新型芽孢桿菌cjbv及含有其的抗菌組合物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種對真菌類及引起食物中毒的細菌有特定抗菌活性的新型芽孢桿 菌CJBV(BacillusvelezensisCJBV)菌株、利用從所述菌株分離的芽孢菌霉素D類似物的 抗菌組合物，以及含有所述抗菌組合物并用于預防和治療細菌感染疾病的藥物組合物。
【背景技術】
[0002] 以傳統(tǒng)方法制造發(fā)酵大豆食品時，因其屬于利用微生物的食品，所以微生物中含 有的有害菌極有可能引起食物中毒，使人體處于危險之中。然而，通常的殺菌方法很難徹底 殺滅病原性真菌類及引起食物中毒的細菌等有害菌，其產生毒性物質，進而引起食物中毒。
[0003] 因此，使用化學保存劑或防腐劑，防止變質或腐爛，并長期保持所述食品等的品 質。但是，化合物本身有可能會起到環(huán)境激素的作用，或者存在引起皮膚過敏的危險性，所 以消費者對化學保存劑或防腐劑越來越反感。
[0004] 天然保存劑作為能夠阻礙腐敗菌生長的微生物或其代謝產物，越來越受到人們的 關注。其中，細菌素（Bacteriocin)或類細菌素（Bacteriocin-likesubstances)作為能夠 用于保存劑的天然抗菌物質之一，備受人們的關注。細菌素是一種天然無毒防腐劑，是一種 抗菌蛋白，由革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌產生的蛋白質或蛋白質和碳水化合物組成。尤 其，隨著美國食品藥品監(jiān)督管理局于1998年批準涂抹型再制干酪食品中使用作為細菌素 的乳酸鏈球菌肽（nisin)，細菌素被認為是一種可以在食品工業(yè)中使用的抗菌劑。
[0005] 人們對芽孢桿菌屬或乳酸菌生成的所述抗菌物質的研究非?；钴S，芽孢桿菌菌株 產生的細菌素與能夠抑制革蘭氏陽性菌生長的乳酸菌細菌素不同，其抗菌活性范圍廣，具 有多種特性。
[0006]具體而言，芽孢桿菌屬能夠產生多種抗菌物質（Sholbergetal.，1995Can. J.Microbio. 41，247-252)，已有報告的抗菌物質有抗霉枯草菌素（mycosubtilin)、抗 真菌素（eumycin)、芽孢菌霉素（baciIlomycin)、表面活性素（surfactin)、伊枯草菌 素（iturin)家族、aminopolyol物質、脂蛋白（lipoprotein)等，已有報告的同時具有 抗細菌和抗真菌活性的物質有枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis)產生的桿菌溶素 (bacilysin)〇
[0007] 有關的先前技術文獻，S卩，據(jù)韓國專利10-2013-0008673記載，芽孢菌霉素Dl為 解淀粉芽孢桿菌菌株（BacillusamyloliquefaciensGYL4)產生的抗菌物質，對植物病原 真菌有廣泛的活性。
[0008] 另外，據(jù)韓國專利10-2013-0025453記載，新型抗菌物質UV254-B為枯草芽孢桿菌 產生的抗菌物質，其完全不同于含有芽孢菌霉素的伊枯草菌素物質，只對引起食物中毒的 細菌一一蠟樣芽胞桿菌及單核細胞增多性李斯特氏菌表現(xiàn)出特定的抗細菌活性。
[0009] 但是，根據(jù)已有報告，只有關于細菌素對特定微生物抗菌活性的報告，暫時沒有對 引起各種作物的病害以及包括食物中毒在內的細菌感染疾病在內的各種病原菌有關的報 告。而且，所述文獻中記載的解淀粉芽孢桿菌為發(fā)酵食品中對醬類發(fā)酵有益的細菌，在將細 菌素應用于發(fā)酵大豆食品時，很難認為其只對引起食物中毒的真菌類及細菌類具有特定的 活性，因此存在很難直接用于發(fā)酵食品的問題。
