猿腺病毒核酸和氨基酸序列，包含其的載體及其用圖
【專利說(shuō)明】猿腺病毒核酸和氨基酸序列，包含其的載體及其用途
[0001] 本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2010年2月2日、中國(guó)申請(qǐng)?zhí)枮?01080006197.X、發(fā)明名稱為 "猿腺病毒核酸和氨基酸序列，包含其的載體及其用途"的發(fā)明申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
[0002] 本發(fā)明涉及具有改進(jìn)的血清陽(yáng)性率的新腺病毒毒株。在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及腺 病毒衣殼蛋白例如六鄰體、五鄰體和纖維蛋白的分離的多肽及其片段和編碼其的多核苷 酸。也提供了包含根據(jù)本發(fā)明的分離的多核苷酸的載體和包含根據(jù)本發(fā)明的分離的多核苷 酸或多肽的腺病毒和包含所述載體、腺病毒、多肽和/或多核苷酸的藥物組合物。本發(fā)明還 涉及分離的多核苷酸、分離的多肽、載體、腺病毒和/或藥物組合物用于疾病的治療或預(yù)防 的用途。
【背景技術(shù)】
[0003] 腺病毒（Ad)包括在兩棲動(dòng)物、鳥類和哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的具有無(wú)囊膜二十面 體衣殼結(jié)構(gòu)的雙鏈DNA病毒大家族（Straus，Adenovirusinfectionsinhumans;The Adenoviruses, 451-498, 1984;Hierholzer等人，J.Infect.Dis.，158:804-813, 1988 ; Schnurr和Dondero，Intervirology.，36:79-83,1993;Jong等人，J.Clin. Microbiol.，37:3940-3945:1999)。與逆轉(zhuǎn)錄病毒相比，腺病毒可以轉(zhuǎn)導(dǎo)若干哺乳動(dòng)物物種 的許多細(xì)胞類型，包括分裂和不分裂細(xì)胞，并且不整合至宿主細(xì)胞的基因組。
[0004] 一般而言，腺病毒DNA通常非常穩(wěn)定和保持游離型（例如染色體外的），除非發(fā)生 轉(zhuǎn)化或腫瘤發(fā)生。此外，腺病毒載體可在良好確定的生產(chǎn)系統(tǒng)中增殖至高產(chǎn)量，所述生產(chǎn)系 統(tǒng)易于臨床級(jí)組合物的制藥規(guī)模生產(chǎn)。這些特征和其表征良好的分子遺傳學(xué)使重組腺病毒 載體成為用作疫苗載體的有力候選者。重組腺病毒載體的產(chǎn)生可依賴于使用能夠補(bǔ)充已被 刪除或被改造為無(wú)功能的腺病毒基因產(chǎn)物功能的包裝細(xì)胞系。
[0005] 目前，廣泛使用2種表征良好的人C亞群腺病毒血清型（即hAd2和hAd5)作為用 于基因治療的大多數(shù)腺病毒載體的病毒骨架來(lái)源。還已檢驗(yàn)了復(fù)制缺陷的人腺病毒載體作 為疫苗載體用于遞送來(lái)源于多種感染原（infectiuosagent)的多種免疫原。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 (例如嚙齒類、犬類和非人靈長(zhǎng)類）中進(jìn)行的研究表明攜帶編碼免疫原和其他抗原的轉(zhuǎn)基 因的重組復(fù)制缺陷的人腺病毒載體引起針對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的體液和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。一 般而言，研究者已報(bào)導(dǎo)了使用人腺病毒作為疫苗載體在非人實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中的成功，其通過(guò)使 用利用高劑量的預(yù)計(jì)可引起免疫應(yīng)答的重組腺病毒載體的免疫方案，或通過(guò)使用利用相繼 施用來(lái)源于不同血清型但攜帶相同的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的腺病毒載體用于加強(qiáng)免疫的免疫方案 (Mastrangeli等人，HumanGeneTherapy, 7:79-87(1996) 〇
