一種具有高提凈率的從丁香中提取丁香甙的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生物制藥技術領域，具體的說，是一種具有高提凈率的從丁香中提取丁香甙的方法。
【背景技術】
[0002]丁香屬(學名:Syringa Linn.):又稱紫丁香屬，該屬植物是落葉灌木或小喬木；大部供觀賞用，有些種類的花可提制芳香油，亦為蜜源植物，木材供建筑和家具用。共35種，不包括自然雜交種，主要分布于中國、朝鮮、喜馬拉雅地區(qū)、歐洲東南部、日本、阿富汗。中國擁有丁香屬81%的野生種類，是丁香屬植物的現(xiàn)代分布中心。
[0003]該屬中有不少種類的花是提取香精，配制高級香料的原料；又枝葉繁茂、花色淡雅而清香，故庭園廣為栽培供觀賞，為庭園中之珍品。歐美對該屬進行雜交育種已有近百年的歷史，先后曾選育出數(shù)百個栽培品種。中國北京植物園也開展了此項研究，已培育成紫云，羅藍紫，香雪，春閣等新品種。
[0004]丁香，常綠喬木，高達10米。葉對生；葉柄明顯；葉片長方卵形或長方倒卵形，長5-10cm，寬2.5-5cm，先端漸尖或急尖，基部狹窄常下展成柄，全緣?；ǚ枷?，成頂生聚傘圓錐花序，花徑約6mm ;花萼肥厚，綠色后轉紫色，長管狀，先端4裂，裂片三角形；花冠白色，稍帶淡紫，短管伏，4裂；雄蕊多數(shù)，花藥縱裂；子房下位，與萼管合生，花柱粗厚，柱頭不明顯。漿果紅棕色，長方橢圓形，長1-1.5cm，直徑5-8_，先端宿存萼片。種子長方形。
[0005]生物學特性:喜熱帶海島性氣候。幼齡樹喜陰不耐烈日暴曬，生長緩慢；成齡樹喜光，需充足陽光才能早開花，開花多。怕寒、怕澇，不抗風，宜選土層深厚、肥沃、排水良好，pH5.0-6.0的砂壤土栽培。
[0006]性狀鑒別:花蕾略呈研棒狀，長l_2cm。花冠圓球形，直徑0.3-0.5cm?；ò?，覆瓦狀抱合，棕褐色或黃褐色，花瓣內(nèi)為雄蕊和花柱，搓碎后可見眾多黃色細粒狀的花藥。萼筒圓柱狀。略扁，有的稍彎曲，長0.7-1.4cm,直徑0.3=0.6cm,紅棕色或棕褐色、上部有4枚三角狀的萼片，十字狀分開。質(zhì)堅產(chǎn)，富油性。氣芳香濃烈，味辛辣，有麻舌感。以個大粗壯、鮮紫棕色、香氣濃郁、富有油性者為佳。
[0007]顯微鑒別:萼筒中部橫切面:表皮細胞I列，有較厚角質(zhì)層。皮外側散有2-3列徑向延長的橢圓形油室，長150-200 μ ;其下有20-50個小型雙韌維管束，斷續(xù)排列成環(huán)，維管束外圍有少數(shù)中柱鞘纖維，壁厚，木化。內(nèi)側為數(shù)列薄壁細胞組織的通氣組織，有大形細胞間隙。中心軸柱薄壁組織間散有多數(shù)細小維管束，薄壁細胞中含眾多細小草酸鈣簇晶。
[0008]粉末特征:暗紅棕色。①纖維梭形，頂端鈍圓，邊緣平整或稍波彎曲，有的顯不規(guī)則連珠狀突起并扭曲，長106-648 μ m，直徑16-68 μ m，壁厚5-23 μ m，微木化，胞腔寬窄不一，有的含棕色油狀物。②花粉粒眾多，極而觀三角形，赤道表面觀雙凸鏡形，具3副合溝。③草酸鈣簇晶眾多，直徑4-26 μ m，多存在于較小的薄壁細胞中。④油室多破碎，分泌細胞界限不清，有的含黃色油狀物。
