基于超濾方法快速分離薤白活性多糖的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物多糖的提取方法，尤其涉及一種新的基于超濾方法快速分離薤白中活性多糖的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]薤白(Χ?..macrostemon Bunge)為衛(wèi)生部2002年公布的87種藥食兩用植物之一，別名野白頭、小根蒜、山蒜、苦蒜、小么蒜、小根菜、野蔥、薤白頭等，為百合科蔥屬多年生草本植物，廣泛分布于中國、日本和韓國等國的平原地區(qū)，多食用，其干燥鱗莖也可入藥，藥用薤白為植物小根蒜A macrostemon Bge.或薤AZfew的干燥鱗莖。薤白味辛、苦，性溫，無毒，具有理氣、寬胸、通陽、散結(jié)之功效，中醫(yī)長期用于治療胸悶刺痛、瀉痢后重、肺氣喘急等疾病。與現(xiàn)代醫(yī)學中的心絞痛、動脈粥樣硬化、心肌梗塞等心血管疾病的治療有一定的關(guān)系。作為天然生物活性成分，研究已發(fā)現(xiàn)多糖具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎及免疫調(diào)節(jié)等多種功能，且多糖中糖醛酸含量的高低與其活性的強弱之間有著較為明顯的對應關(guān)系。
[0003]近幾年來，已對薤白多糖從提取工藝優(yōu)化、純品制備、結(jié)構(gòu)分析鑒定、活性篩選評價及結(jié)構(gòu)和功能的構(gòu)效關(guān)系等方面進行較為系統(tǒng)深入的研究，發(fā)現(xiàn)了一種糖醛酸含量較高，具有較強生物活性的酸性多糖。但是迄今為止，薤白多糖的提取方法僅限于減壓濃縮的傳統(tǒng)方式，耗能高，同時活性多糖提取率較低。
[0004]在《安徽農(nóng)業(yè)科學》，2006，34 (17)中，由夏新奎、楊海霞、李純、尹健發(fā)表的《薤白粗多糖提取工藝研究》文章中，公開了一種薤白多糖的提取方法，具體采用的方案是:稱取粉碎的薤白干品粉末200g，甲醇回流脫去表面脂肪，抽濾，藥渣風干，再用80%乙醇回流除去小分子糖、苷類、生物堿等，藥渣風干，然后分別取藥渣5 g，以水作為溶劑，采用不同的提取溫度，不同的料液比，不同的提取時間對藥渣進行多糖提取實驗，水提液離心除去雜質(zhì)，減壓濃縮至小體積，加無水乙醇至濃度為75%沉淀；靜置24h后過濾，用95%乙醇、無水乙醇、丙酮洗滌數(shù)次，真空干燥，得薤白粗多糖。文中進一步也指出了提取工藝條件，包括提取溫度，液料比，提取時間，提取次數(shù)等。
[0005]但是，該提取方法還是存在諸多不足，提取率較低，提取過程中損失率較尚，在最佳提取工藝條件下薤白多糖的平均提取率為13.93%，提取出來的薤白多糖多為分子量較小的中性多糖，較大分子量的酸性多糖占比較小，因而生物活性較低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明目的旨在提供一種高效、環(huán)保的基于超濾方法快速分離薤白活性多糖的提取方法。
[0007]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:該基于超濾方法快速分離薤白活性多糖的提取方法，包括以下步驟:
(I)取鮮薤白，洗凈干燥后，粉碎過60目篩，得薤白粉碎物； (2)將步驟(I)中的制得的薤白粉碎物，采用石油醚或乙醚回流脫脂，離心去除上清液，所得殘渣50°C烘干，石油醚或乙醚與薤白粉碎物的液料比為5:1;
(3)將步驟(2)所得殘渣，加水進行熱水浸提，水料比為4-25mL/g，提取溫度60-100°C，提取時間0.5_3h，提取若干次，合并得提取液；
(4)將步驟(3)所得提取液，離心，得上清液；
(5)將步驟(4)所得的上清液，采用超濾設(shè)備，應用規(guī)格50kD超濾膜，在溫度為20?45°C，操作壓力為0.10-0.40MPa條件下進行超濾，得透過液和截留液；
(6)將步驟(5)所得截留液，加乙醇至終濃度70%，室溫放置后離心，得固體沉淀物；
(7)將步驟(6)所得固體沉淀物，依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，真空干燥，得薤白活性多糖。
[0008]進一步的改進在于，所述步驟(5)中的離心率為5000r/m，時間為lOmin。
[0009]進一步的改進在于，所述步驟(7)中的離心率為5000rpm，時間為lOmin。
[0010]進一步的改進在于，在所述步驟(I)中，干燥采用烘干溫度為50°C ;在所述步驟
(2)中，采用石油醚回流脫脂I次，時間3h，將步驟⑵所得殘渣，用80%乙醇，回流去除小分子，離心去除上清液，所得殘渣烘干，80%乙醇與殘渣的液料比為8:1 ;在所述步驟(3)中，回流去除小分子I次，時間3h ;在所述步驟(4)中，提取次數(shù)1-5次；在所述步驟(7)中，放置時間為24h ;在所述步驟(8)中，依次用無水乙醇、丙酮、乙醚各洗滌I次，50°C下真空干燥。
[0011]進一步的改進在于，在所述步驟(I)中，鮮薤白洗凈后除去須根，蒸透或置沸水中燙透，采用曬干方式干燥；在所述步驟(2)中，采用乙醚回流脫脂2次，每次時間2h ;在所述步驟(3 )中，提取次數(shù)1-5次；在所述步驟(6 )中，放置時間為24h ;在所述步驟(7 )中，依次用無水乙醇、丙酮、乙醚各洗滌I次，50°C下真空干燥。
[0012]采用本發(fā)明上述方案，采用硫酸-間羥聯(lián)苯法進行糖醛酸含量測定，制備所得薤白活性多糖為灰白色絮狀粉末，其糖醛酸含量24.73%，遠高于透過液中及其它未采用超濾方法制得的薤白多糖；所得薤白活性多糖紅外分析測試結(jié)果表明，在3500-3250 cm 1范圍內(nèi)出現(xiàn)了寬而強的多糖羥基O-H伸縮振動峰，2900-2800 cm 1范圍內(nèi)出現(xiàn)多糖的C-H強伸縮振動峰，這兩個峰均為多糖類物質(zhì)的特征吸收峰，其中在1750 cm1處，出現(xiàn)的強吸收峰是羧基的C=O非對稱伸縮振動，說明此多糖含有羧基基團，具有較高活性。
【附圖說明】
[0013]圖1是采用本發(fā)明方法從薤白中分離到的活性多糖以及其他方法分離到的薤白多糖對腫瘤細胞BGC-823作用24h后的抑制率對比；
圖2是實施例1薤白提取液經(jīng)超濾所得截留液中薤白活性多糖紅外譜圖。
【具體實施方式】
[0014]實施例1:取鮮薤白，洗凈，50 0C烘干后，粉碎過60目篩，得薤白粉碎物；將制得的粉碎物，石油醚Ot料比5:1)回流脫脂I次，時間3 h，離心去除上清液，所得殘渣50°C烘干；將烘干后殘渣，用80%乙醇(液料比8:1)回流去除小