一種從狹葉紅景天根中制備紅景天苷化學(xué)對照品的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種化學(xué)對照品的制備方法，尤其涉及一種從狹葉紅景天根中制備紅景天苷化學(xué)對照品的方法。
【背景技術(shù)】
[0002].黎斯這愚玉XRhod1lakirilowii (Regel) Maxim.)系景天科(CraMi/Jaceae)紅最天MiiRhod1la L.)植物?！恫厮幹尽分杏涊d:狹葉紅景天根入藥，可用于清熱退燒、解毒、防瘟、治肺炎、腹瀉、四肢腫脹等。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，狹葉紅景天具有預(yù)防高原反應(yīng)、活血化瘀、提高耐缺氧能力、輻射保護(hù)、改善心血管系統(tǒng)功能等作用。狹葉紅景天在青海省分布較廣，資源量大，目前還未被規(guī)?；褂?。因此，從狹葉紅景天根中發(fā)展高純度紅景天苷的高效制備方法，對狹葉紅景天的規(guī)?；_發(fā)利用及相關(guān)新藥的研究具有重要意義。
[0003]目前，中國專利(CN101974045A)報(bào)道采用微波提取、二次醇沉及大孔樹脂純化等步驟從大花紅景天藥材中得到純度約為92%的紅景天苷，過程較繁瑣、耗時(shí)且醇沉過程損失量較大，不適合工業(yè)化生產(chǎn)，但從狹葉紅景天根中制備紅景天苷的文獻(xiàn)未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種工藝簡單、易規(guī)?；膹莫M葉紅景天根中制備紅景天苷化學(xué)對照品的方法。
[0005]為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種從狹葉紅景天根中制備紅景天苷化學(xué)對照品的方法，包括以下步驟:
⑴硅膠柱色譜富集:
狹葉紅景天根醇提物經(jīng)硅膠柱色譜分離，用5~10倍柱體積的氯仿-甲醇-水混合溶劑洗脫，按每份200~500 mL收集餾分，并經(jīng)薄層色譜檢測，其中展開劑為氯仿-甲醇-水混合溶劑，顯色劑為體積濃度10%的濃硫酸乙醇溶液，合并Rf值為0.5-0.7的餾分；所述Rf值為0.5-0.7的餾分經(jīng)減壓干燥即得棕黃色粉末狀的紅景天苷粗品；
⑵微孔樹脂除雜:
所述紅景天苷粗品用其質(zhì)量10~20倍的水溶液溶解，過濾得到濾液A，該濾液A上微孔樹脂柱分離，并用2~5倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)為20~50%的甲醇溶液洗脫，收集洗脫物；所述洗脫物經(jīng)減壓干燥，即得紅景天苷類組分；
⑶反相液相制備色譜精制:
所述紅景天苷類組分用其質(zhì)量10~20倍的水溶液溶解，經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜過濾，得到濾液B ;所述濾液B采用高效反相液相制備色譜柱進(jìn)行分離，經(jīng)檢測波長為220 nm的紫外檢測器檢測，收集制備色譜圖中目標(biāo)色譜峰餾分，該目標(biāo)色譜峰餾分經(jīng)減壓干燥即得白色粉末狀的紅景天苷對照品。
[0006]所述步驟⑴中狹葉紅景天根醇提物是指將狹葉紅景天根粉碎至50~100目后，按Ikg:5-20 L的料液比加入體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇或甲醇，在溫度為40 V -95°C、提取次數(shù)為1~3次、每次提取時(shí)間為l~3h的條件下進(jìn)行提取，得到提取液，該提取液經(jīng)過濾得到濾液C ;所述濾液C經(jīng)減壓干燥至膏狀即得。
[0007]所述步驟⑴中氯仿-甲醇-水混合溶劑是指將氯仿、甲醇、水按9:1:0.1-7:3:0.5體積比混合均勻而得。
[0008]所述步驟⑴中硅膠是指100~200目的柱層析硅膠。
[0009]所述減壓干燥的條件均是指真空度為0.06-0.09 MPa,溫度為50~70 V。
[0010]所述步驟⑵中微孔樹脂柱是指HP20SS型樹脂柱或MCI型樹脂柱。
[0011]所述步驟⑶中反相液相制備色譜分離的工作參數(shù)是指色譜柱柱長250 _、尺寸20mm,反相液相制備柱固定相為10 μ m耐純水C18，流動(dòng)相為體積分?jǐn)?shù)10~20%的甲醇溶液，進(jìn)樣體積為20 mL，流速為60 mL/min。