[0006] 已開發(fā)了基于人5型腺病毒（Ad5)的病毒載體用于不同的基因治療和疫苗應(yīng)用。 盡管基于Ad5的載體在動(dòng)物模型中極其有效，在臨床試驗(yàn)中已證明了在人中存在的針對(duì)Ad5野生型病毒的先存（pre-existing)免疫力，以降低基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的效率。特別是在參與基 于Ad5載體的疫苗臨床試驗(yàn)的受試者中證明了免疫效率的明確降低，這些受試者具有超過(guò) 200的中和抗體滴度。在Merck進(jìn)行的HIV疫苗STEP試驗(yàn)（MooreJP等人Science. 2008 May9 ;320 (5877): 753-5)中得到以Ad5為載體的疫苗的最全面表征。所述疫苗研究基于 在具有HIV感染高風(fēng)險(xiǎn)的受試者中共注射3個(gè)表達(dá)不同HIV抗原的Ad5載體作為概念研究 的證據(jù)。令人驚訝地，數(shù)據(jù)顯示在具有抗-Ad5先存免疫力的接種的受試者中HIV感染率提 高而不是具有保護(hù)作用。盡管此矛盾的觀察的機(jī)制尚不清楚，所述結(jié)果對(duì)基于人源腺病毒 的疫苗在健康受試者中的疫苗應(yīng)用的安全性和效率提出了另外的問(wèn)題。綜合考慮目前在不 同疫苗和基因治療臨床試驗(yàn)例如使用Ad5載體的試驗(yàn)中得到的全部結(jié)果提高了對(duì)以在人 中具有極低的或缺乏先存免疫力為特征的腺病毒的需要。
[0007] 發(fā)明概述
[0008] 在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了分離的多核苷酸，其編碼腺病毒纖維蛋白或其功能 性衍生物，并且所述多核苷酸選自：
[0009] (a)多核苷酸，其編碼具有根據(jù)SEQIDN0:14-19、50和53中任意氨基酸序列的多 肽，
[0010] (b)多核苷酸，其編碼根據(jù)SEQIDN0:14-19、50和53中任意多肽的功能性衍生 物，其中所述功能性衍生物包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的缺失、插入和/或置換，和
[0011] (C)多核苷酸，其編碼在全長(zhǎng)上與SEQIDN0:14-19、50和53中任意氨基酸序列具 有至少85%相同的氨基酸序列的功能性衍生物。
[0012] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的多核苷酸，其編碼腺病毒六鄰體蛋白或其功能 性衍生物，并且所述多核苷酸選自：
[0013] (a)多核苷酸，其編碼具有根據(jù)SEQIDN0:20-25、51和54中任意氨基酸序列的多 肽，
[0014] (b)多核苷酸，其編碼根據(jù)SEQIDN0:20-25、51和54中任意多肽的功能性衍生 物，其中所述功能性衍生物包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的缺失、插入和/或置換，和
[0015] (c)多核苷酸，其編碼具有在全長(zhǎng)上與SEQIDN0:20-25、51和54中任意氨基酸序 列至少95 %相同的氨基酸序列的功能性衍生物。
[0016] 也提供了分離的多核苷酸，其編碼腺病毒五鄰體蛋白或其功能性衍生物，并且所 述多核苷酸選自：
[0017] (a)多核苷酸，其編碼具有根據(jù)SEQIDN0:26-31、52和55中任意氨基酸序列的多 肽，
[0018] (b)多核苷酸，其編碼根據(jù)SEQIDN0:26-31、52和55中任意多肽的功能性衍生 物，其中所述功能性衍生物包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的缺失、插入和/或置換，和
