一種從鮮木瓜果實(shí)中提取熊果酸的方法
【專利說(shuō)明】一種從鮮木瓜果實(shí)中提取熊果酸的方法
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明屬于熊果酸提取技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種從鮮木瓜果實(shí)中提取熊果酸的方法。
[0002]【背景技術(shù)】木瓜(Fructus Chaenomelis)為《中國(guó)藥典》2010年版(一部)收載品種,是薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles spec1sa(Sweet)Nakai的干燥近成熟果實(shí)。味酸、溫,歸肝、脾經(jīng)。具有平肝舒筋,和胃化濕的功效。主治濕痹拘攣,腰膝關(guān)節(jié)酸重疼痛,暑濕吐瀉,轉(zhuǎn)筋攣痛,腳氣水腫等癥。隨著中藥藥理學(xué)研究的深入,發(fā)現(xiàn)木瓜具有多種生理活性,已報(bào)道的主要藥理活性成分包括三萜類、有機(jī)酸類、黃酮類以及鞣質(zhì)等。主要的三蔽類成分為五環(huán)三蔽類化合物,包括齊墩果酸(oleanolicacid)、熊果酸(ursolic acid)、3-0-乙?;芄?3-0-acetylursolicacid)、3_0-乙酰坡模醇酸(3-0-acetyl pomolicacid)和樺木酸(betulinic acid)等。木瓜中的其它成分,有機(jī)酸種類較多,主要有蘋果酸(malic
acid)、綠原酸(chlorogenic acid)、咖啡酸(coffeic acid)、梓檬酸(citric acid)、莽草酸(shikimate)、奎寧酸(quinic acid)、曲酸(ko jic acid)、琥?白酸(succinicacid)、乙酸(acetic acid)、正葵酸(n-caproic acid)、棕櫚酸(palmitic acid)、亞麻酸(順-9,12-十八碳二稀酸,linolenic acid)、硬脂酸(stearic acid)、綠原酸甲酯(chlorogenic acid methyl ester)、綠原酉愛(ài)乙酉旨(chlorogenic acid ethylester)、綠原酸丁酯(chlorogenic acid-n-butyl)等等。黃酮類成分主要為槲皮素等??h質(zhì)類成分主要為原兒茶酸(protocatechuic acid)、沒(méi)食子酸(gallic acid)等。木瓜中富含的熊果酸也稱烏索酸,烏蘇酸,廣泛存在于特定科屬的葉和果實(shí)中,具有清熱、抗炎、強(qiáng)心、降血糖、降血脂、抑制變態(tài)反應(yīng)、利膽和退黃等活性,為保肝良藥,可用于預(yù)防和治療肝病、風(fēng)濕、霍亂、痢疾、腸炎、腳氣等疾病。近年來(lái)隨著化妝品、保健品產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,齊墩果酸和熊果酸又應(yīng)用于美容護(hù)膚化妝品、保健品行業(yè)中。鑒于其獨(dú)特的臨床效果、重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值及廣泛的應(yīng)用前景,一種從天然植物中采取經(jīng)濟(jì)、快速、適合于工業(yè)化生產(chǎn)的提取熊果酸的方法就顯得尤為重要。中國(guó)專利公告號(hào)為CN103054972和CN102276682的專利都公開了提前熊果酸的方法,但在提取純度和提取工藝步驟上還是存在一定弊端。
[0003]
【發(fā)明內(nèi)容】
本發(fā)明的目的是提供一種可經(jīng)濟(jì)、快速、適合于工業(yè)化生產(chǎn)的從鮮木瓜果實(shí)中提取熊果酸的方法,以彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。
[0004]為了實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明一種從鮮木瓜果實(shí)中提取熊果酸的方法,按下述步驟進(jìn)行:
1)將鮮木瓜洗凈瀝干后剖開去籽,并切成絲在30-65°C下干燥0.5-2.5h后備用;