[0009]丁香花蕾含揮發(fā)油即丁香油。油中主要含有丁香油酚(Eugenol)、乙酰丁香油酚、B-石竹稀(B — Caryophyllene)，以及甲基正戊基酮、水楊酸甲酯、律草稀(Humuleno)、苯甲醛、節(jié)醇、間甲氧基苯甲醛、乙酸節(jié)酯、胡椒酸(Chavicol)、a —衣蘭稀(a — Ylangene)等。也有野生品種中不含丁香油酚(平常丁香油中含64-85%)，而含丁香酮(Eugenone)和番櫻桃素(Eugenin)?；ㄖ羞€含三蔽化合物如齊墩果酸(Oleanolicacid、黃酮和對氧萘酮類鼠李素(Rham-netin)、山奈酸(Kaempferol)、番樓桃素、番樓桃素亭(Eugenitin)、異番樓桃素亭(Isoeugenitin)及其去甲基化合物異番樓桃酸(IsoeugenitoI)0
[0010]丁香甙(Syringin)是刺五加口服液、刺五加注射液、刺五加片、五五利眠膠囊、增智顆粒劑等的主要有效成分以及這些中成藥重要質(zhì)量控制指標。
[0011]經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，丁香甙在制藥領域有著巨大的價值和廣泛的前景Jae Youl等對丁香甙作了體內(nèi)外的免疫調(diào)節(jié)試驗，認為丁香甙是一種抗變應性的免疫調(diào)節(jié)劑；EmetS等研究表明丁香甙可作為食品添加劑以改善身心健康，提高工作效率，并有抗抑郁、防糖尿病、滋補等作用；Dardymov等認為丁香式是一種可抑制葡萄糖代謝抑制劑形成的抑制劑；Takasugi的研究認為類似丁香甙的一類化合物能幫助提高腦部血液循環(huán)，因腦損傷、腦中風、老年性癡呆會引起血液循環(huán)下降；Wakunaga制藥公司研究表明丁香甙對小鼠在生理壓抑條件下能提高其性能力；日本一研究院對小鼠試驗表明丁香甙還是一種有效的潰瘍抑制劑；Teshome等研究發(fā)現(xiàn)丁香式等一類成分可治療早老性癡呆；Hodge研究了丁香式等化合物可作為腫瘤壞死過程中的免疫調(diào)節(jié)劑；Ch0lj0ng-W0n的研究指出含有丁香甙的藥物具有護肝作用；Yesilada的研究表明丁香甙對風濕性關節(jié)炎具有一定的抑制作用，丁香甙還有抗疲勞作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]本發(fā)明的目的在于設計出一種具有高提凈率的從丁香中提取丁香甙的方法，采用簡單的提取方法，具有高提凈率的效果，具有成本低廉的特性；能夠充分有效的利用丁香植物進行丁香甙的提取，避免資源的浪費，并且分離所得丁香甙純度高，有利于對丁香甙作進一步的藥理、臨床研究。
[0013]本發(fā)明通過下述技術方案實現(xiàn):一種具有高提凈率的從丁香中提取丁香甙的方法，該具有高提凈率的從丁香中提取丁香甙的方法包括以丁香植物為原料，以提取劑浸漬提取出含丁香甙的粗提物，所述提取劑為熱水或乙醇或甲醇；再將所述丁香甙的粗提物進行分離，制得丁香甙。
[0014]進一步的為更好的實現(xiàn)本發(fā)明，特別采用下述設置方式:所述具有高提凈率的從丁香中提取丁香甙的方法按如下步驟進行:
1)提取:將丁香植物碎片置于提取劑中浸漬提取，得含丁香甙的粗提物，將含丁香甙的粗提物濃縮成浸膏；