[0019] (c)多核苷酸，其編碼具有在全長(zhǎng)上與SEQIDN0:26-31、52和55中任意氨基酸序 列至少85 %相同的氨基酸序列的功能性衍生物。
[0020] 本發(fā)明也涉及包含至少一種如上概述的根據(jù)本發(fā)明的分離的多核苷酸的多核苷 酸。本發(fā)明還提供了由根據(jù)本發(fā)明的分離的多核苷酸編碼的分離的腺病毒衣殼多肽或其功 能性衍生物。
[0021] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包含根據(jù)本發(fā)明的分離的多核苷酸的載體。
[0022] 也提供了重組腺病毒，優(yōu)選不能復(fù)制的腺病毒，其包含根據(jù)本發(fā)明的分離的多核 苷酸和/或至少一種根據(jù)本發(fā)明的分離的腺病毒衣殼多肽。
[0023] 本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含佐劑和以下（i)至（iv)中至少一種物質(zhì)的組合物：
[0024] (i) -種或多種根據(jù)本發(fā)明的分離的腺病毒衣殼多肽；
[0025] (ii)根據(jù)本發(fā)明的分離的多核苷酸；
[0026] (iii)根據(jù)本發(fā)明的載體；
[0027] (iv)根據(jù)本發(fā)明的重組腺病毒；
[0028] 和任選地，藥學(xué)上可接受的賦形劑。
[0029] 本發(fā)明還涉及包含以下至少一種的細(xì)胞：
[0030] (i)一種或多種根據(jù)本發(fā)明的分離的腺病毒衣殼多肽；
[0031] (ii)根據(jù)本發(fā)明的分離的多核苷酸；
[0032] (iii)根據(jù)本發(fā)明的載體；
[0033] (iv)根據(jù)本發(fā)明的重組腺病毒。
[0034] 本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及根據(jù)本發(fā)明的分離的腺病毒衣殼多肽、根據(jù)本發(fā)明的分 離的多核苷酸、根據(jù)本發(fā)明的載體、根據(jù)本發(fā)明的重組腺病毒和/或根據(jù)本發(fā)明的組合物 用于疾病的治療或預(yù)防的用途。
[0035] 具體地，本發(fā)明涉及以下項(xiàng)：
[0036] 1.-種分離的多核苷酸，其編碼腺病毒纖維蛋白或其功能性衍生物，并且所述多 核苷酸選自：
[0037] (a)多核苷酸，其編碼具有根據(jù)SEQIDN0:14_19、50和53中任意氨基酸序列的多 肽，
[0038] (b)多核苷酸，其編碼根據(jù)SEQIDN0:14-19、50和53中任意多肽的功能性衍生 物，其中所述功能性衍生物包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的缺失、插入和/或置換，和
[0039] (c)多核苷酸，其編碼在全長(zhǎng)上與SEQIDN0:14-19、50和53中任意氨基酸序列具 有至少85%相同的氨基酸序列的功能性衍生物。
[0040] 2. -種分離的多核苷酸，其編碼腺病毒六鄰體蛋白或其功能性衍生物，并且所述 多核苷酸選自：
[0041] (a)多核苷酸，其編碼具有根據(jù)SEQIDN0:20-25、51和54中任意氨基酸序列的多 肽，
[0042] (b)多核苷酸，其編碼根據(jù)SEQIDN0:20-25、51和54中任意多肽的功能性衍生 物，其中所述功能性衍生物包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的缺失、插入和/或置換，和
[0043] (c)多核苷酸，其編碼具有在全長(zhǎng)上與SEQIDN0:20-25、51和54中任意氨基酸序 列至少95 %相同的氨基酸序列的功能性衍生物。
[0044] 3. -種分離的多核苷酸，其編碼腺病毒五鄰體蛋白或其功能性衍生物，并且所述 多核苷酸選自：
[0045] (a)多核苷酸，其編碼具有根據(jù)SEQIDN0:26-31、52和55中任意氨基酸序列的多 肽，