[0010] 因此，本發(fā)明人致力于研究一種既對人體無害，同時又能抑制各種真菌類及細菌 類的方法，經過不懈努力，確認傳統(tǒng)醬曲中分離的芽孢桿菌CJBV不僅對病原性霉菌、酵母 等一種以上的各種真菌類具有抗菌活性，而且對醬類發(fā)酵細菌不具有抗菌活性，只對引起 食物中毒的細菌等食品中主要有害細菌具有特定的抑制作用和抗菌活性，據(jù)此完成本發(fā) 明。

【發(fā)明內容】

[0011] (要解決的技術問題）
[0012] 本發(fā)明的主要目的在于，提供一種新分離的芽孢桿菌CJBV菌株，其對真菌類及引 起食物中毒的細菌具有特定抗菌活性。
[0013] 本發(fā)明的另一目的在于，提供一種所述芽孢桿菌CJBV菌株產生的芽孢菌霉素D類 似物。
[0014] 本發(fā)明的另一目的在于，提供一種利用所述芽孢桿菌CJBV菌株及所述芽孢菌霉 素D類似物的抗菌組合物。
[0015] 本發(fā)明的另一目的在于，提供一種含有所述抗菌組合物的食品組合物。
[0016] 本發(fā)明的另一目的在于，提供一種含有所述抗菌組合物的飼料組合物。
[0017] 本發(fā)明的另一目的在于，提供一種含有所述抗菌組合物的植物及作物用抗菌劑。
[0018] 本發(fā)明的另一目的在于，提供一種植物病原性真菌防治方法，其包括使用抗菌劑 對植物體或土壤進行處理的步驟。
[0019] 本發(fā)明的另一目的在于，提供一種預防和治療細菌感染疾病的藥物組合物，其含 有所述抗菌組合物。
[0020] 本發(fā)明的另一目的在于，提供一種預防和改善細菌感染疾病的保健食品，其含有 所述抗菌組合物。
[0021] 本發(fā)明的另一目的在于，提供一種含有所述抗菌組合物的準藥品。
[0022] (解決問題的手段）
[0023] 作為實現(xiàn)所述目的的本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提供一種新分離的芽孢桿菌 CJBV(BacillusvelezensisCJBV)菌株，其對真菌類及引起食物中毒的細菌具有特定抗菌 活性，保藏號為KCCM11528P。
[0024] 在本發(fā)明中，術語--芽孢桿菌是一種自然界中分布廣泛的好氧性或兼性厭氧性 革蘭氏陽性桿菌屬，芽孢桿菌屬的細菌有芽孢桿菌等。本發(fā)明人通過如下方法查明對真菌 類及引起食物中毒的細菌具有特定抗菌活性的新型菌株，其作為芽孢桿菌屬的細菌，屬于 芽孢桿菌。
[0025] 首先，從傳統(tǒng)醬曲中分離芽孢桿菌菌株后，對病原性霉菌、酵母等真菌類及引起食 物中毒的細菌類進行驗證，從中篩選具有很強的抗菌活性的菌株，然后進行16SrDNA及 gyrA基因序列分析，對篩選的菌株進行鑒別。將所述篩選菌株的16SrDNA基因序列標記 為序列號1，其表現(xiàn)出了與芽孢桿菌99%的同源性。另外，將所述篩選菌株的gyrA基因序 列標記為序列號2,其與芽孢桿菌表現(xiàn)出了 100%同源性（實施例1)。據(jù)此，將所述菌株鑒 別為芽孢桿菌（Bacillusvelezensis)，命名為芽孢桿菌CJBV，并于2014年4月17日，在 隸屬于布達佩斯條約的國際保藏機構一一韓國微生物保藏中心（KCCM)保藏，其保藏號為 KCCM11528P(實施例 1)。
[0026] 因此，所述芽孢桿菌CJBV具有標記為序列號1的16srDNA序列。
