卡他球菌提取物的制備方法及該方法所獲的提取物及應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及制藥領域，具體而言，涉及卡他球菌提取物的制備方法及該方法所獲的提取物及應用。
【背景技術】
[0002]抗生素(antib1tics)是由微生物(包括細菌、真菌、放線菌屬)或高等動植物在生活過程中所產(chǎn)生的具有抗病原體或其它活性的一類次級代謝產(chǎn)物，能干擾其他生活細胞發(fā)育功能的化學物質(zhì)。
[0003]抗生素的發(fā)現(xiàn)和應用為感染性疾病的醫(yī)治開辟了新篇章，挽救了無數(shù)垂危的生命，功不可沒?？墒?，隨著抗生素的廣泛使用，甚至是濫用，大大的促進了細菌的變異、其抗藥性不斷的增強，造成了大量耐藥菌株的嚴重泛濫，而新抗生素的研制還遠遠跟不上耐藥菌的變異速度。目前，世界上研制一個新抗生素需要十幾年的時間，而濫用抗生素3-5年即可導致其失效。
[0004]例如，青霉素問世后，抗生素成了人類戰(zhàn)勝病菌的神奇武器。然而，人們很快發(fā)現(xiàn)雖然新的抗生素層出不窮，但是，抗生素奈何不了的耐藥菌也越來越多，耐藥菌的傳播令人擔憂。2003年的一項關于幼兒園兒童口腔衛(wèi)生情況的研究發(fā)現(xiàn)，兒童口腔細菌中約有15%是耐藥菌，97%的兒童口腔中藏有耐4-6種抗生素的細菌，雖然這些兒童在此前3個月中都沒有使用過抗生素。
[0005]從某種意義上說，現(xiàn)代醫(yī)學正在為它的成功付出代價。抗生素的普遍使用有力的抑制了普通細菌，客觀上減少了微生物世界的競爭，因而促進了耐藥性細菌的增長抗生素的普遍使用有力的抑制了普通細菌，客觀上減少了微生物世界的競爭，因而促進了耐藥性細菌的增長。
[0006]細菌耐藥基因的種類和數(shù)量增長速度之快，是無法用生物的隨機突變來解釋的。細菌不僅在同種內(nèi)，而且在不同的物種之間交換基因，甚至能夠從已經(jīng)死亡的同類散落的DNA中獲得基因。事實上，這些年來，每一種已知的致病菌都已或多或少的獲得了耐藥基因。研究人員對一株耐萬古霉素腸球菌的分析表明，它的基因組中，超過四分之一的基因，包括所有耐抗生素基因，都是外來的。耐多種抗生素的鮑氏不動桿菌也是在與其他菌種交換基因中獲得了大部分耐藥基因。
[0007]研究人員正在梳理鏈霉菌之類土壤微生物的DNA，他們對近500個鏈霉菌品系的每個菌種都檢測了對多種抗生素的耐藥性。結果，平均每種鏈霉菌能夠耐受七八種抗生素，有許多能夠耐受十四五種。對于試驗中用到的21種抗生素，包括泰利霉素和利奈唑胺這兩種全新的合成抗生素，研究人員在鏈霉菌中都發(fā)現(xiàn)了耐藥基因。研究發(fā)現(xiàn)，這些耐藥基因與致病菌中耐藥基因有著細微的差異。有證據(jù)表明，耐藥基因在從土壤到危重病人的旅途中，經(jīng)過了許多次轉移。
[0008]世界衛(wèi)生組織呼吁，為防止濫用抗生素而導致細菌產(chǎn)生抗藥性，歐盟決定從2006年I月起，全面禁止將抗生素作為生長促進劑。鑒于此，出于從生物安全角度出發(fā)，開辟新的抗菌、消炎藥物或者途徑已迫在眉睫。
[0009]有鑒于此，特提出本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]本發(fā)明的第一目的在于提供一種卡他球菌提取物的制備方法，所述的制備方法通過培養(yǎng)、熱浸提取以及離心等操作實現(xiàn)了卡他球菌提取物的制備，該提取物對多種感染病毒或者感染菌具有抑制效果，可作為新型的抗菌、殺毒或者消炎藥物的有效成分。
[0011]本發(fā)明的第二目的在于提供一種所述的制備方法制成的卡他球菌提取物，該卡他球菌提取物可長期保存，并通過皮內(nèi)注射的方式實現(xiàn)給藥，給藥方便。
[0012]本發(fā)明的第三目的在于提供所述的卡他球菌提取物的用途，以充分實現(xiàn)該提取物的應用價值。
[0013]為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術方案:
[0014]本發(fā)明提供了一種卡他球菌提取物的制備方法，包括以下步驟:
[0015]I)、將純培養(yǎng)的卡他球菌接種在培養(yǎng)基上，置于35?37°C環(huán)境內(nèi)培養(yǎng)18?20小時；
[0016]其中，所述培養(yǎng)基中，包括牛肉、蛋白胨、氯化鈉和蒸餾水；
[0017]2)、將菌苔用生理鹽水洗下，并用生理鹽水稀釋成每毫升含菌體250?350億的菌液；
[0018]3)、將所述菌液置于60?65°C的水環(huán)境內(nèi)進行熱浸30?40分鐘，得到熱浸液；
[0019]4)、將所述熱浸液冷卻至常溫，并以2800?3200轉/分的轉速離心30?40分鐘，剔除死菌體沉淀，吸出上清液；