2)分離:將所述浸膏用硅膠柱層析進行粗分離，用含甲醇1.2~7.8%的氯仿甲醇混合溶劑作為洗脫劑進行梯度提取洗脫，收集含甲醇7~7.5%的洗脫液，蒸餾得到含丁香甙混合物；重新上硅膠柱層析用含甲醇4.2-6.3%氯仿甲醇混合溶劑作為洗脫劑分次分離純化，得純品丁香甙。
[0015]進一步的為更好的實現(xiàn)本發(fā)明，特別采用下述設置方式:所述提取劑用量為每公斤丁香植物碎片加提取劑3~8L。
[0016]進一步的為更好的實現(xiàn)本發(fā)明，特別采用下述設置方式:所述步驟2)中，分離按如下步驟進行:
2-1)將所述浸膏，再用120~160目硅膠柱層析進行分離，以含甲醇1.2-7.8%的氯仿甲醇混合液進行梯度洗脫，收集含甲醇7~7.5%的洗脫液，蒸餾得到含丁香甙混合物；
2-2)將步驟2-1)制得含丁香甙混合物重新上220~280目硅膠柱層析再一次分離，含甲醇5.3-6.2%的氯仿甲醇作為洗脫劑進行洗脫，蒸餾洗脫劑得丁香甙粗品；
2_3)將步驟2_2)制得丁香式粗品進一步米用340~380目娃I父柱層析，4.2—5.1%氣仿甲醇為洗脫劑進行分離純化，得到丁香甙純品。
[0017]進一步的為更好的實現(xiàn)本發(fā)明，特別采用下述設置方式:所述的浸漬提取是在提取劑的回流溫度提取。
[0018]進一步的為更好的實現(xiàn)本發(fā)明，特別采用下述設置方式:所述丁香植物碎片為丁香植物的莖皮、根皮、樹葉、丁香實中的一種或任意組合。
[0019]進一步的為更好的實現(xiàn)本發(fā)明，特別采用下述設置方式:所述丁香植物碎片為干燥品。
[0020]進一步的為更好的實現(xiàn)本發(fā)明，特別采用下述設置方式:所述的浸漬提取進行4-6次，每次1~2小時
進一步的為更好的實現(xiàn)本發(fā)明，特別采用下述設置方式:所述具有高提凈率的從丁香中提取丁香甙的方法的具體步驟如下:
(1)提取:將丁香實打碎、每公斤丁香實碎片加4升78.9~92.3%乙醇，在回流溫度下回流提取3次，每次時間分別為3h、2h、lh，然后將提取液濃縮成浸膏，并用沸程65.4-87.3°C的石油醚脫脂；
(2)分離:
(2-1)將步驟(I)所得浸膏用120~160目硅膠柱層析進行分離，以含甲醇1.2~7.8%的氯仿甲醇混合液進行梯度洗脫，收集并蒸餾含甲醇7~7.5%的洗脫液得黃白色粉末；
(2-2)步驟(2-1)所得黃白色粉末再用220~280目硅膠柱層析，以甲醇含量為5.3-6.2%的氯仿甲醇混合液為洗脫劑進行洗脫，蒸餾得丁香甙粗品；
2-3)步驟(2-2)所得丁香甙粗品進一步用340~380目硅膠柱層析，再以甲醇含量為
4.2-5.1%的氯仿甲醇混合液為洗脫液進行洗脫，得丁香甙純品。
[0021]進一步的為更好的實現(xiàn)本發(fā)明，特別采用下述設置方式:所述的丁香植物碎片為丁香植物莖皮，所述I)提取的步驟如下:
用丁香植物莖皮造紙過程中棄去的丁香莖皮熱水浸漬液濃縮成浸膏。
[0022]本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，具有以下優(yōu)點及有益效果:
本發(fā)明采用簡單的提取方法，具有高提凈率的效果，具有成本低廉的特性；能夠充分有效的利用丁香植物進行丁香甙的提取，避免資源的浪費，并且分離所得丁香甙純度高，有利于對丁香甙作進一步的藥理、臨床研究。
【具體實施方式】
[0023]下面結合實施