[0027] 根據(jù)本發(fā)明的一個方面，所述新分離的芽孢桿菌CJBV不僅對植物病原性霉菌及 酵母等真菌具有優(yōu)秀的抗菌活性，還能抑制引起食物中毒的細菌，表現(xiàn)出了對各種真菌類 及引起食物中毒的細菌同時起作用的抗菌活性（實施例3,圖3及圖4)。
[0028] 作為一個具體實施例，所述真菌類是選自由炭疽病菌（Colletotrichum orbiculare)、尖抱鏡刀菌（Fusariumoxysporum、白色念珠菌（Candidaalbicans)及拜耳 接合酵母（Zygosaccharomycesbailii)組成的組的病原性真菌，但并不限于此。
[0029] 在本發(fā)明中，術語一一炭疽病菌是指對黃瓜、香瓜、西瓜等萌蘆科作物引起炭疽病 (Anthracnose)的真菌。
[0030] 在本發(fā)明中，術語一一尖孢鐮刀菌是指對黃瓜、香瓜、西瓜等萌蘆科作物引起枯萎 ?。‵usariumwilt)的病原性真菌。
[0031] 本發(fā)明人已確認新分離的芽孢桿菌CJBV對所述炭疽病菌及尖孢鐮刀菌具有抗菌 效果，所述新型菌株抑制黃瓜、香瓜、西瓜等萌蘆科作物的炭疽病及枯萎病等植物傳染病， 可以用于制造防治植物病的微生物制劑。
[0032]因此，作為環(huán)保無公害的生物農藥使用芽孢桿菌CJBV時，有利于解決有機合成農 藥導致的生態(tài)破壞和毒性問題，減輕農戶的經濟負擔。而且，由于微生物的可持續(xù)特性，能 夠長期受益。
[0033]另外，所述生物農藥可以定義為，為了防治植物病原菌而從自然環(huán)境中分離采集 微生物并實現(xiàn)產品化的農藥。
[0034] 在本發(fā)明中，術語一一白色念珠菌是屬于半知菌類的真菌的屬名，引起皮膚真菌 病、念珠菌性口腔炎、腸道疾病、念珠菌性陰道炎（Candidavaginitis)等疾病。尤其，念珠 菌性陰道炎是一種常見疾病，約75%的女性一生中陰道和外陰部至少感染一次，約45%的 女性每年復發(fā)2次以上，大部分都是因為白色念珠菌而引起。當女性荷爾蒙分泌紊亂或免 疫力極度降低時，健康人體的口腔、腸道、陰道等正常擁有的白色念珠菌容易受到感染。
[0035] 本發(fā)明人已確認新分離的芽孢桿菌CJBV對所述白色念珠菌具有抗菌效果，利用 所述新型菌株，能夠有效預防和治療皮膚真菌病、念珠菌性陰道炎、細菌感染性口腔炎以及 腸道疾病。
[0036] 在本發(fā)明中，術語一一拜耳接合酵母是一種屬于酵母屬的酵母，其作為腐敗性酵 母，在飲料產品及淀粉加工產品中發(fā)生酒精發(fā)酵的同時產生大量的二氧化碳氣體，降低食 品的品質。
[0037] 本發(fā)明人已確認新分離的芽孢桿菌CJBV對所述拜耳接合酵母具有抗菌效果，利 用所述新型菌株，能夠提高飲料產品及淀粉加工產品等食品的保質期，預防和治療由此可 能引起的食物中毒等細菌感染疾病。
[0038] 作為另一個具體實施例，所述引起食物中毒的細菌可以是蠟樣芽胞桿菌 (Bacilluscereus)或單核細胞增多性李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes)，但并不限 于此。
[0039] 在本發(fā)明中，術語一一蠟樣芽胞桿菌是一種革蘭氏陽性菌，形成耐熱孢子，感染時 引起腹瀉和嘔吐。作為好氧性細菌，存在于土壤、谷物等，自然界中分布廣泛。該菌株的孢 子相比于其他菌株的孢子，其表面粘附性強，具有很難清洗和消毒的特點。而且，所述蠟樣 芽胞桿菌在料理后放置數(shù)小時的肉菜、蔬菜、米飯及面食中因孢子發(fā)芽而繁殖，而在低溫殺 菌后的牛奶、奶酪等中同樣有可能發(fā)芽產生耐熱性腸毒素，并且對高溫表現(xiàn)出抗性，極難抑 制。