抗菌肽的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及抗菌肽，具體涉及一種具有16個(gè)氨基酸的抗菌肽。
【背景技術(shù)】
[0002] 抗菌肽是一類(lèi)具有抗菌活性的小分子蛋白。自瑞典科學(xué)家Boman等從蠶蛹身上分 離得到第一個(gè)抗菌肽天蠶素以來(lái)，人們又在昆蟲(chóng)、兩棲類(lèi)、水產(chǎn)動(dòng)物，以及包括人在內(nèi)的哺 乳動(dòng)物甚至植物及細(xì)菌等廣泛的生物譜中發(fā)現(xiàn)了 1〇〇〇余種抗菌肽。內(nèi)源性的抗菌肽在生 物體內(nèi)經(jīng)誘導(dǎo)而合成，在抵抗病原入侵方面起著重要的作用，是生物體非特異性免疫的重 要組成部分。
[0003] 抗菌肽的抗菌活性具有選擇性高、殺菌快速、作用廣譜和難以形成抗性的特點(diǎn)，這 使其成為研究和開(kāi)發(fā)新型抗生素的理想候選。目前，從生物體內(nèi)提取天然抗菌肽是抗菌肽 產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的主要思路，但天然抗菌肽具有結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，易失活等缺點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種抗菌肽，其來(lái)源于一種名為Scorpion Androctonus的蝎子所分 泌的毒性蛋白Mauriporin，該毒性蛋白質(zhì)含有48個(gè)氨基酸。我們選擇性地縮短了該毒性蛋 白的肽鏈長(zhǎng)度并優(yōu)化了序列，最終得到了本發(fā)明的抗菌肽。本發(fā)明抗菌肽具有廣譜的抗菌 特性，不僅活性更高，而且穩(wěn)定不易失活。
[0005] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種抗菌肽，所述抗菌肽的序列為：Phe-Lys-XfGly-Gly-Phe-Xz-Lys-Lys-Xu-Trp-Arg-Ser-XfXs-Ala，其中，X!、X 2、X3、X4和 X 5各自獨(dú)立 地為1^11、116或￥&1;優(yōu)選3 1和乂2各自獨(dú)立地為116，父334和乂5各自獨(dú)立地為1^11 ;在優(yōu) 選的技術(shù)方案中，所述抗菌肽的序列為Phe-Lys-Ile-Gly-Gly-Phe-Ile-Lys-Lys-Leu-Trp-Arg-Ser-Leu-Leu-Ala ;Phe-Lys-Val-Gly-Gly-Phe-Ile-Lys-Lys-Val-Trp-Arg-Ser-Ile_V al-Ala ;Phe-Lys-Ile-Gly-Gly-Phe-Val-Lys-Lys-Leu-Trp-Arg-Ser-Val-Leu_Ala ;或 Phe -Lys-Leu-Gly-Gly-Phe-Leu-Lys-Lys-Ile-Trp-Arg-Ser-Leu-Ile-Ala〇
[0006] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種組合物，含有本發(fā)明的抗菌肽或其任 意混合物，所述組合物包括但不限于洗手液、洗面奶、洗發(fā)香波、沐浴液、女性護(hù)理洗液、漱 口水、牙膏、香皂、化妝品、洗衣皂、洗衣液、洗滌靈、消毒液或潔廁液等。
[0007] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種織物，含有本發(fā)明的抗菌肽或其任意 混合物，所述織物包括但不限于衣物、床上用品、消毒紙巾、敷料或繃帶等。
[0008] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種衛(wèi)生巾、衛(wèi)生護(hù)墊、尿不濕或成人用尿 墊，含有本發(fā)明的抗菌肽或其任意混合物。
[0009] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明的抗菌肽可以作為飼料添加劑，從而本發(fā)明涉 及一種飼料，含有本發(fā)明的抗菌肽或其任意混合物。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種用于預(yù)防和/或治療細(xì)菌感染的藥物 組合物，含有預(yù)防和/或治療有效量的本發(fā)明的抗菌肽或其任意混合物。本發(fā)明進(jìn)一步涉 及本發(fā)明的抗菌肽或其任意混合物在制備用于預(yù)防和/或治療細(xì)菌感染的藥物中的應(yīng)用。
[0011] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明的抗菌肽或其任意混合物在制備各 種具有抑菌和/或殺菌性能的產(chǎn)品中的應(yīng)用。這些產(chǎn)品包括但不限于洗手液、洗面奶、洗發(fā) 香波、沐浴液、女性護(hù)理洗液、漱口水、牙膏、香皂、化妝品、洗衣皂、洗衣液、洗滌靈、消毒液、 潔廁液、衣物、床上用品、消毒紙巾、敷料、繃帶、衛(wèi)生巾、衛(wèi)生護(hù)墊、尿不濕、成人用尿墊或飼 料等等。總之，本發(fā)明的抗菌肽可以應(yīng)用于一切需要?dú)⒕蛘咭志漠a(chǎn)品中。
