苯并咪唑類(lèi)化 合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0109] 實(shí)施例11、黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物的抗微生物活性
[0110] 采用96孔微量稀釋法檢測(cè)實(shí)施例1-1~3、II-1~9與III-1~7制得的黃連 素苯并咪唑類(lèi)化合物對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌（金黃色葡萄球菌ATCC250、耐甲氧西林金黃色葡萄 球菌N315、枯草芽孢桿菌、藤黃微球菌）、革蘭氏陰性菌（大腸桿菌JM109、大腸桿菌DH52、 銅綠假單胞菌、痢疾志賀菌、變形桿菌）和真菌（產(chǎn)朊假絲酵母菌、黃曲霉菌、啤酒酵母菌 和白色念珠菌）的最低抑菌濃度（MIC)，該方法符合1993年美國(guó)國(guó)家委員會(huì)制定的臨床實(shí) 驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)（NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards,NCCLS)，是將化合物 樣品用少量二甲亞砜溶解，再加水稀釋制成濃度為12. 8mg/mL的溶液，再用培養(yǎng)液稀釋至 512yg/mL，35°C培養(yǎng)24~72小時(shí)，將培養(yǎng)板置振蕩器上充分?jǐn)嚬春?，用分光光度?jì)于波長(zhǎng) 490nm處測(cè)定MIC5。。結(jié)果見(jiàn)表1〇
[0111] 表1黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物的抗微生物活性[MIC5。（yg/mL)]
[0112]
[0113] 由表1可知，在抗細(xì)菌活性方面，黃連素唑類(lèi)化合物1-1~3、II-1~9和III-1~ 7對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌具有廣譜抑制作用，大部分活性強(qiáng)于黃連素。其中，在抗 革蘭氏陽(yáng)性菌方面，苯并咪唑環(huán)上癸烷取代化合物II-6對(duì)金黃色葡萄球菌ATCC250的抑 制活性（MIC5。為4yg/mL)強(qiáng)于氯霉素（MIC5。為8yg/mL)與諾氟沙星（MIC5。為8yg/mL); 化合物1-2、11-2、II-4與III-7對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌N315的抑制活性（MIC5。為 4~8yg/mL)強(qiáng)于氯霉素（MIC5。為16yg/mL);化合物II-5對(duì)枯草芽孢單菌的抑制活性 (MIC5。為8yg/mL)強(qiáng)于氯霉素（MIC5。為32yg/mL)。苯并咪唑環(huán)上鄰氟芐基取代化合物 III-2金黃色葡萄球菌的抑制活性（MIC5。為2yg/mL)顯著強(qiáng)于諾氟沙星（MIC5。為8yg/mL)。在抗革蘭氏陰性菌方面，化合物II-5對(duì)銅綠假單胞菌的抑制活性（MIC5。為8yg/mL) 強(qiáng)于氯霉素（MIC5。為16 yg/mL);化合物1-1、11-2、11-3、11-4、11-6、II-7 與III-4 對(duì)傷 寒桿菌的抑制活性（MIC5。為2~16 yg/mL)強(qiáng)于氯霉素（MIC5。為32 yg/mL)，部分與諾氟 沙星（MIC5。為4yg/mL)活性相當(dāng)甚至更強(qiáng)。
[0114] 在抗真菌活性方面，黃連素唑類(lèi)化合物1-1~3、II-1~9和III-1~7對(duì)真菌的 的抑制活性強(qiáng)于黃連素。其中，黃連素唑類(lèi)化合物II-4與II-6對(duì)白色念珠菌具有較好的 抑制活性（MIC5。為4~8yg/mL)，顯著強(qiáng)于黃連素（MIC5。> 512yg/mL);化合物1-1~3、 II-2 ~4、11-6、II-7 ~8、11-6、111-2、III-4 和III-7 對(duì)黃曲霉菌的抑制活性（MIC50為 8~128yg/mL)比氟康唑（MIC5。為256yg/mL)更強(qiáng)；苯并咪唑環(huán)上2, 4-二氯芐基取代化 合物III-7對(duì)假絲酵母菌的抑制活性（MIC5。為2yg/mL)優(yōu)于氟康唑（MIC5。為4yg/mL)。
[0115] 雖然表1只提供了部分具有代表性的黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物的抗微生物活性 檢測(cè)結(jié)果，但本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)表1給出的結(jié)果和本領(lǐng)域的專(zhuān)業(yè)知識(shí)，可以預(yù)測(cè)本發(fā)明 所述的通式1-1~3、II-1~9和III-1~7所示的其它結(jié)構(gòu)的黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物 及其藥學(xué)上可接受的鹽也具有相同或相近的抗微生物活性。
[0116] 實(shí)施例12、黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物的制藥用途