[0046] (b)多核苷酸，其編碼根據(jù)SEQIDN0:26-31、52和55中任意多肽的功能性衍生 物，其中所述功能性衍生物包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的缺失、插入和/或置換，和
[0047] (c)多核苷酸，其編碼具有在全長(zhǎng)上與SEQIDN0:26-31、52和55中任意氨基酸序 列至少85 %相同的氨基酸序列的功能性衍生物。
[0048] 4. -種多核苷酸，其包含至少一種根據(jù)項(xiàng)1、2和3中任一項(xiàng)的分離的多核苷酸。
[0049] 5.根據(jù)項(xiàng)1-4中任一項(xiàng)的分離的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含以下至少一 項(xiàng)：
[0050] (a)腺病毒5' -端，優(yōu)選腺病毒5'反向末端重復(fù)，
[0051] (b)腺病毒Ela區(qū)或其選自13S、12S和9S區(qū)的片段，
[0052] (c)腺病毒Elb區(qū)或其選自小T、大T和IX區(qū)的片段，
[0053] (d)腺病毒E2b區(qū)或其選自小pTP、聚合酶和IVa2區(qū)的片段，
[0054] (e)腺病毒L1區(qū)或其片段，所述片段編碼選自28.lkD蛋白、聚合酶、agnoprotein、 52/55kDa蛋白和Ilia蛋白的腺病毒蛋白質(zhì)；
[0055] (f)腺病毒L2區(qū)或其片段，所述片段編碼選自根據(jù)項(xiàng)3的五鄰體蛋白、VII、V和 Mu蛋白的腺病毒蛋白質(zhì)，
[0056] (g)腺病毒L3區(qū)或其片段，所述片段編碼選自VI蛋白、根據(jù)項(xiàng)2的六鄰體蛋白和 內(nèi)切蛋白酶的腺病毒蛋白質(zhì)，
[0057] (h)腺病毒E2a區(qū)，
[0058] ⑴腺病毒L4區(qū)或其片段，所述片段編碼選自100kD蛋白、33kD同源物和蛋白質(zhì) VIII的腺病毒蛋白質(zhì)，
[0059] (j)腺病毒E3 區(qū)或其選自E3 0RF1、E3 0RF2、E3 0RF3、E3 0RF4、E3 0RF5、E3 0RF6、 E3 0RF7、E3 0RF8 和E3 0RF9 的片段，
[0060] (k)腺病毒L5區(qū)或其片段，所述片段編碼根據(jù)項(xiàng)1的纖維蛋白，
[0061] (1)腺病毒E4 區(qū)或其選自E4 0RF7、E4 0RF6、E4 0RF5、E4 0RF4、E4 0RF3、E4 0RF2 和E4 0RF1的片段，和/或
[0062](m)腺病毒3'-端，優(yōu)選腺病毒3'反向末端重復(fù)。
[0063] 6.根據(jù)項(xiàng)4的分離的多核苷酸，其中所述多核苷酸由下述多核苷酸組成或包含下 述多核苷酸：其在全長(zhǎng)上與基本上由SEQIDN0:13、62、63或65中的任一個(gè)組成的序列或 由SEQIDN0:13、62、63或65中的任一個(gè)組成但缺乏SEQIDN0:13、62、63或65的基因組 區(qū)域E1A、E1B、E2A、E2B、E3和/或E4的序列至少90%同一。
[0064] 7. -種由根據(jù)項(xiàng)1-3中任一項(xiàng)的分離的多核苷酸編碼的分離的腺病毒衣殼多肽， 或其功能性衍生物。
[0065]8.-種載體，其包含根據(jù)項(xiàng)1-6中任一項(xiàng)的分離的多核苷酸。
[0066] 9.根據(jù)項(xiàng)8的載體，其中所述載體不包含選自E1A、E1B、E2A、E2B、E3和E4的基因 組區(qū)域中的基因，和/或包含選自E1A、E1B、E2A、E2B、E3和E4的基因組區(qū)域的至少一個(gè)基 因，其中所述至少一個(gè)基因包含使所述至少一個(gè)基因無(wú)功能的缺失和/或突變。
[0067] 10. -種重組腺病毒，優(yōu)選不能復(fù)制的腺病毒，其包含根據(jù)項(xiàng)1-6中任一項(xiàng)的分離 的多核苷酸和/或至少一種根據(jù)項(xiàng)7的分離的腺病毒衣殼多肽。
