至干，得濃縮物備用。
[0012] 步驟6 :將步驟5中所得濃縮物經(jīng)Sephadex LH-20 (輕丙基葡聚糖凝膠)，以甲 醇-水等度洗脫得到新骨架生物堿化合物。
[0013] 所述大孔吸附樹脂的預處理過程為乙醇浸泡過24小時，上柱，用乙醇洗至滴入水 中無混濁，再用水洗至無醇味。
[0014] 與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明的有益效果。
[0015] 本發(fā)明提供一種新骨架生物堿化合物及其提取分離方法，依次采用水煎煮提取、 大孔吸附樹脂、乙酸乙酯萃取、硅膠柱層析、ODS中壓柱、及Sephadex LH-20,簡便、快速的提 取分離出骨架獨特的新生物堿化合物，該化合物具有鎮(zhèn)痛作用，可用于制備治療疼痛的藥 物。
【附圖說明】
[0016]圖1為本發(fā)明新骨架生物堿化合物的紫外光譜圖。
[0017]圖2為本發(fā)明新骨架生物堿化合物的紅外光譜圖。
[0018]圖3為本發(fā)明新骨架生物堿化合物的高分辨質(zhì)譜圖。
[0019] 圖4為本發(fā)明新骨架生物堿化合物的1H-NMR光譜圖。
[0020] 圖5為本發(fā)明新骨架生物堿化合物的13C-NMR光譜圖。
[0021 ] 圖6為本發(fā)明新骨架生物堿化合物的核磁共振碳譜（DEPT)光譜圖。
[0022] 圖7為本發(fā)明新骨架生物堿化合物的核磁共振1H-1HCOSY光譜圖。
[0023] 圖8為本發(fā)明新骨架生物堿化合物的核磁共振HMBC光譜圖。
[0024] 圖9為本發(fā)明新骨架生物堿化合物的核磁共振HSQC光譜圖。
[0025] 圖10為本發(fā)明新骨架生物堿化合物的核磁共振NOESY光譜圖。
【具體實施方式】
[0026] 本發(fā)明提供一種新骨架生物堿化合物，分子式為C1SH 26N20?；瘜W結(jié)構(gòu)式如下。
[0027] 所述新骨架生物堿化合物根據(jù)結(jié)構(gòu)命名為Oleracimine，表1為該新骨架生物堿 化合物的核磁數(shù)據(jù)=1H-NMR與13C-NMR在0)(：1 3中。其中，表示=NH與上面C169. 4相連。
[0028] 表1 :新骨架生物堿化合物的核磁數(shù)據(jù)。
[0029] 請參閱圖1-10,本發(fā)明新骨架生物堿化合物的結(jié)構(gòu)鑒定與推導。
[0030] 黃色粉末，[a ]2°D +4.2 (c 0.38，MeOH)，易溶于氯仿和甲醇等，不溶、微溶于水。 噴稀碘化鉍鉀試液顯紅棕色，提示該化合物為生物堿成分，UV (MeOH)入_: 448, 272nm，IR vNH3354. 3, vCH2957. 6, vc=01666. I, vc=N1554. 4, 8 N H1509. 8, v c Nl〇48. 6cm \ HRESI (+) TOFMS 給出 m/z:287. 2118 [M+H]+的準分子離子峰，分子量為 286. 2045。結(jié)合1H-NMR，13C-NMR 以及DEPT數(shù)據(jù)，推測該化合物可能的分子式為C 18H26N2O,不飽和度為7。13C-NMR譜和DEPT 譜顯示 18 個碳信號，分別為 7 個 CH3 (14. 35, 21. 15, 28. 82, 27. 44, 29. 09, 28. 63, 32. 50)、2 個CH2 (46. 76, 52. 29)、9個季碳(一個羰基碳，206 ;-個碳氮雙鍵的碳，169. 4 ;四個雙鍵碳， 121. 29,140. 97,143. 53,110. 74 ;其他鍵三個 50. 57,65. 71，38. 95)。
[0031] 1H-NMR譜顯示一個活潑H信號S 4.07 (1H，s)，表明其可能是雙鍵的氮上連有一 個札2個亞甲基信號分別為8 2.02(111，（11=13.5)，8 1.47(111，（11=13.5)和8 2.56(111， 耵=15.3)，3 2.28(111，（11=15.3)，7個甲基信號，分別為8 1.16(311，8)，8 1.29(311，8)， 5 L 30 (3H，s)，S L 34 (3H，s)，S L 45 (3H，s)，S L 82 (3H，s)，S L 88 (3H，s)。根據(jù) H-H相關(guān)譜可知，7個甲基中H譜S 1.88與S 1.82相鄰，1.45S與S 1.30相鄰，S 1. 16與 6 1.34、S 1.29相鄰。而S 1.82與S 1.88相對于其他甲基化學位移較大，可能與雙鍵相 連。根據(jù)HMBC相關(guān)表明在C-5(S52. 3)與H-2，C-6與H-5有耦合作用，是兩個亞甲基。兩 個亞甲基質(zhì)子耦合常數(shù)和碳信號出現(xiàn)在NMR與DEPT譜的高場。兩個亞甲基C-2, C-5和C-6 季碳分別與相同的N相連。根據(jù)以上信息C、H、0、及N的數(shù)目分別是18、25、1、及1，但是還 有一個N和H原子存在，由于有C信號在S 169. 4,所以可能有C=NH碎片存在。根據(jù)HMBC 遠程相關(guān)，有下面幾組數(shù)，包括C-8與H-17 ;C-9與H-17、H-18 ;C-10與H-17、H-19、H-18 ; C-Il 與 H-18、H-19、H-5 ;H-17 與 C-7、C-12、C-18 ;H-18 與 C-17、C-19 ;C-12 與 H-5a、H-5b、 H-17相關(guān)，表明有一個含有5個烯碳和一個脂肪族碳的季碳環(huán)。此外，C-3與H-5a，H-5b， H-2a, H-2b, H-14;C-4 與 H-2a, H-2b, H-13, H-14;C-2 與 H-5, H-13, H-14;C-5 與 H-2; H-13與C-14，C-2，C-4相關(guān)，表明含有一個二甲基吡咯里西啶碎片與上面