[0117] 根據(jù)上述抗微生物活性檢測(cè)結(jié)果，本發(fā)明的黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物具有較好的 抗微生物活性，因此，黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物或其藥用鹽可以制成抗微生物藥物供臨床 使用。所述抗微生物藥物既可以是單方制劑，例如由一種結(jié)構(gòu)的黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽與藥學(xué)上可接受的輔料制成；也可以是復(fù)方制劑，例如由一種結(jié)構(gòu) 的黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與已有抗細(xì)菌、抗真菌活性成分（如諾 氟沙星、環(huán)丙沙星、磺胺甲噁唑、氟康唑、磷氟康唑、伊曲康唑等）以及藥學(xué)上可接受的輔料 制成，或者由不同結(jié)構(gòu)的幾種黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與藥學(xué)上可 接受的輔料制成。所述制劑類(lèi)型包括但不限于片劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、滴丸劑、注射劑、 粉針劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、栓劑、軟膏劑、凝膠劑、膜劑、氣霧劑、透皮吸收貼劑等劑型， 以及各種緩釋、控釋制劑和納米制劑。
[0118] 1、片劑1的制備
[0119] 處方：化合物1-1 l〇g，乳糖187g，玉米淀粉50g，硬脂酸鎂3. 0g，體積百分濃度為 70%的乙醇溶液適量，共制成1000片。
[0120] 制法：將玉米淀粉于105°C干燥5小時(shí)備用；將化合物1-1與乳糖、玉米淀粉混合 均勻，用70%乙醇溶液制軟材，過(guò)篩制濕顆粒，干燥，過(guò)篩整粒，再加入硬脂酸鎂，壓片，即 得；每片重250mg，活性成分含量為10mg。
[0121] 2、片劑2的制備
[0122] 處方：化合物II-8 10g，乳糖80g，微晶纖維素5. 0g，硬脂酸鎂5. 0g，共制成200 片。
[0123] 制法：將化合物II-8與乳糖、微晶纖維素和硬脂酸鎂混合均勻，壓片，即得；每片 重〇? 5g，活性成分含量為50mg。
[0124] 3、膠囊劑的制備
[0125] 處方：化合物II-2 10g，乳糖188g，硬脂酸鎂2.0g，體積百分濃度為70%的乙醇溶 液適量，共制成1000粒。
[0126] 制法：將化合物11-2、乳糖和硬脂酸鎂混合均勻，過(guò)篩，裝入空膠囊中，即得；每粒 膠囊內(nèi)容物重200mg，活性成份含量為10mg。
[0127] 4、顆粒劑的制備
[0128] 處方：化合物II-3 126g，糊精120g，蔗糖280g。
[0129] 制法：將化合物11-3、糊精和蔗糖混合均勾，濕法制粒，60°C干燥，分裝，即得。
[0130] 5、注射劑的制備
[0131] 處方：化合物II-l10g，丙二醇500mL，注射用水500mL，共制成lOOOmL。
[0132] 制法：稱(chēng)取化合物11-1，加入丙二醇和注射用水，攪拌溶解，再加入lg活性炭，充 分?jǐn)嚢韬箪o置15分鐘，用5ym鈦棒過(guò)濾脫炭，再依次用孔徑為0. 45ym和0. 22ym的微孔 濾膜精濾，最后灌封于10mL安瓿中，10(TC流通蒸氣滅菌45分鐘，即得。
[0133] 6、粉針劑的制備
[0134] 制法：將化合物II-2的無(wú)菌粉末在無(wú)菌條件下分裝，即得。
[0135] 7、滴眼劑的制備
[0136] 處方：化合物II-9 3. 78g，氯化鈉0. 9g，苯乙醇3g，硼酸緩沖溶液適量，蒸餾水加 至 1000mL。
[0137] 制法：將化合物II-9和氯化鈉加至600mL蒸餾水中，溶解完全后用硼酸緩沖溶液 調(diào)節(jié)pH至6. 5,加入苯乙醇，再加蒸餾水至1000mL，攪拌均勾，微孔濾膜過(guò)濾，灌裝，密封， 100°C流通蒸氣滅菌1小時(shí)，即得。
[0138] 8、搽劑的制備
[0139] 處方：化合物III-l4g，鉀肥阜7. 5g，樟腦5g，蒸餾水加至100mL。
[0140] 制法：將樟腦用體積百分濃度為95 %的乙醇溶液溶解，備用；將鉀肥皂加熱液化， 備用；稱(chēng)取化合物111-1，在不斷攪拌下加入鉀肥皂液和樟腦乙醇溶液，再逐漸加入蒸餾 水，乳化完全后再加入蒸餾水至全量，即得。
[0141] 9、栓劑的制備
[0142] 處方：化合物III-4 4g，明膠14g，甘油70g，蒸餾水加至100mL，共制成100枚。
[0143] 制法：稱(chēng)取明膠和甘油，加蒸餾水至100mL，水浴60°C加熱熔化，呈糊狀時(shí)加入化 合物111-4,攪拌均勻，近凝固時(shí)倒入陰道栓模具中，冷卻凝固，即得。
[0144] 10、軟膏劑的制備
[0145] 處方：化合物II1_3 0. 5~2g，十六醇6~8g，白凡士林8~10g，液體石錯(cuò)8~ 19g，單甘酯2~5g，聚氧乙?。?0)硬脂酸酯2~5g，甘油5~10g，尼泊金乙酯0.lg，蒸餾 水加至l〇〇g。
[0146] 制法：將十六醇、白凡士林、液體石錯(cuò)、單甘酯和聚氧乙烯（40)硬脂酸酯加熱完全 融化后混勻，保溫80°C，作為油相備用；將尼泊金乙酯加至甘油和蒸餾水中，加熱至85°C溶 解，再在不斷攪拌下加入油相，乳化后加入化合物111-3,攪拌冷卻，即得。
