一種丹參素酰胺衍生物及其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種丹參素酰胺衍生物及其制備方法和用途，具有抑制血小板聚集、 抗氧化應(yīng)激損傷等多重作用，可應(yīng)用于腦缺血、血管性癡呆等疾病的預(yù)防和治療。 二、
【背景技術(shù)】
[0002] 丹參素是從中藥丹參中分離的一種水溶性活性成分，具有抗血小板聚集、抗炎、抗 動(dòng)脈粥樣硬化、抗血栓等作用，為復(fù)方丹參滴丸、丹參注射液等的有效成分。由于其結(jié)構(gòu)中 含有鄰二酚羥基，非常容易發(fā)生氧化變質(zhì)，造成了不穩(wěn)定性；且結(jié)構(gòu)中含有a -羥基及羧 基，能夠和葡萄糖醛酸等鍵合隨尿液排出體外，故在體內(nèi)的半衰期也非常短，需要反復(fù)給 藥，限制了臨床應(yīng)用。
[0003]
[0004] 為了提高丹參素的活性并改善其理化性質(zhì)，國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者對(duì)丹參素進(jìn)行了結(jié)構(gòu) 修飾。目前對(duì)丹參素結(jié)構(gòu)改性的報(bào)道主要集中在對(duì)羧基部位的酯化改造，對(duì)羥基位置的酰 化修飾等，而酰胺類衍生物的報(bào)道較少。
[0005] 暨南大學(xué)王玉強(qiáng)等報(bào)道了一系列丹參素川芎嗪衍生物（III)(授權(quán)公告號(hào)：CN 102212008B)，這些衍生物以酯化產(chǎn)物為主，酰胺類化合物僅有兩個(gè)。此外，他們還研究了化 合物對(duì)DPPH自由基清除活性及抗氧化活性，其中化合物ADTM(R 1= R2= R3= CH3C0)可以 有效抑制大鼠心肌缺血后梗死面積，其作用優(yōu)于丹參素。
[0006]
[0007] 復(fù)旦大學(xué)朱依諄等將丹參素類似物與硝基結(jié)合，獲得了一系列結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的丹參素 衍生物（IV)(授權(quán)公告號(hào)：CN101607954B)，該化合物具有較好的保護(hù)缺氧心肌的作用并具 有一定的抗HIV活性。
[0008]
[0009] 復(fù)旦大學(xué)汪洋等將丹參素與L-半胱氨酸衍生物通過(guò)酰胺鍵結(jié)合獲得了 一系列衍生物（V)(公布號(hào)：CN 103204790A ;European Journal of Medicinal Chemistry, 2012, 55:176-187)，這些衍生物能減少炎癥誘導(dǎo)的一氧化氮的釋放，并對(duì)H202 誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激有較好的保護(hù)作用，可應(yīng)用于心血管保護(hù)作用藥物。
[0010]
[0011] 以上對(duì)丹參素的結(jié)構(gòu)修飾多是針對(duì)改善心血管保護(hù)作用，而針對(duì)腦血管相關(guān)疾病 方面的結(jié)構(gòu)改性報(bào)道相對(duì)較少。 三、
【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明旨在提供一種丹參素酰胺衍生物及其制備方法和用途，所要解決的技術(shù)問(wèn) 題是遴選合適的分子結(jié)構(gòu)使其具有較優(yōu)的抗血小板聚集和抗氧化損傷活性，并且具有較優(yōu) 的血腦屏障通透性和低毒性的特點(diǎn)。
[0013] 本發(fā)明解決技術(shù)問(wèn)題采用如下技術(shù)方案：
[0014] 本發(fā)明丹參素酰胺衍生物的結(jié)構(gòu)由以下通式（I)表示：
[0015]
[0016] 其中：
[0017] 札為 H 時(shí)，R 2為 H、CH 3C0 或 C2H5C0 ;
[0018] 札為 CH 3C0 時(shí)，私為 H 或 CH 3C0 ;
