單域抗體中可能存在或不存在恒定區(qū)或恒定區(qū)的部分。 例如，來自駱駝科的天然單可變區(qū)抗體包括VHH可變區(qū)，及CH2和CH3恒定區(qū)。單域抗體 可以是通過與常規(guī)抗體類似的方法進(jìn)行人源化的對(duì)象。Dab型抗體通常由人源抗體獲得。 納米體型抗體來源于駱駝科或鯊魚，且可作為人源化對(duì)象。可通過重組DNA技術(shù)或通過完 整免疫球蛋白的酶促或化學(xué)分離產(chǎn)生片段。術(shù)語"抗體"還包括雙特異性抗體。雙特異性 或雙功能性抗體是具有兩個(gè)不同重鏈/輕鏈對(duì)和兩個(gè)不同結(jié)合位點(diǎn)的人工雜交抗體（參 見，例如，Songsivilai和Lachmann,Clin.Exp.Immunol.，79:315-321 (1990);Kostelny等， J.Immunol. , 148:1547-53(1992)) 〇
[0049] 術(shù)語"表位"是指抗原上與抗體結(jié)合的位點(diǎn)。表位可由連續(xù)的氨基酸或通過一種 或多種蛋白三級(jí)折疊并列的非連續(xù)氨基酸形成。連續(xù)氨基酸形成的表位通常在暴露于變性 溶劑時(shí)被保留，而通過三級(jí)折疊形成的表位通常在變性溶劑處理時(shí)丟失。表位在獨(dú)特空間 構(gòu)象中通常包括至少3個(gè)，更常見至少5個(gè)或8-10個(gè)氨基酸。當(dāng)認(rèn)為表位在蛋白質(zhì)的氨基 酸殘基的范圍內(nèi)（例如，在tau的殘基25至44內(nèi)）時(shí)，所述范圍包括界定其邊界的殘基。 在范圍內(nèi)的某些殘基有助于表位，而其它的則沒有作用。形成表位的殘基可以是相互連續(xù) 或可以不是連續(xù)的。相似地，當(dāng)抗體與氨基酸的特定范圍內(nèi)發(fā)現(xiàn)的表位結(jié)合時(shí)，所述抗體不 需要與范圍內(nèi)的全部氨基酸殘基接觸，且由抗體接觸的表位的殘基可以是相互連續(xù)或可以 是不連續(xù)的。確定表位空間構(gòu)象的方法包括，例如，X-射線晶體法和2維核磁共振。參見， 例如，EpitopeMappingProtocols,inMethodsinMolecularBiology,第 66 卷，Glenn E.Morris,編（1996)。
[0050] 識(shí)別相同或重疊表位的抗體可在簡單的免疫測定中確定，其示出了一種抗體與另 一種抗體競爭結(jié)合靶抗原的能力?？贵w的表位還可通過與抗原結(jié)合的抗體的X-射線晶體 法限定以確定接觸殘基?；蛘撸绻档突蛳c一種抗體結(jié)合的抗原中的所有氨基酸突 變降低或消除與另一種抗體的結(jié)合，則兩個(gè)抗體具有相同表位。如果降低或消除與一種抗 體結(jié)合的一些氨基酸突變降低或消除與另一種抗體的結(jié)合，則兩個(gè)抗體具有重疊表位。本 發(fā)明包括與16B5競爭和/或與16B5在tau的相同表位結(jié)合的抗體。
[0051] 通過檢驗(yàn)測定抗體之間的競爭，其中試驗(yàn)抗體抑制參照抗體（例如16B5)與共同 抗原的特異性結(jié)合（參見，例如，Junghans等，CancerRes. 50:1495, 1990)。如果試驗(yàn)抗體 過量（例如，至少2x、5x、10x、20x或IOOx)抑制參照抗體結(jié)合至少50 %但優(yōu)選地75 %、90 % 或99%，如競爭結(jié)合檢驗(yàn)中測得的，則試驗(yàn)抗體與參照抗體競爭。通過競爭分析（競爭抗 體）測定的抗體包括與參照抗體結(jié)合相同表位的抗體，及與參照抗體結(jié)合的表位足夠近的 相鄰表位結(jié)合用于空間位阻發(fā)生的抗體。
[0052] 術(shù)語"患者"包括接受預(yù)防性或治療性處理的人或其它哺乳動(dòng)物受試者。
