2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后細(xì)胞貼壁，吸出廢舊培養(yǎng)液，加入 終體積為200 ML的100 Pg/mL的多肽樣品的新鮮基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并以PBS為陰性對(duì)照，于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48 h后吸出藥液，用PBS洗板2次，加入5 mg /mL的MTT溶 液20 W和新鮮基礎(chǔ)培養(yǎng)基180 ML;于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)；4 h后，棄去含 有MTT的培養(yǎng)液，加入150 W DMS0后于微型振蕩器上振蕩15 min，490nm波長(zhǎng)處測(cè)定光 密度值并計(jì)算抑制率，由表1可知，100呢/mL的多肽對(duì)腫瘤細(xì)胞IfepG-2和MCF-7及人正常 肝細(xì)胞L02的抑制率分別是11. 85%、21. 14%和4. 07%。
[0014]表1
應(yīng)用實(shí)施例2 腫瘤細(xì)胞MCF-7和H印G-2及人正常肝細(xì)胞L02各100 ML細(xì)胞懸液（5 X 104個(gè)/mL)， 加至96孔板中，于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后細(xì)胞貼壁，吸出廢舊培養(yǎng)液，加入 終體積為200 ML的200 Pg/mL的多肽樣品的新鮮基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并以PBS為陰性對(duì)照，于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48 h后吸出藥液，用PBS洗板2次，加入5 mg /mL的MTT溶 液20 W和新鮮基礎(chǔ)培養(yǎng)基180 ML;于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)；4 h后，棄去含 有MTT的培養(yǎng)液，加入150 W DMS0后于微型振蕩器上振蕩15 min，490nm波長(zhǎng)處測(cè)定光 密度值并計(jì)算抑制率，由表1可知，200 Pg/mL的多肽對(duì)腫瘤細(xì)胞IfepG-2和MCF-7及人正常 肝細(xì)胞L02的抑制率分別是29. 27%、33. 51%和15. 43%。
[0015] 應(yīng)用實(shí)施例3 腫瘤細(xì)胞MCF-7和H印G-2及人正常肝細(xì)胞L02各100 ML細(xì)胞懸液（5 X 104個(gè)/mL)， 加至96孔板中，于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后細(xì)胞貼壁，吸出廢舊培養(yǎng)液，加入 終體積為200 ML的300 Pg/mL的多肽樣品的新鮮基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并以PBS為陰性對(duì)照，于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48 h后吸出藥液，用PBS洗板2次，加入5 mg /mL的MTT溶 液20 W和新鮮基礎(chǔ)培養(yǎng)基180 ML;于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)；4 h后，棄去含 有MTT的培養(yǎng)液，加入150 W DMS0后于微型振蕩器上振蕩15 min，490nm波長(zhǎng)處測(cè)定光 密度值并計(jì)算抑制率，由表1可知，300 Pg/mL的多肽對(duì)腫瘤細(xì)胞IfepG-2和MCF-7及人正常 肝細(xì)胞L02的抑制率分別是32. 84%、40. 42%和16. 95%。
[0016] 應(yīng)用實(shí)施例4 腫瘤細(xì)胞MCF-7和H印G-2及人正常肝細(xì)胞L02各100 ML細(xì)胞懸液（5 X 104個(gè)/mL)， 加至96孔板中，于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后細(xì)胞貼壁，吸出廢舊培養(yǎng)液，加入 終體積為200 ML的400 Pg/mL的多肽樣品的新鮮基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并以PBS為陰性對(duì)照，于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48 h后吸出藥液，用PBS洗板2次，加入5 mg /mL的MTT溶 液20 W和新鮮基礎(chǔ)培養(yǎng)基180 ML;于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)；4 h后，棄去含 有MTT的培養(yǎng)液，加入150 W DMS0后于微型振蕩器上振蕩15 min，490nm波長(zhǎng)處測(cè)定光 密度值并計(jì)算抑制率，由表1可知，400 Pg/mL的多肽對(duì)腫瘤細(xì)胞IfepG-2和MCF-7及人正常 肝細(xì)胞L02的抑制率分別是42. 