[0020]5)、將所述上清液高壓蒸汽滅菌后自然冷卻至常溫，即得卡他球菌提取物。
[0021]上述的方法中，將經(jīng)過純培養(yǎng)的卡他球菌于特定的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)后，旺盛菌苔利用生理鹽水洗脫，并且稀釋成每毫升含菌體250?350億的菌液，于特定的溫度下熱浸特定的時間，熱浸的過程中，菌體被滅活，而活性成分析出，所得熱浸液經(jīng)過離心剔除死菌體，所得上清經(jīng)過滅菌、冷卻后即為最終產(chǎn)物。該方法選擇經(jīng)過純培養(yǎng)的卡他球菌，并且利用含有牛肉、蛋白胨、氯化鈉的培養(yǎng)基，且在熱浸提取的過程中具體溫度限定為60?650C，時間限定為30?40分鐘，該三個條件共奏，缺一不可；此外，在培養(yǎng)基培養(yǎng)的過程中，溫度和時間也經(jīng)過特定選擇，以保證菌體大量繁殖，在離心的過程中，轉速和時間也是特定的，以充分去除死菌體，且盡可能多地保留上清液。
[0022]因此，本發(fā)明提供的這種卡他球菌提取物的制備方法，對經(jīng)過純培養(yǎng)的卡他球菌，經(jīng)過特定的培養(yǎng)，熱浸以及離心分離的操作，才實現(xiàn)了具有藥效的提取物的制備，該提取物還通過提高機體的非特異性免疫發(fā)揮醫(yī)療效果。
[0023]可選的，在步驟I)中，所述的培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計，包括以下組份:
[0024]牛肉450?550份、蛋白胨8?12份、氯化鈉8?12份和蒸餾水980?1100份。
[0025]具有上述配比的肉浸液培養(yǎng)基，其可以滿足卡他球菌生長所需的大量的營養(yǎng)所需，為旺盛菌苔的生長提供了保障。
[0026]可選的，在步驟I)中，所述的培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計，包括以下組份:
[0027]牛肉480?500份、蛋白胨9?11份、氯化鈉9?11份和蒸餾水980?1000份。
[0028]可選的，所述培養(yǎng)基中，還包括瓊脂I?2份。
[0029]為了后續(xù)洗菌苔方便，優(yōu)選采用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)卡他球菌，因此，在培養(yǎng)基的組份中還包括瓊脂，冷卻后的瓊脂可以使得培養(yǎng)基各組份凝固，進而為倒平板培養(yǎng)卡他球菌提供了保障。
[0030]可選的，所述培養(yǎng)基的制備方法包括:
[0031]a)、將按照重量配比，將去掉脂肪、肌腱和筋膜后的牛肉切碎絞細，并加入蒸餾水，于I?4°C靜置過夜；
[0032]b)、將靜置后的蒸餾水和牛肉混合煎煮后壓濾，得到第一煎煮液；
[0033]C)、將所述第一煎煮液繼續(xù)煮沸，得到第二煎煮液，且所述第二煎煮液的質(zhì)量為所述第一煎煮液質(zhì)量的1/2?5/6 ;
[0034]d)、在所述第二煎煮液中加入既定重量的蛋白胨和氯化鈉，并補加蒸餾水，再調(diào)節(jié)PH后過濾，并對所得濾液滅菌，得到培養(yǎng)基。
[0035]在該制備方法中，牛肉去脂肪、肌腱和筋膜后再切碎絞細，使其所含的營養(yǎng)充分釋放，然后加入蒸餾水，并于I?4°C靜置過夜，該過程為牛肉浸提過程，牛肉中的大量水溶性養(yǎng)分會溶于水中，而且該溫度為I?4°C，一些對溫度敏感的營養(yǎng)成分可以得到有效的保護。煎煮的過程為進一步提取牛肉所含養(yǎng)分的操作，而且通過兩次煎煮提取，使得營養(yǎng)物質(zhì)提取完全。最后經(jīng)過補充蒸餾水之后，即可加入蛋白胨和氯化鈉，滅菌后即得培養(yǎng)基。
[0036]具體的，在步驟a)中，所述靜置的時間不少于36小時；在步驟b)中，煎煮的時間不少于20分鐘。
[0037]靜置時間不少于36小時，且在煎煮的過程中煎煮的時間至少為20分鐘，這樣肉浸液養(yǎng)分提取完全，利于卡他球菌的大量增殖和擴繁。
[0038]可選的，在步驟d)中，采用質(zhì)量濃度為15%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH。
[0039]利用15%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度，一方面利于操作，另一方面該濃度的氫氧化鈉對卡他球菌及其代謝物基本沒有抑制作用，進一步保證了卡他球菌的正常代謝水平。
[0040]所述的制備方法提取的卡他球菌提取物。
[0041]所述的卡他球菌提取物在制備治療提高機