[0068] 11.項(xiàng)10的重組腺病毒，其中所述重組腺病毒包含用于遞送至靶細(xì)胞的分子。
[0069] 12.根據(jù)項(xiàng)10或11的重組腺病毒，其中所述腺病毒在人受試者中具有低于5%的 血清陽(yáng)性率和優(yōu)選在人受試者中無(wú)血清陽(yáng)性率。
[0070] 13.根據(jù)項(xiàng)10-12中任一項(xiàng)的重組腺病毒，其中所述腺病毒能夠感染哺乳動(dòng)物細(xì) 胞。
[0071] 14.根據(jù)項(xiàng)11-13中任一項(xiàng)的重組腺病毒，其中所述用于遞送至靶細(xì)胞的分子是 編碼抗原蛋白或其片段的多核苷酸。
[0072] 15.項(xiàng)10-14中任一項(xiàng)的重組腺病毒，其中所述腺病毒是已被保藏的腺病毒并具 有選自 08110601 (ChAd83)、08110602(ChAd73)、08110603(ChAd55)、08110604(ChAdl47)和 08110605 (ChAdl46)的保藏號(hào)。
[0073] 16. -種組合物，其包含佐劑和以下⑴至（iv)中至少一項(xiàng)：
[0074] (i) -種或多種根據(jù)項(xiàng)7的分離的腺病毒衣殼多肽，
[0075] (ii)根據(jù)項(xiàng)1-6中任一項(xiàng)的分離的多核苷酸，
[0076] (iii)根據(jù)項(xiàng)8-9中任一項(xiàng)的載體，
[0077] (iv)根據(jù)項(xiàng)10-15中任一項(xiàng)的重組腺病毒，
[0078] 和任選地，藥學(xué)上可接受的賦形劑。
[0079] 17.根據(jù)項(xiàng)16的組合物，其中所述佐劑是受體的激動(dòng)劑，所述受體選自I型細(xì)胞 因子受體、II型細(xì)胞因子受體、TNF受體、擔(dān)當(dāng)轉(zhuǎn)錄因子的維生素D受體、以及Toll樣受體 1 (TLR1)、TLR-2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR-6、TLR7 和TLR9。
[0080] 18.根據(jù)項(xiàng)17的組合物，其中所述佐劑是Toll樣受體4或9激動(dòng)劑。
[0081] 19. 一種細(xì)胞，其包含以下至少一項(xiàng)：
[0082] ⑴一種或多種根據(jù)項(xiàng)7的分離的腺病毒衣殼多肽，
[0083] (ii)根據(jù)項(xiàng)1-6中任一項(xiàng)的分離的多核苷酸，
[0084] (iii)根據(jù)項(xiàng)8-9中任一項(xiàng)的載體，
[0085](iv)根據(jù)項(xiàng)10-15中任一項(xiàng)的重組腺病毒。
[0086] 20.根據(jù)項(xiàng)18的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞是表達(dá)至少一種選自Ela、Elb、E2a、E2b、E4、 Ll、L2、L3、L4和L5的腺病毒基因的宿主細(xì)胞。
[0087] 21.根據(jù)項(xiàng)7的分離的腺病毒衣殼多肽、根據(jù)項(xiàng)1-6中任一項(xiàng)的分離的多核苷酸、 根據(jù)項(xiàng)8-9中任一項(xiàng)的載體、根據(jù)項(xiàng)10-15中任一項(xiàng)的重組腺病毒和/或根據(jù)項(xiàng)18的組合 物用于疾病的治療或預(yù)防的用途。
[0088] 22.根據(jù)項(xiàng)21的用途，其中所述治療或預(yù)防是接種。
[0089] 23.根據(jù)項(xiàng)21的用途，其中所述治療是基因治療。
[0090] 發(fā)明詳述
[0091] 在以下詳細(xì)描述本發(fā)明以前，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明不受限于本文描述的特定方法、方 案和試劑，因?yàn)檫@些可以變化。還應(yīng)當(dāng)理解本文使用的術(shù)語(yǔ)僅為了描述特定實(shí)施方案的目 的，無(wú)意限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明僅受限于所附權(quán)利要求書。除非另外定義，本文使用的 所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的相同的含義。