68%、54. 11%和19. 31% 應(yīng)用實(shí)施例5 腫瘤細(xì)胞MCF-7和H印G-2及人正常肝細(xì)胞L02各100 ML細(xì)胞懸液（5 X 104個(gè)/mL)， 加至96孔板中，于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h后細(xì)胞貼壁，吸出廢舊培養(yǎng)液，加入 終體積為200 ML的500 Pg/mL的多肽樣品的新鮮基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并以PBS為陰性對(duì)照，于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48 h后吸出藥液，用PBS洗板2次，加入5 mg /mL的MTT溶 液20 W和新鮮基礎(chǔ)培養(yǎng)基180 ML;于37 °C恒溫C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)；4 h后，棄去含 有MTT的培養(yǎng)液，加入150 W DMS0后于微型振蕩器上振蕩15 min，490nm波長(zhǎng)處測(cè)定光 密度值并計(jì)算抑制率，由表1可知，500 Pg/mL的多肽對(duì)腫瘤細(xì)胞IfepG-2和MCF-7及人正常 肝細(xì)胞L02的抑制率分別48. 49%、61. 86%和23. 14%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1?一種八肽SCCSCDED，其特征是該合成八肽的氨基酸序列為Ser-Cys-Cys-Ser-Cys-A sp-Glu-Asp〇2. 權(quán)利要求1所述的一種八肽SCCS⑶ED的應(yīng)用，其特征在于，將終濃度為100-500 呢/mL的所述八肽與兩種腫瘤細(xì)胞MCF-7、H印G-2和人正常肝細(xì)胞L02混勻，孵育48 h后， 對(duì)腫瘤細(xì)胞H印G-2和MCF-7的體外增殖抑制率分別為11. 85%-48. 49%和21. 14%-61. 86% ; 所述八肽 SCCSCDED 濃度為 100-500l^g/mL。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述八肽SCCSCDED在濃度為500Pg/mL，對(duì) 腫瘤細(xì)胞H印G-2和MCF-7的體外增殖抑制率分別為48. 49%和61. 86%。4. 如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述八肽SCCSCDED對(duì)正常肝細(xì)胞L02的體 外增殖抑制率為4. 07%-23. 14%。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述八肽SCCS⑶ED在濃度為500Pg/mL時(shí)， 對(duì)正常肝細(xì)胞L02的體外增殖抑制率為23. 14%。6. 權(quán)利要求1所述的一種八肽SCCS⑶ED在制備生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種八肽SCCSCDED及其應(yīng)用，該合成多肽的氨基酸序列如下所示：Ser-Cys-Cys-Ser-Cys-Asp-Glu-Asp，縮寫(xiě)為SCCSCDED，分子量861.2，純度96.2%。本發(fā)明的多肽使用多肽合成儀，采用固相合成法合成。通過(guò)體外抗腫瘤活性檢測(cè)，在100-500μg/mL范圍內(nèi)，本發(fā)明的多肽對(duì)肝癌細(xì)胞HepG-2和乳腺癌細(xì)胞MCF-7均呈現(xiàn)出了一定的抑制效果。在500μg/mL時(shí)，對(duì)HepG-2和MCF-7的體外增殖抑制率分別為48.49%和61.86%。本發(fā)明提供了一種具有體外抗腫瘤活性的合成多肽，可應(yīng)用于生物制藥領(lǐng)域。
【IPC分類(lèi)】A61K38/08, A61P35/00, C07K7/06
【公開(kāi)號(hào)】CN105153283
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510634095
【發(fā)明人】張學(xué)武, 何勝潔
【申請(qǐng)人】華南理工大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年12月16日
【申請(qǐng)日】2015年9月28日