[0147]最后說(shuō)明的是，以上優(yōu)選實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通 過(guò)上述優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在 形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作出各種各樣的改變，而不偏離本發(fā)明權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物及其可藥用鹽，通式如I~III所示：式中， 通式I中，R為氫、甲基、硝基或鹵素取代基；通式II中，n為大于或等于O的整數(shù)；X1，X2和X3為H、硝基或鹵素。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物及其可藥用鹽，其特征在于：R為氫或 鹵素；n為O~20的整數(shù)；X1，X2和X3為H、硝基或鹵素。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物及其可藥用鹽，其特征在于，所述黃 連素苯并咪唑類(lèi)化合物為下述化合物中的任一種：4. 權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物及其可藥用鹽的制備方法，其 特征在于，包括以下步驟： a. 通式I所示黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物的制備：合成通式V所示黃連素類(lèi)化合物，然 后將通式V所示、鄰苯二胺、鹽酸溶劑在溫度ll〇°C攪拌5小時(shí)后，冷卻至18~25°C，氨水中 和調(diào)節(jié)PH值5-7,固體析出，水洗滌，柱層析即制得通式I所示黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物； b. 通式II/III所示黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物的制備：將通式I黃連素類(lèi)化合物、碳酸 鉀、DMF在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于O°C攪拌1小時(shí)后，滴加鹵代烴，升溫至60°C繼續(xù)反應(yīng)7小時(shí)后，冷 卻至室溫，過(guò)濾固體，乙醚洗滌，干燥，柱層析即制得通式II/III所示黃連素苯并咪唑類(lèi)化 合物； c. 通式I所示黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物的可藥用鹽的制備：將通式I所示黃連素苯并 咪唑類(lèi)化合物溶于有機(jī)溶劑中，加入可藥用酸反應(yīng)至無(wú)沉淀生成為止，即制得通式I所示 黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物的可藥用鹽；5. 權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)所述黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物及其可藥用鹽在制備抗細(xì)菌和 /或抗真菌藥物中的應(yīng)用。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述細(xì)菌為藤黃微球菌、金黃色葡萄球 菌、枯草桿菌、銅綠假單胞菌、大腸桿菌、變形桿菌和傷寒沙門(mén)桿菌中的任一種或多種；所述 真菌為產(chǎn)朊假絲酵母菌、曲霉菌、啤酒酵母菌和白色念珠菌。7. 含有權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)所述黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物及其可藥用鹽的制劑。8. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的制劑，其特征在于：所述制劑為片劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、 滴丸劑、注射劑、粉針劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、栓劑、軟膏劑、凝膠劑、膜劑、氣霧劑或透皮 吸收貼劑。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了黃連素苯并咪唑類(lèi)化合物，結(jié)構(gòu)如通式I所示，該化合物具有抗微生物活性，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌和真菌都有一定的抑制活性，用于制備抗細(xì)菌和/或抗真菌藥物，還可以與藥學(xué)上的輔料組合制成單方或復(fù)方制劑。并且本發(fā)明公開(kāi)的化合物所涉及的制備原料商業(yè)化程度高、便宜易得，制備路線短、方法簡(jiǎn)便，生產(chǎn)成本低，為臨床抗微生物治療提供更多高效、安全的候選藥物，通用分子式中R、n、X1、X2、X3如權(quán)利要求書(shū)所定義。
【IPC分類(lèi)】A61K9/06, A61P31/04, A61P31/10, C07D455/03, A61K9/02, A61K9/72, A61K9/14, A61K31/4375, A61K9/08, A61K9/48, A61K9/70, A61K9/10, A61K9/20, A61K9/16
【公開(kāi)號(hào)】CN105130981
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510445904
【發(fā)明人】周成合, 坡瑪尼·杰克庫(kù)瑪, 張玲
【申請(qǐng)人】西南大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年12月9日
【申請(qǐng)日】2015年7月27日