[0092]優(yōu)選地，本文使用的術(shù)語(yǔ)如〃Amultilingualglossaryofbiotechnological terms:(IUPACRecommendations) 〃，Leuenberger,H.G.W,Nagel,B.和Klbl，H.編 (1995)，HelveticaChimicaActa,CH-4010Basel,Switzerland)中所描述的以及Axel Kleemann和JurgenEngel的''PharmaceuticalSubstances:Syntheses,Patents,App lications",ThiemeMedicalPublishing, 1999;"MerckIndex:AnEncyclopediaof Chemicals,Drugs,andBiologicals"，SusanBudavari等人編，CRCPress, 1996，和United StatesPharmcopeialConvention,Inc.,RockvilleMd.,2001 出版的UnitedStates Pharmacopeia-25/NationalFormulary-20 中所描述的定義。
[0093] 在本說(shuō)明書和后面的權(quán)利要求書通篇中，除非上下文另有需要，否則詞語(yǔ)"包含 (comprise) "和變體例如"包含（comprises) "和"包含（comprising) "應(yīng)當(dāng)被理解為指包 含所述的特征、整體（integer)或步驟或多個(gè)特征、整體或步驟的組但不排除任意其他特 征、整體或步驟或多個(gè)整體或步驟的組。在后面的段落中更詳細(xì)地定義了本發(fā)明的不同方 面。除非明確指出有相反的意思，這樣定義的每個(gè)方面可與任意其他方面或多個(gè)方面組合。 特別地，指示為優(yōu)選的或有利的任意特征可與指示為優(yōu)選的或有利的任意其他特征或多個(gè) 特征組合。
[0094] 在本說(shuō)明書正文通篇中引用了一些文件。本文引用的每個(gè)文件（包括所有專利、 專利申請(qǐng)、科學(xué)出版物、制造商的說(shuō)明書、指示等），不管在上文或下文中，在此以其整體引 入作為參考。不應(yīng)將本文的任何內(nèi)容解釋為承認(rèn)本發(fā)明無(wú)權(quán)先于因先前發(fā)明所作的此類公 開。
[0095] 下面提供了在本說(shuō)明書中經(jīng)常使用的一些術(shù)語(yǔ)的定義。這些術(shù)語(yǔ)在其每次使用時(shí) 在說(shuō)明書的其余部分具有分別定義的含義和優(yōu)選的含義。
[0096] -般而言，腺病毒基因組是被良好地表征的。就具有類似位置的特定開放閱讀框 而言，在腺病毒基因組的總體組織中具有一般的保守性，例如每個(gè)病毒的E1A、E1B、E2A、 E2B、E3、E4、LI、L2、L3、L4和L5基因的位置。腺病毒基因組的每個(gè)末端包含被稱為反向末 端重復(fù)（ITR)的序列，其對(duì)病毒復(fù)制是必需的。病毒也包含病毒編碼的蛋白酶，其對(duì)加工某 些產(chǎn)生感染性病毒粒子所需的結(jié)構(gòu)蛋白是必需的。根據(jù)宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)后表達(dá)的病毒基因的 順序描述腺病毒基因組的結(jié)構(gòu)。更具體地，根據(jù)轉(zhuǎn)錄是否在DNA復(fù)制開始前或后發(fā)生將病 毒基因稱為早期（E)或晚期（L)基因。在轉(zhuǎn)導(dǎo)的早期，腺病毒的￡認(rèn)、￡18、￡24、￡28、￡3和 E4基因被表達(dá)以制備適于病毒復(fù)制的宿主細(xì)胞。在感染的晚期，激活晚期基因L1-L5的表 達(dá)，其編碼病毒顆粒的結(jié)構(gòu)成分。