[0012]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn):
1、本發(fā)明采用硅膠柱處理，硅膠價(jià)格低廉，易于規(guī)?；?，且硅膠柱可直接去除狹葉紅景天根中脂溶性成分及其他酚類成分。
[0013]2、本發(fā)明采用微孔樹脂柱除雜，微孔樹脂柱可以再生循環(huán)使用，平均價(jià)格低廉，同時(shí)，微孔樹脂具有良好的脫色效果。
[0014]3、本發(fā)明采用反相高效液相制備，可獲取高純度對照品，且收率較高。
[0015]4、本發(fā)明原料要求不高，一般種植的或野生的狹葉紅景天根醇提物即可，易于批量備料。
[0016]5、本發(fā)明工藝簡單、易于操作，采用本發(fā)明方法可快速制備純度大于98%的紅景天苷對照品，制備規(guī)模為克級(jí)到十克級(jí)，非常適宜規(guī)?；a(chǎn)。
【附圖說明】
[0017]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0018]圖1為本發(fā)明紅景天苷的代表性液相色譜制備圖譜(220 nm)。
[0019]圖2為本發(fā)明紅景天苷的代表性高效液相色譜分析圖譜(220 nm)。
【具體實(shí)施方式】
[0020]實(shí)施例1 一種從狹葉紅景天根中制備紅景天苷化學(xué)對照品的方法，包括以下步驟:
⑴硅膠柱色譜富集:
3.0 Kg狹葉紅景天根醇提物經(jīng)硅膠柱色譜分離，用5倍柱體積的氯仿-甲醇-水混合溶劑洗脫，按每份200mL收集餾分，并經(jīng)薄層色譜檢測，其中展開劑為氯仿-甲醇-水混合溶劑，顯色劑為體積濃度10%的濃硫酸乙醇溶液，合并Rf值為0.5-0.7的餾分；Rf值為
0.5-0.7的餾分在真空度為0.06 MPa、溫度為70°C的條件下經(jīng)減壓干燥即得棕黃色粉末狀的紅景天苷粗品1050.8 go
[0021]其中:狹葉紅景天根醇提物是指將狹葉紅景天根粉碎至50目后，按Ikg:20 L的料液比加入體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，在溫度為40°C、提取次數(shù)為3次、每次提取時(shí)間為3h的條件下進(jìn)行提取，得到提取液，該提取液經(jīng)過濾得到濾液C，濾液C在真空度為0.06 MPa、溫度為70°C的條件下經(jīng)減壓干燥至膏狀即得。
[0022]硅膠是指100目的柱層析硅膠。
[0023]氯仿-甲醇-水混合溶劑是指將氯仿、甲醇、水按7:3:0.5體積比(mL/ mL)混合均勻而得。
[0024]⑵微孔樹脂除雜:
紅景天苷粗品用其質(zhì)量10倍的水溶液溶解，過濾得到濾液A，該濾液A上微孔樹脂柱分離，并用2倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇溶液洗脫，收集洗脫物；洗脫物在真空度為0.06 MPa、溫度為70°C的條件下經(jīng)減壓干燥，即得紅景天苷類組分824.9 g。
[0025]其中:微孔樹脂柱是指HP20SS型樹脂柱。紅景天苷粗品與微孔樹脂比例為I g:30 mLo
[0026]⑶反相液相制備色譜精制:
紅景天苷類組分用其質(zhì)量10倍的水溶液溶解，經(jīng)0.45 ym微孔濾膜過濾，得到濾液B ;濾液B采用高效反相液相制備色譜柱進(jìn)行分離，經(jīng)檢測波長為220 nm的紫外檢測器檢測，收集制備色譜圖中目標(biāo)色譜峰餾分，該目標(biāo)色譜峰餾分在真空度為0.06 MPa、溫度為70°C的條件下經(jīng)減壓干燥即得白色粉末狀的紅景天苷對照品69.2 g (圖1、圖2)。
[0027]其中:反相液相制備色譜分離的工作參數(shù)是指色譜柱柱長250 _、尺寸20 _，反相液相制備柱固定相為10 μ m耐純水C18，流動(dòng)相為體積分?jǐn)?shù)15%的甲醇溶液，進(jìn)樣體積為20 mL，流速為 60 mL/min ο
[0028]實(shí)施例2 —種從狹葉紅景天根中制備紅景天苷化學(xué)對照品的方法，包括以下步驟:
⑴硅膠柱色譜富集:
1.0 Kg狹葉紅景天根醇提物經(jīng)硅膠柱色譜分離，用10倍柱體積的氯仿-甲醇-水混合溶劑洗脫，按每份500 mL收集餾分，并經(jīng)薄層色譜檢測，其中展開劑為氯仿-甲醇-水混合溶劑，顯色劑為體積濃度10%的濃硫酸乙醇溶液，合并Rf值為0.5-0.7的餾分；Rf值為0.5-0.7的餾分在真空度為0.09 MPa、溫度為50°C的條件下經(jīng)減壓干燥即得棕黃色粉末狀的紅景天苷粗品348.3 go