[0053] 為了將氨基酸取代分為保守的或非保守的，氨基酸分組如下：第I組（疏水性側(cè) 鏈）：甲硫氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸；第II組（中性親水側(cè)鏈）：半胱氨酸、 絲氨酸、蘇氨酸；第III組（酸性側(cè)鏈）：天冬氨酸、谷氨酸；第IV組（堿性側(cè)鏈）：天冬氨 酰、谷氨酰、組氨酸、賴氨酸、精氨酸；第V組（殘基影響鏈方向）：甘氨酸、脯氨酸；及第VI 組（芳香族側(cè)鏈）：色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸。保守的取代包括同類別的氨基酸之間的取 代。非保守的取代構(gòu)成這些類別中的一個(gè)氨基酸向另一氨基酸的轉(zhuǎn)換。
[0054] 通過Kabat編號(hào)慣例最大限度地對(duì)齊抗體序列來確定百分比序列同源性。對(duì)齊之 后，如果將受試者抗體區(qū)域（例如，輕鏈或重鏈的整個(gè)成熟的可變區(qū)）與參照抗體的相同區(qū) 域比較，受試者抗體與參照抗體區(qū)域之間的百分比序列同源性是在受試者抗體和參照抗體 區(qū)域由相同氨基酸占據(jù)的位置數(shù)除以兩個(gè)區(qū)域?qū)R位置的總數(shù)（缺口不計(jì)算在內(nèi)），乘以 1〇〇換算成百分比。
[0055] 術(shù)語"佐劑"是指與抗原一起施用時(shí)增強(qiáng)和/或改變抗原的免疫響應(yīng)，但單獨(dú)施用 時(shí)不產(chǎn)生對(duì)抗原的免疫響應(yīng)的化合物。佐劑可以通過幾種機(jī)制增強(qiáng)免疫響應(yīng)，所述機(jī)制包 括淋巴細(xì)胞募集、B和/或T細(xì)胞的刺激以及巨噬細(xì)胞刺激。
[0056] 如果一群疾病患者的腦中tau水平增加，或tau沉積或包裹體增加，或腦中存在 tau纏結(jié)，或腦中tau磷酸化增加（每分子tau磷酸基團(tuán)的平均數(shù)），或與不知道患神經(jīng)疾 病的患者群相比tau的異常細(xì)胞間或細(xì)胞內(nèi)傳送，則該疾病與tau相關(guān)。如果與帶有野生 型（最常發(fā)生在人類群體的變異）tau基因的患者相比，帶有變異型tau基因的患者患病風(fēng) 險(xiǎn)增加，則該病也與tau有關(guān)。
[0057] 如果受試者具有至少一個(gè)已知風(fēng)險(xiǎn)因素（例如，遺傳學(xué)、生物化學(xué)、家族史、病情 暴露），該風(fēng)險(xiǎn)因素使具有該風(fēng)險(xiǎn)因素的個(gè)體比不具有風(fēng)險(xiǎn)因素的個(gè)體處于統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著 的更大患病風(fēng)險(xiǎn)，則個(gè)體患病風(fēng)險(xiǎn)增加。
[0058] 術(shù)語"癥狀"是指疾病的主觀證據(jù)，如患者感覺到的變化的步態(tài)。"體征"是指醫(yī)師 觀察到的疾病的客觀證據(jù)。
[0059]統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性意為p<0? 05。
【具體實(shí)施方式】
[0060]I?概要
[0061] 本發(fā)明提供了與tau結(jié)合的抗體。一些抗體與SEQIDNO. 1的殘基23-46內(nèi)的表 位特異性結(jié)合。一些抗體與tau結(jié)合，與其磷酸化狀態(tài)無關(guān)。本發(fā)明的一些抗體用于抑制 或延遲tau-相關(guān)病狀及其相關(guān)癥狀惡化。盡管本發(fā)明的實(shí)踐不需要機(jī)制的理解，但通過 穩(wěn)定無毒構(gòu)象或通過抑制tau致病形式的細(xì)胞間或細(xì)胞內(nèi)傳送以及其它機(jī)制，毒性降低是 由誘導(dǎo)tau的吞噬作用，在分子間或分子內(nèi)的聚集、或結(jié)合于其它分子時(shí)抑制tau的抗體導(dǎo) 致的。本發(fā)明的抗體或誘導(dǎo)所述抗體的試劑可用于治療或?qū)崿F(xiàn)預(yù)防阿爾茨海默病及其它與 tau相關(guān)的疾病的方法中。
[0062]II.Tau