[0097] 下表1提供了本文涉及的序列的概述：
[0098]表1
[0099]
[0100]
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[0101] 如本文使用的，術(shù)語(yǔ)"分離的"指基本上不含與其天然有聯(lián)系的其他分子的分子。 因此分離的分子不含其在自然界的活動(dòng)物中，即實(shí)驗(yàn)設(shè)備之外可能相遇或接觸的其他分 子。
[0102] 如本文使用的，術(shù)語(yǔ)"蛋白質(zhì)"、"肽"和"多肽"可通篇互換使用。這些術(shù)語(yǔ)指天然 存在的肽（例如天然存在的蛋白質(zhì)）和可能包括天然或非天然存在的氨基酸的合成的肽 二者。肽也可被化學(xué)修飾，通過(guò)修飾天然或非天然存在的氨基酸的側(cè)鏈或游離氨基或羧基 端。此化學(xué)修飾包括加入其他的化學(xué)部分以及在氨基酸側(cè)鏈中的功能基團(tuán)的修飾，例如糖 基化。肽是優(yōu)選具有至少 3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、 80、85、90、95或至少100個(gè)氨基酸，最優(yōu)選至少8個(gè)或至少30個(gè)氨基酸的聚合物。由于本 文公開的多肽和蛋白質(zhì)來(lái)源于腺病毒，優(yōu)選地本文使用的分離的多肽或蛋白質(zhì)的分子量不 超過(guò) 200kDa。
[0103] 如本文使用的術(shù)語(yǔ)"載體"包括技術(shù)人員已知的任意載體，包括質(zhì)粒載體，黏粒載 體，噬菌體載體例如A噬菌體，病毒載體例如腺病毒（Ad)載體（例如現(xiàn)有技術(shù)（例如W0 2005/071093A2)已知的非復(fù)制型Ad5、Adll、Ad26、Ad35、Ad49、ChAd3、ChAd4、ChAd5、ChAd7、 ChAd8、ChAd9、ChAdlO、ChAdll、ChAdl6、ChAdl7、ChAdl9、ChAd20、ChAd22、ChAd24、ChAd26、 ChAd30、ChAd31、ChAd37、ChAd38、ChAd44、ChAd63 和ChAd82 載體或可復(fù)制的Ad4 和Ad7 載 體），腺相關(guān)病毒（AAV)載體（例如AAV5型），甲病毒載體（例如委內(nèi)瑞拉馬腦脊髓炎病 毒（VEE)，辛德比斯病毒（SIN)，塞姆利基森林病毒（SFV)和VEE-SIN嵌合體），皰疹病毒載 體，麻疹病毒載體，痘病毒載體（例如牛痘病毒，修飾的牛痘病毒Ankara(MVA)，NYVAC(來(lái)源 于牛痘病毒的Copenhagen毒株），和禽痘病毒載體：金絲雀痘（ALVAC)和禽痘病毒（FPV)載 體），和水皰性口炎病毒載體，類病毒顆粒或細(xì)菌孢子。載體也包括表達(dá)載體，克隆載體和可 用于在宿主細(xì)胞中產(chǎn)生重組腺病毒的載體。
[0104] 術(shù)語(yǔ)"表達(dá)載體"指包含至少一種待表達(dá)的核酸序列以及其轉(zhuǎn)錄和翻譯控制序列 的核酸分子。改變表達(dá)盒將導(dǎo)致包含其的載體引導(dǎo)不同序列或序列組合的表達(dá)。因?yàn)橄拗?性位點(diǎn)被優(yōu)選地改造在5'和3'端，可容易地插入、去除表達(dá)盒，或?qū)⑵涮鎿Q為另一個(gè)表達(dá) 盒。優(yōu)選地，表達(dá)盒包括用于有效表達(dá)給定基因的順式調(diào)控元件，例如啟動(dòng)子、起始位點(diǎn)和 /或多聚腺苷酸化位點(diǎn)，如下進(jìn)一步描述。
[0105] 術(shù)語(yǔ)"抗體"指單克隆和多克隆抗體二者，即任意免疫球蛋白或其能夠結(jié)合抗原或 半抗原的部分?？乖Y(jié)合部分可通過(guò)重組DNA技術(shù)或通過(guò)完整抗體的酶或化學(xué)切割產(chǎn)生。 在某些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合部分包括Fab、Fab'、F(ab'）2、Fd、Fv、