[0019] 札為(：2115(：0 時(shí)，私為11 或 C2H5C0。
[0020] 本發(fā)明丹參素酰胺衍生物的制備方法，包括酰胺化反應(yīng)、酯化反應(yīng)以及后處理各 單元過(guò)程，其特征在于：
[0021] 所述酰胺化反應(yīng)是將丹參素、2-氨甲基-3, 5, 6-三甲基吡嗪及1-(3_二甲氨基丙 基）-3-乙基碳二亞胺（EDC)和1-羥基苯并三唑（HOBt)按摩爾比1 :1. 1 :1. 2 :1. 2的比例 加入N，N-二甲基甲酰胺（DMF)中，室溫反應(yīng)18小時(shí)，得到中間產(chǎn)物A ;
[0022] 所述中間產(chǎn)物A的結(jié)構(gòu)式為：
[0023]
[0024] 所述酯化反應(yīng)是將中間產(chǎn)物A、酸酐況)20及催化劑加入四氫呋喃（THF)中，常溫 反應(yīng)2-3小時(shí)，柱層析分離純化得到目標(biāo)產(chǎn)物（I)。
[0025] 其中：R1= R2= CH3C0或C2H5C0時(shí)，酯化反應(yīng)的催化劑選自4-二甲氨基吡啶 (DMAP)，中間產(chǎn)物A、酸酐及催化劑的摩爾比為1 :3-4 :0. 2,進(jìn)一步優(yōu)選為1 :4 :0. 2 ;
[0026] R2= H，R CH3C0或C2H5C0時(shí)，酯化反應(yīng)的催化劑選自三乙胺或吡啶，中間產(chǎn)物 A、酸酐及催化劑的摩爾比為1 :2-3 :0. 2,進(jìn)一步優(yōu)選為1 :3 :0. 2 ;
[0027] 札=H，R2= CH3C0或C2H5C0時(shí)，酯化反應(yīng)的催化劑選自三乙胺或吡啶，中間產(chǎn)物 A、酸酐及催化劑的摩爾比為1 :2-3 :0. 2,進(jìn)一步優(yōu)選為1 :3 :0. 2。
[0028] 反應(yīng)過(guò)程如下：
[0029]
[0031] 本發(fā)明丹參素酰胺衍生物的結(jié)構(gòu)由通式（II)表示：
[0032]
[0033] 其中：
[0034] 札為11或CH3C0時(shí)，私為11或CH3C0。&、1? 2可以相同也可以不同。
[0035] 本發(fā)明丹參素酰胺衍生物的制備方法，包括哌嗪酰胺化反應(yīng)、丹參素酰胺化反應(yīng)、 酯化反應(yīng)以及后處理各單元過(guò)程，其特征在于：
[0036] 所述哌嗪酰胺化反應(yīng)是將3, 5,6-三甲基吡嗪-2-羧酸、1-Boc-哌嗪及EDC和HOBt 按摩爾比1 :1. 2 :1. 3 :1. 3的比例加入DMF中，室溫反應(yīng)20小時(shí)，得到中間產(chǎn)物B ;中間產(chǎn)物 B溶于乙酸乙酯，通入干燥HC1氣體30分鐘，室溫繼續(xù)反應(yīng)2小時(shí)，得到中間產(chǎn)物C ;
[0037] 所述中間產(chǎn)物B和中間產(chǎn)物C的結(jié)構(gòu)式依次為：
[0038]
i
[0039] 所述丹參素酰胺化反應(yīng)是將丹參素、中間產(chǎn)物C及EDC和HOBt按摩爾比1 :1. 2 : 1. 3 :1. 3的比例加入DMF中，室溫反應(yīng)20小時(shí)，得到中間產(chǎn)物D ;
[0040] 所述中間產(chǎn)物D的結(jié)構(gòu)式為：
[0041 ]
[0042] 所述酯化反應(yīng)是將中間產(chǎn)物D與酸酐（&) 20及催化劑加入THF中，常溫反應(yīng)2-3 小時(shí)，柱層析分離純化得到目標(biāo)產(chǎn)物（II)。
[0043] 其中：& = R 2 = CH 3C0時(shí)，酯化反應(yīng)的催化劑選自DMAP，中間產(chǎn)物D、酸酐及催化劑 的摩爾比為1 :3-4 :0. 2,進(jìn)一步優(yōu)選為1 :4 :0. 2 ;
[0044] 札=CH 3C0、R2= H或者R H、R 2= CH 3C0時(shí)，酯化反應(yīng)的催化劑選自Et3N或吡 啶，中間產(chǎn)物D、酸酐及催化劑的摩爾比為1 :2-3 :0. 2,進(jìn)一步優(yōu)選為1 :3 :0. 2。