[0063] 除非上下文中另有明顯說明，tau的引用是指天然人源化形式tau，包括所有同種 型，與是否存在翻譯后修飾（例如，磷酸化、糖基化或乙?；o關(guān)。人腦中主要存在六個(gè) tau同種型（剪接變異體）。這些變體中最長的具有441個(gè)氨基酸，其中初始甲硫氨酸殘基 被裂解。根據(jù)441同種型編號(hào)殘基。因此，例如，引用在位置404的磷酸化意為441同種型 的位置404,或任何其它同種型與441同種型最大限度對(duì)齊時(shí)的相應(yīng)位置。同種型的氨基酸 序列及Swiss-Prot編號(hào)如下所示。
[0064]P10636-8(SEQIDN0:1)


[0077]tau的引用包括已知的大約30個(gè)Swiss-Pro數(shù)據(jù)庫中列舉的天然變異體及 其排列，以及與tau病理學(xué)相關(guān)的突變，如癡呆、皮克氏病、核上性麻痹等（參見，例如， Swiss-Prodatabase和Poorkaj,等，AnnNeurol. 43:815-825(1998))。由 441 同種型編 號(hào)的tau突變體的一些實(shí)例是賴氨酸在氨基酸殘基257 (K257T)突變?yōu)樘K氨酸；異亮氨酸 在氨基酸位置260 (I260V)突變?yōu)槔i氨酸；甘氨酸在氨基酸位置272 (G272V)突變?yōu)槔i氨 酸；天冬酰胺在氨基酸位置279 (N279K)突變?yōu)橘嚢彼幔惶於０钒痹诨嵛恢?96 (N296H) 突變?yōu)榻M氨酸；脯氨酸在氨基酸位置301 (P301S)突變?yōu)榻z氨酸；甘氨酸在氨基酸位置 303 (G303V)突變?yōu)槔i氨酸；絲氨酸在位置305 (S305N)突變?yōu)樘於滨?；甘氨酸在氨基酸?置335(G335S)突變?yōu)榻z氨酸；纈氨酸在位置337(V337M)突變?yōu)榧琢虬彼?；谷氨酸在位?342 (E342V)突變?yōu)槔i氨酸；賴氨酸在氨基酸位置369 (K3691)突變?yōu)楫惲涟彼?；甘氨酸在?基酸位置389 (G389R)突變?yōu)榫彼?；及精氨酸在氨基酸位?06 (R406W)突變?yōu)樯彼帷?br>[0078]Tau可在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基處被磷酸化，其包括酪氨酸在氨基酸位置18、29、 97、310 和 394,絲氨酸在氨基酸位置 184、185、198、199、202、208、214、235、237、238、262、 293、324、356、396、400、404、409、412、413 和 422 ;及蘇氨酸在氨基酸位置 175、181、205、 212、217、231和 403。
[0079]III?抗體
[0080]A.結(jié)合特異件和功能特件
[0081] 本發(fā)明提供了與tau結(jié)合的抗體。一些抗體與SEQIDNO. 1的殘基23-46內(nèi)的表 位特異性結(jié)合。一些抗體與SEQIDNO. 1的殘基25-44內(nèi)的表位特異性結(jié)合。一些抗體與 SEQIDNO. 1的殘基28-41內(nèi)的表位特異性結(jié)合。一些抗體與SEQIDNO. 1的殘基30-39 內(nèi)的表位特異性結(jié)合。一些抗體與SEQIDNO. 1的殘基30-36內(nèi)的表位特異性結(jié)合。一些 抗體與SEQIDNO. 1的殘基33-39內(nèi)的表位特異性結(jié)合。一些抗體與SEQIDNO. 1的殘基
35-37、35-38、35-39、35-40、35-41、36-38、36-39、36-40、36-41 的表位特異性結(jié)合。一些抗 體與tau結(jié)合，與其磷酸化狀態(tài)無關(guān)。一些抗體與不包含磷酸化殘基的表位結(jié)合。可通過純 化自天然來源或重組表達(dá)的tau多肽進(jìn)行免疫來獲得這些抗體。可篩選抗體用于結(jié)合未磷 酸化形式的tau及其中易受磷酸化作用的一個(gè)或幾個(gè)殘基已磷酸化的tau。此類抗體優(yōu)選 地以不可辨別的親和力或至少與非磷酸化tau(即，"pan特異性"）相比具有1. 5、2或3倍 的系數(shù)來結(jié)合磷酸化tau。16B5是pan特異性單克隆抗體的實(shí)例。本發(fā)明還提供了與任何 上述抗體相同表位（如，16B5的表位）結(jié)合的抗體。還包括與任何上述抗體競爭結(jié)合tau 的抗體，例如，與16B5競爭。