2)將步驟I)制得的干木瓜絲加入9-11倍量的濃度為70-90%的乙醇置于回流裝置內(nèi)并加熱至70-90°C進(jìn)行回流蒸煮,回流反應(yīng)時(shí)間為0.5-1.5h,重復(fù)回流提取三次,將三次提取的濾液合并備用;
3)將步驟2)提取的濾液于70-90°C的溫度加熱0.25-0.75h去除乙醇,得稀浸膏;
4)將浸膏放入攪拌罐中,加入1-3倍量的蒸餾水充分?jǐn)噭?,置?-6°C的冷藏環(huán)境中靜置沉淀7-9h后濾除上清液;
5)在步驟4)剩余的沉淀物中加入1-2倍量的乙醇攪拌至充分溶解,緩慢滴入濃度為8-12%的NaOH并不斷攪拌,調(diào)節(jié)pH值為8_9后停止滴入,放入15-30微米濾網(wǎng)的過(guò)濾器中過(guò)濾;
6)在步驟5)提取的濾液中加入0.25-0.75倍量的活性炭加熱至70-90°C回流20-40分鐘后,自然冷卻至15-25°C過(guò)濾得濾液備用;
7)向?yàn)V液中緩慢滴入濃度為1-2%的鹽酸并不斷攪拌,調(diào)節(jié)pH值為5-6后停止滴入,并加熱至70-85°C回收乙醇,待自然冷卻至15-25°C時(shí),加入等量的蒸餾水過(guò)濾靜置沉淀;
8)濾除液體,將沉淀物在0°C的溫度中減壓至700-800汞柱,減壓時(shí)間為0.5-lh ;
9)將減壓后的沉淀物于40-50°C的溫度中干燥l_3h后,粉碎得到粗提取物;
10)將步驟9)所得粗提取物用石油醚和丙酮的混合液進(jìn)行洗脫,洗脫時(shí)以2-3倍柱體積的石油醚和丙酮的混合液以每小時(shí)1-2倍柱體積的流速進(jìn)行洗脫,石油醚和丙酮的比例為 5:1 ;
11)將洗脫液在45-65°C干燥l_2h即得。
[0005]本發(fā)明提供的提取方法可得到有效成分含量較高的提取物,熊果酸的純度在90%以上,可直接用于藥物制劑的制備。
[0006]本發(fā)明一種從鮮木瓜果實(shí)中提取熊果酸的方法,主要經(jīng)過(guò)洗凈切絲干燥、回流提取、過(guò)濾沉淀、精濾、活性炭吸附、減壓干燥、硅膠柱色譜分離、洗脫液過(guò)濾烘干的步驟,可以快速、安全的提取熊果酸,經(jīng)濟(jì)性好,適合于工業(yè)化生產(chǎn)的需要,無(wú)需大型設(shè)備,用硅膠柱色譜進(jìn)行洗脫,提取時(shí)間短,生產(chǎn)效率高,可保證熊果酸最大限度的快速游離出來(lái),得到高純度的熊果酸晶體;而且該提取方法工藝步驟簡(jiǎn)單,條件溫和,具有廣闊的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值,適宜于大規(guī)模生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0007]
實(shí)施例一
將鮮木瓜洗凈瀝干后剖開去籽,并切成絲在60°C的環(huán)境下干燥Ih后備用;將干木瓜絲加入10倍量的濃度為80%的乙醇置于回流裝置內(nèi)并加熱至75°C進(jìn)行回流蒸煮,回流反應(yīng)時(shí)間為1.5h,重復(fù)回流提取三次,將三次提取的濾液合并備用;將提取的濾液于80°C的溫度加熱0.5h去除乙醇,得稀浸膏;將稀浸膏放入攪拌罐中,加入2倍量的蒸餾水充分?jǐn)噭?0分鐘,置于4°C的冷藏環(huán)境中靜置沉淀Sh后濾除上清液;在剩余的沉淀物中加入1.5倍量的乙醇攪拌至充分溶解,緩慢滴入濃度為10%的NaOH并不斷攪拌,調(diào)節(jié)pH值為8.5后停止滴入,并放入精密過(guò)濾器中過(guò)20微米進(jìn)行精濾;之后,在濾液中加入0.5倍量的活性炭加熱至80°C回流提取35分鐘后,自然冷卻至20°C過(guò)濾,得濾液備用;向?yàn)V液中緩慢滴入濃度為1%的鹽酸并不斷攪拌,調(diào)節(jié)PH值為5.5后停止滴入,并加熱至80°C回收乙醇,待自然冷卻至20°C時(shí),加入等量的蒸餾水過(guò)濾靜置沉淀;濾除液體,將沉淀物在0°C的溫度中減壓至750汞柱,減壓時(shí)間為0.5h ;將減壓后的沉淀物于45°C的溫度中干燥1.5h后,粉碎得到粗提取物;將所得粗提取物用石油醚-丙酮(5:1)的混合液進(jìn)行洗脫,洗脫時(shí)以2.5倍柱體積的石油醚和丙酮的混合液以每小時(shí)1.5倍柱體積的流速進(jìn)行洗脫;將洗脫液在55°C干燥Ih后即得。
[0008]熊果酸含量的測(cè)定采用雙波長(zhǎng)薄層掃描法
取實(shí)施