[0045] 反應(yīng)過(guò)程如下：
[0050] 本發(fā)明目標(biāo)化合物的代號(hào)及結(jié)構(gòu)如下所示：
[0051]
[0052] 本發(fā)明丹參素酰胺類化合物是將具有鈣離子拮抗、抗凝、改善腦血流量等作用的 四甲基吡嗪（川芎嗪）通過(guò)酰胺鍵引入丹參素結(jié)構(gòu)而合成的單一化合物。該化合物具有拮 抗ADP誘導(dǎo)的血小板聚集、對(duì)H202所致PC12細(xì)胞的氧化損傷也具有較好的保護(hù)作用，且血 腦屏障通透性大大提高，可作為改良的丹參素衍生物應(yīng)用于腦缺血、血管性癡呆在內(nèi)疾病 的預(yù)防和治療。
[0053] 與已有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在：
[0054] 1、與現(xiàn)有藥物丹參素相比，本發(fā)明丹參素酰胺衍生物不僅改善了藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)，且 提高血腦屏障通透性，拓寬了丹參素衍生物在腦部疾病治療方面的用途。
[0055] 2、與現(xiàn)有丹參素酯類衍生物相比，本發(fā)明的丹參素酰胺衍生物不僅具有較優(yōu)的抗 氧化損傷作用，同時(shí)由于川芎嗪結(jié)構(gòu)的引入而強(qiáng)化抗血小板聚集活性，有助于改善供血供 氧，從而可用于預(yù)防和治療缺血性腦血管病及血管性癡呆。 四、【具體實(shí)施方式】
[0056] 實(shí)施例1:起始原料2-氨甲基-3, 5,6-三甲基吡嗪的制備
[0057]
[0058] 制備過(guò)程如下：
[0059]
[0060] 具體步驟如下：
[0061] 321^0：14加入盛有2,3,5,6-四甲基吡嗪8.78(63.7111111〇1)的反應(yīng)瓶中，再加入 N-溴代丁二酰亞胺（NBS) 11. 54g(64. 8mmol)、23mg過(guò)氧化苯甲酰，該混合物在200W的白 熾燈照射下攪拌回流反應(yīng)8-9h ;反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液冷至5°C以下，抽濾除去丁二酰亞胺， 得到棕黃色油狀物13. 0g，粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析分離（石油醚：乙酸乙酯=5 :1，v/v)得到 純凈的2-溴甲基一3,5,6 -三甲基吡嗪⑴8. 3g，為白色至淺粉色的低熔點(diǎn)固體，收率為 60%。蟲 NMR(CDC13, 300MHz) : 2. 51 (m，6H，CH3)，2. 60 (s，3H，CH3)，4. 57 (s，2H，CH2) ?
[0062] 將所得的2-溴甲基-3,5,6-三甲基吡嗪4. 3g(20mmol)加入12mL乙醇溶于反應(yīng) 瓶中；另取鄰苯二甲酰亞胺鉀3. 7g(20mmol)溶于15mL N，N-二甲基甲酰胺（DMF)中，并將 其加入反應(yīng)瓶中，80°C加熱攪拌，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全，約2h后，減壓蒸除溶劑，EtOH重結(jié)晶， 得無(wú)色針狀結(jié)晶的2-鄰苯二甲酰亞胺基-3, 5,6-三甲基吡嗪（2) 3. 5g，收率為62%。
[0063]蟲NMR (CDC13, 600MHz) 2. 29 (s，3H，CH3)，2. 44 (s，3H，CH3)，2. 59 (s，3H，CH3)，4. 94 (s ,2H, CH2), 7. 75 (m, 2H, Ph), 7. 89 (m, 2H, Ph).
[0064] 將所得的2-鄰苯二甲酰亞胺基-3,5,6-三甲基吡嗪2.88(10臟〇1)用151^無(wú)水 乙醇溶解，加入1. OmL 50%水合肼，加熱回流2h，過(guò)濾，鹽酸溶液調(diào)pH值至1-2,有白色不溶 物出現(xiàn)，過(guò)濾，減壓