此類殘基的片段進(jìn)行免疫，并篩選用于特異性結(jié)合包括此類殘基的肽重新產(chǎn)生上述抗體。 此類肽優(yōu)選地連接于幫助引發(fā)抗體對(duì)肽的響應(yīng)的異源綴合物分子。可直接地或通過間隔肽 或氨基酸連接。半胱氨酸用作間隔氨基酸，因?yàn)槠溆坞xSH基團(tuán)有利于連接載體分子。還 可使用在甘氨酸和肽之間含有或不含有半胱氨酸殘基的聚甘氨酸連接子（例如，2-6個(gè)甘 氨酸）。載體分子用于有助于引發(fā)抗體對(duì)肽的響應(yīng)的T-細(xì)胞表位。常用的幾種載體具體 為匙孔血藍(lán)蛋白（KLH)、卵清蛋白和牛血清蛋白（BSA)。肽間隔基可被添加到肽免疫原作 為固相肽合成的一部分。載體通常通過化學(xué)交聯(lián)加入?？梢允褂玫幕瘜W(xué)交聯(lián)劑的一些實(shí) 例包括交叉-N-馬來酰亞胺基-6-氨基乙酰基酯或間-馬來酰亞胺苯甲?；?N-羥基琥 I白酰亞胺酯（MBS)(參見，例如，Harlow,E?等，Antibodies:ALaboratoryManual,Cold SpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y. 1988；Sinigaglia等， Nature, 336:778-780(1988);Chicz等，J.Exp?編，178:27-47(1993)!Hammer等，Cell 74:197-203(1993);FalkK?等，Immunogenetics, 39:230-242(1994) ;W0 98/23635;以及 Southwood等，J.Immunology, 160:3363-3373(1998))。如果存在載體和間隔基，其可被連 接到免疫原的任一端。
/或tau的磷酸化和未磷酸化的形式進(jìn)行結(jié)合的能力，如，位置404磷酸化的tau全長同種 型。所述肽可以連接到載體或其它標(biāo)簽以促進(jìn)篩選檢驗(yàn)。在這種情況下，載體或標(biāo)簽優(yōu)選 地不同于用于免疫的間隔基和載體分子的組合以清除特異于間隔基或載體而不是tau肽 的抗體?？墒褂萌魏蝨au同種型。
[0084] 對(duì)于選定小鼠抗體（例如，16B5)具有結(jié)合特異性的抗體還可使用噬菌體變體顯 示方法產(chǎn)生。參見Winter,WO92/20791。這種方法特別適合產(chǎn)生人抗體。在這種方法中， 選定小鼠抗體的重鏈或輕鏈可變區(qū)可用作起始材料。如果，例如，選擇輕鏈可變區(qū)為起始材 料，則構(gòu)建噬菌體庫，其中成員顯示相同的輕鏈可變區(qū)（即，小鼠起始材料）和不同的重鏈 可變區(qū)。例如，重鏈可變區(qū)可由重排的人重鏈可變區(qū)庫獲得。選擇顯示所需靶標(biāo)（例如， tau肽）強(qiáng)特異性結(jié)合（例如，至少IO8且優(yōu)選地至少IO9M1)的噬菌體。然后，所述噬菌體 的重鏈可變區(qū)用作起始材料構(gòu)建進(jìn)一步的噬菌體庫。在這個(gè)庫中，每個(gè)噬菌體顯示相同的 重鏈可變區(qū)（即，第一個(gè)顯示庫確定的所述區(qū)）和不同的輕鏈可變區(qū)。例如，輕鏈可變區(qū)可 由重排的人輕鏈可變區(qū)庫獲得。再次選擇顯示所需靶標(biāo)強(qiáng)特異性結(jié)合的噬菌體。所獲得抗 體通常與小鼠起始材料具有相同或相似的表位特異性。
[0085] 可通過誘變編碼示例性抗體（如16B5)的重鏈和輕鏈的cDNA獲得其它抗體。本 發(fā)明中還包括與16B5成熟的重鏈和/或輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列至少90%、95%或99% 相同并保持其功能特性的單克隆抗體，和/或通過少量功能上不重要的氨基酸取代（例如， 保守取代）、缺失或插入其與相應(yīng)抗體不同。本發(fā)明還包括具有至少一個(gè)且優(yōu)選地全部六個(gè) 如Kabat所定義的⑶R的單克隆抗體，所述⑶R與16B5的相應(yīng)⑶R的90%、95%、99 %或 100%相同。
[0086] B.非人抗體