[0012] 本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉在本發(fā)明的各種組合物、飼料和藥物組合物中，可進(jìn)一步含 有常規(guī)的各種輔料和/或活性成分，并且能夠根據(jù)本領(lǐng)域的常規(guī)方法確定本發(fā)明的抗菌肽 以及各種輔料和/或活性成分的合適的含量。本領(lǐng)域技術(shù)人員同樣知曉如何制備含有本 發(fā)明的抗菌肽的織物、衛(wèi)生巾、衛(wèi)生護(hù)墊、尿不濕或成人用尿墊，包括但不限于將織物、衛(wèi)生 巾、衛(wèi)生護(hù)墊、尿不濕或成人用尿墊，或者制造織物、衛(wèi)生巾、衛(wèi)生護(hù)墊、尿不濕或成人用尿 墊的材料在含有本發(fā)明抗菌肽的溶液中浸漬。
[0013] 本發(fā)明的抗菌肽可以采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法合成，例如固相合成，并采 用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行純化，例如高效液相色譜法。
[0014] 本發(fā)明的抗菌肽抗菌譜廣，抗菌活性更高，而且穩(wěn)定不易失活。
【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖1為本發(fā)明抗菌肽的高效液相色譜圖。
[0016] 圖2為本發(fā)明抗菌肽的質(zhì)譜圖。 具體實(shí)施方案
[0017] 為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明， 但本領(lǐng)域技術(shù)人員了解，下述實(shí)施例不是對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，任何在本發(fā)明基礎(chǔ)上 做出的改變和變化，都在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0018] 實(shí)施例1抗菌肽的固相合成、切割、純化及鑒定
[0019] 1. 1抗菌肽的固相合成
[0020] 本發(fā)明利用多肽合成儀采用固相合成法合成抗菌肽：
[0021] 1)以DMF為溶劑，各種a -氨基被Fmoc保護(hù)的氨基酸溶液的濃度為0. 25M，HBTU 溶液、HOBt溶液的濃度為0. 33M，哌啶溶液的濃度為200ml/L，DIEA溶液的濃度為174. 2ml/ L〇
[0022] 2)稱(chēng)取0? 05mmol Fmoc-Ala-Wang樹(shù)脂（官能團(tuán)含量0? 33mmol/g)置于固相反 應(yīng)器中，加8ml DCM溶脹過(guò)夜，減壓抽去溶劑。加入濃度為200ml/L的哌啶溶液8ml，室溫 下反應(yīng)5min，抽干；再加入濃度為200ml/L的哌啶溶液8ml，室溫下反應(yīng)20min，抽干；依次 用8ml的DMF洗滌3次，每次lmin。準(zhǔn)確量取0. 2mmol的a -氨基被Fmoc保護(hù)的氨基酸 溶液、0. 2mmol的HBTU溶液、0. 195mmol的HOBt溶液加入固相反應(yīng)器中，反應(yīng)5min后加入 0. 4mmol的DIEA，室溫下氮?dú)鈿馀菡袷幏磻?yīng)2h。依次用8ml的DMF洗滌3次，每次lmin。加 入濃度為200ml/L的哌啶溶液8ml，室溫下反應(yīng)5min，抽干；再加入濃度為200ml/L的哌啶 溶液8ml，室溫下反應(yīng)20min，抽干；依次以8ml的DMF洗滌3次，每次lmin。按照如上步驟 從肽鏈的碳端到氮端逐一連續(xù)合成了本發(fā)明的抗菌肽Phe-Lys-Ile-Gly-Gly-Phe-Ile-Lys -Lys-Leu-Trp-Arg-Ser-Leu-Leu-Ala (多肽 1) 〇
[0023] 3)待合成完畢后，分別用DMF和DCM先后清洗連有多肽鏈的樹(shù)脂，后將樹(shù)脂至于真 空干燥箱內(nèi)干燥備用。
[0024] 1.2抗菌肽的切割
[0025] 1)待樹(shù)脂干燥后，用刮刀將樹(shù)脂盡量打散，轉(zhuǎn)移至雞心瓶中，加入磁子，在冰水浴 下緩慢加入用于脫除樹(shù)脂的切割液l〇ml (切割液中TFA :純水：苯甲硫醚：苯酚：乙二硫醇 比例為82. 5:5:5:5:2. 5)，冰水浴下反應(yīng)2h。
[0026] 2)待反應(yīng)完成，將反應(yīng)液連同樹(shù)脂一同轉(zhuǎn)移至過(guò)濾器中，用水栗抽濾，將得到的濾 液置于圓底燒瓶中，并在氮?dú)饬飨麓蹈伞?br>[0027] 3)待圓底燒瓶中的樣品吹至粘稠，撤下氮?dú)夤?，在圓底燒瓶中倒入約20ml的4°C 冰乙醚，混合后充分打散，然后于冷凍離心機(jī)內(nèi)，4°C下8000r/min離心15min，棄上清，再于 20ml的4°C冰乙醚中打散，離心；如此重復(fù)操作3次，將沉淀再次真空干燥，即得抗菌肽粗 品。
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