[0087] 其它針對(duì)免疫原的非人單克隆抗體的產(chǎn)生，例如，小鼠、豚鼠、靈長類動(dòng)物、兔 或大鼠，可通過，例如，用上述免疫原免疫動(dòng)物進(jìn)行。參見Harlow&Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (CSHP NY, 1988)(通過引用的方式并入本文）。這種免疫原可以通過肽 合成或重組表達(dá)由天然來源獲得。
[0088] 可選地，免疫原可與佐劑一起施用?？墒褂萌缦滤龅膸追N類型的佐劑。優(yōu)選的 用于免疫實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物的是完全弗氏佐劑（CompleteFreund'sadjuvant)后伴隨不完全佐 劑。兔或豚鼠通常用于制備單克隆抗體。小鼠通常用于制備單克隆抗體。篩選特異性結(jié)合 的抗體，任選地，進(jìn)一步篩選與tau的特定區(qū)結(jié)合的抗體?？赏ㄟ^測定抗體與tau的缺失突 變體集合的結(jié)合并確定哪個(gè)缺失突變體結(jié)合所述抗體完成此類篩選。例如，可通過Western 印跡、FACS?或ELISA評(píng)價(jià)結(jié)合。
[0089] C.人源化抗體
[0090] 人源化抗體是基因工程抗體，其中將非人"供體"抗體（例如，16B5)的 CDR移植到人"受體"抗體序列（參見，例如，Queen,US5, 530, 101和5, 585, 089 ; Winter1US5, 225, 539,Carter,US6, 407, 213,Adair,US5, 859, 2056, 881, 557,Foote,US 6, 881, 557)。受體抗體序列可以是，例如，成熟的人抗體序列、此類序列的組合、人抗體序列 的共同序列或胚系區(qū)序列。因此，人源化抗體是一種抗體，其具有一些或全部完全地或基本 上來自供體抗體的CDR以及（如果存在）完全地或基本上來自人抗體序列的可變區(qū)框架序 列和恒定區(qū)。相似地人源化的重鏈具有至少一個(gè)、兩個(gè)及通常所有三個(gè)完全地或基本上來 自供體抗體重鏈的CDR，以及（如果存在）基本上來自人重鏈可變區(qū)框架和恒定區(qū)序列的 重鏈可變區(qū)框架序列和重鏈恒定區(qū)。相似地人源化的輕鏈具有至少一個(gè)、兩個(gè)及通常所有 三個(gè)完全地或基本上來自供體抗體輕鏈的CDR，以及（如果存在）基本上來自人輕鏈可變 區(qū)框架和恒定區(qū)序列的輕鏈可變區(qū)框架序列和輕鏈恒定區(qū)。除了納米體和dAbs，人源化抗 體包括人源化的重鏈和人源化的輕鏈。人源化抗體中的CDR基本上來自非人抗體中相應(yīng)的 ⑶R，其中各自的⑶R之間至少85%、90%、95%或100%相應(yīng)的殘基（如Kabat所定義的） 是相同的。抗體鏈的可變區(qū)框架序列及抗體鏈的恒定區(qū)基本上分別來自人可變區(qū)框架序列 或人恒定區(qū)，其中至少85%、90%、95%或100%如Kabat所定義的相應(yīng)殘基是相同的。
[0091] 盡管人源化抗體通常合并了來自小鼠抗體的所有六個(gè)⑶R(優(yōu)選地如Kabat所 定義的），但是它們也可由少于所有來自小鼠抗體的CDR(例如，至少3、4或5個(gè)）制 備（例如，Pascalis等，J.Immunol. 169:3076, 2002;Vajdos等，JournalofMolecular Biology, 320:415-428, 2002;Iwahashi等，Mol.Immunol. 36:1079-1091，1999;Tamura等， JournalofImmunology, 164:1432-1441，2000) 〇
[0092] 在一些抗體中，只需要CDR的一部分保持人源化抗體中的結(jié)合，所述CDR的一部 分，即結(jié)合所必需的⑶R殘基亞類，稱為SDR。不接觸抗原且不在SDR中的⑶R殘基可基于 以前的研究（例如，⑶RH2中的殘基H60-H65通常不需要），從喬西亞高變區(qū)環(huán)（Chothia hypervariableloop)外的KabatCDR區(qū)（Chothia，J.Mol.Biol. 196:901，1987)，通過分子 建模和/或經(jīng)驗(yàn)地，或如Gonzales等，Mol.Immunol. 41:863, 2004中所描述而確定。在位 于一個(gè)或多個(gè)供體CDR殘基缺失或整個(gè)供體CR被省略的位置的此類人源化抗體中，占據(jù)所 述位置的氨基酸可以是占據(jù)受體抗體序列中相應(yīng)位置（通過Kabat編號(hào)）的氨基酸。CDR 中包括的供體氨基酸的受體的此類取代數(shù)目反應(yīng)了競爭考慮的平衡。此類取代對(duì)減少人源 化抗體中小鼠氨基酸數(shù)量具有潛在優(yōu)勢，且因此降低潛在免疫原性。然而，取代還可能導(dǎo)致 親和性的變化，且優(yōu)選地避免親和性的顯著降低。還可經(jīng)驗(yàn)地選擇CDR內(nèi)的取代的位置及 待取代的氨基酸。
[0093] 任選地人受體抗體序列可選自許多已知的人抗體序列以在人受體序列可變區(qū)框 架和相應(yīng)的供體抗體鏈的可變區(qū)框架之間提供高度的序列同源性（例如，65-85 %的同源 性）。
[0094] 某些人可變區(qū)框架殘基的氨基酸可基于其對(duì)CDR構(gòu)象和/或結(jié)合抗原的影響被選 擇用于取代。通過建模、檢測特定位置的氨基酸特征或?qū)μ囟ò被岬娜〈蛲蛔冃?yīng)的 經(jīng)驗(yàn)觀察，來研究此類可能的影響。
[0095] 例如，當(dāng)小鼠可變區(qū)框架殘基與選定的人可變區(qū)框架殘基之間的氨基酸不同時(shí)， 可合理地預(yù)期所述氨基酸時(shí)人框架氨基酸可被來自小鼠抗體的等效的框架氨基酸等效的 來自小鼠抗體的框架氨基酸取代：
[0096] (1)非共價(jià)地直接結(jié)合抗原；
[0097] (2)與CDR區(qū)相鄰；
[0098] (3)另外與⑶R區(qū)（例如，在⑶R區(qū)約6人內(nèi)）相互作用（例如，通過在同源的已 知免疫球蛋白鏈的已解析結(jié)構(gòu)上對(duì)輕鏈或重鏈建模來確定）；以及
[0099] (4)參與VL-VH界面的殘基。
[0100]Queen，US5, 530, 101定義的類別（1)-(3)的框架殘基有時(shí)交替地稱為典型殘基 和游標(biāo)殘基。對(duì)確定CDR環(huán)構(gòu)象的供體CDR環(huán)的典型類別進(jìn)行界定的框架殘基有時(shí)稱為 典型殘基（Chothia和Lesk,J.Mol.Biol. 196, 901-917 (1987)，Thornton&MartinJ.Mol. Biol.，263, 800-815, 1996)。支持抗原結(jié)合環(huán)構(gòu)象在抗體對(duì)抗原的適配其起微調(diào)作用的一 層框架殘基有時(shí)稱為游標(biāo)殘基（Foote&Winter，1992,JMolBio. 224, 487 - 499)。其它取代 的候選是創(chuàng)建潛在糖基化位點(diǎn)的殘基。其它取代的候選是受體人框架氨基酸，其對(duì)于那個(gè) 位置上的人免疫球蛋白是不常見的。這些氨基酸可由來自小鼠供體抗體等效位置或更典型 的人免疫球蛋白的等效位置的氨基酸取代。其它取代的候選是受體人框架氨基酸，其對(duì)于 那個(gè)位置上的人免疫球蛋白是不常見的。
[0101] 本發(fā)明提供了小鼠16B5抗體的人源化形式。所述小鼠抗體包含成熟的重鏈和輕 鏈可變區(qū)，其分別具有包括SEQIDNOS. 10和16的氨基酸序列。本發(fā)明提供了一個(gè)示例性 的人源化成熟的重鏈可變區(qū)（Hl)和三個(gè)示例性的人源化成熟的輕鏈可變區(qū)（L1、L2和L3)。 H1L2變異體具有與嵌合的16B5相同或更好的親和性及七個(gè)回復(fù)突變。HlLl和H1L3具有 與嵌合的16B5相似的親和性及六個(gè)回復(fù)突變。
[0102] 本發(fā)明提供了H1L2人源化的16B5抗體變異體，其中人源化成熟的重鏈可變區(qū)示 出了與SEQID勵(lì)：15至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性，人源化成熟的輕 鏈可變區(qū)示出了與SEQID