具有飽腹感激素釋放活性的新型多肽的制作方法
【專利說明】具有飽腹感激素釋放活性的新型多化
[0001] 巧關申請的香叉引用
[0002] 本專利申請要求2013年1月28日提交的美國臨時申請61/757, 556的權益，該臨 時申請全文W引用方式并入本文。
技術領域
[0003] 本發(fā)明整體設及新型多膚及它們的應用。具體地，本發(fā)明的新型多膚具有例如飽 腹感激素釋放活性（膽囊收縮素（CCK)和/或膜高血糖素樣膚-1 (GLP-I)釋放活性）。
【背景技術】
[0004] 在美國和全世界，超重和肥胖者W及與體重增加相關聯(lián)的疾病的數(shù)量和比例正在 上升。雖然運并非由單個潛在因素誘發(fā)，一種致病因素可能是許多人的久坐不動的生活方 式W及同時增加的高熱量食物消費，其中包括"快餐"。大多數(shù)"快餐"趨于為高脂肪和/或 局糖的。 陽0化]對抗流行性體重增加的一個可行目標可W是誘發(fā)CCK。CCK是一種由腸胃細胞 響應于營養(yǎng)物質而釋放至循環(huán)中的膚激素，具體地為一餐攝入的蛋白或脂質。在中樞和 外周神經(jīng)系統(tǒng)中CCK充當神經(jīng)遞質和神經(jīng)調節(jié)物質。CCK從響應于餐后進入胃腸內腔的 營養(yǎng)物質（例如，蛋白和脂肪）的十二指腸和空腸的I內分泌細胞中釋放出來。一旦釋 放出來，CCK啟動了許多協(xié)調的反應W促進消化并調節(jié)食物攝入量，包括介導膽汁從膽囊 排空，調節(jié)消化酶從膜腺的釋放，通過調節(jié)幽口括約肌控制胃排空，W及通過迷走神經(jīng)傳 入神經(jīng)元將神經(jīng)信號傳入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。據(jù)信神經(jīng)元CCK介導中樞神經(jīng)系統(tǒng)內的多個事 件，包括調控多己胺神經(jīng)傳遞和致焦慮效應，W及影響認知能力和傷害感受化N.化awley 和R.L.Corwin, 1994，Peptides, 15 :731-755 ;N.S.Baber,C.T.Dourish，和D.R.Hill， 化in(1989)，39 (3)，307-28 ;W及P.DeTullio,J.Delarge和B.Pirotte，ExpertOpinion onInvestigationalDrugs(2000) ,9(1)，129-146)。CCK已經(jīng)顯不通過兩種受體亞型： CCK-A(CCK-I)和CCK-B(CCK-2)亞型來介導它的各種不同的激素和神經(jīng)調節(jié)物質的功能 (G.N.Woodruff和J.Hu曲es，Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol. (1991)，31 :469-501)。CCK-I 和CCK-2受體亞型屬于屯跨膜G蛋白偶聯(lián)受體超家族。許多研究表明CCK通過CCK-I受體介 導了飽腹感效應，其據(jù)信通過迷走神經(jīng)傳入將中繼餐后飽腹信號傳入中樞神經(jīng)系統(tǒng)從而引 起飽腹的"感覺"(G.P.Smith等人，Science213 (1981)，第 1036-1037 頁；W及J.N.Crawley 等人，J.Pharmacol.Exp.Hier.，257 (1991)，第 1076-1080 頁）。
[0006] 已經(jīng)顯示CCK施加了一些產(chǎn)生飽腹感的直接作用，包括抑制胃排空，抑制胃酸分 泌，W及刺激膽囊收縮。無論是通過運些直接影響胃排空及腸消化或通過中樞神經(jīng)系統(tǒng)途 徑，CCK引起飽腹感，運通常會導致更少的熱量消耗。
[0007] 對抗流行性體重增加的另一個可行目標可W是誘發(fā)GLP-I。GLP-I已被描述為具 有大陣列效應的腸促膜島素激素。在1984年發(fā)現(xiàn)了GLP-1，并且發(fā)現(xiàn)它是一種重要的腸 促膜島素（Nauck，M. A. ;Kleine，N.;0rskov，C. ;Hoist，J. J. ;Willms，B. ;Creutzfel化， W.，Di油etologia1993,36,741-744)。GLP-I由響應于葡萄糖和脂肪酸的遠側回腸中的L細胞釋放，然而，已知膚類直接誘導和/或調節(jié)GLP-I的釋放化iraT等人，（2009),AmJ PhysiolGastrointestLiverPhysiol297 :G663-G671)。GLP-I在餐后被釋放至循環(huán)并 強效刺激葡萄糖依賴性的0-膜腺細胞釋放膜島素。許多附加的效應也已歸因于GLP-1， 包括刺激膜島素生物合成、恢復膜島的葡萄糖敏感性W及刺激葡萄糖轉運蛋白GLUT-2和 葡糖激酶表達的增加。GLP-I還具有許多效應：調節(jié)0-細胞群、刺激現(xiàn)有的0-細胞的 復制和生長、抑制細胞調亡W及來自導管前體細胞的新0-細胞的再生，運導致肝葡萄糖 輸出減少。GLP-I的有益的膜外作用也有報道諸如直接作用于降低肝脂含量和改善屯、功 會b(Abu-HamdahR.JClinEndocrinolMet油.2009Jun;94(6) :1843-52.Epub2009Mar 31)。在腸道中，GLP-I是強效的蠕動和胃排空的抑制劑，并已顯示出抑制胃酸分泌。胃 排空的抑制導致隨時間推移食物攝取減少W及體重減輕（Flint,A. ;Raben，A. ;Ast;rup， A. ;Hoist，J.J.，JClinInv1998,101,515-520sZander，M. ;Madsbad，S. ;Madsen，J.L.; Hoist，J.J.,Lancet2002,359,824-830)。GLP-I也已示出對食物攝入有中樞影響，其通過 控制食欲的下丘腦中屯、的GLP-I受體的作用控制食欲（Maturitas.BarberTM等人，2010 年11月；67(3):197-202.(1〇1:10.1016/1111日化'11日3.2010.06.018.化油，2010年7月23 曰）。
[0008] 鑒于體重增加流行W及缺乏有效對抗方法，人們需要有營養(yǎng)的、容易獲得的補充 劑、成分、和/或食物產(chǎn)品，它們可W食用并促進體重減輕或控制體重。為此，本發(fā)明提出具 有飽腹感激素釋放活性的新型多膚（例如CCK和/或GLP-I釋放活性）。

【發(fā)明內容】

[0009] 本發(fā)明的一個方面涵蓋鑒定具有誘發(fā)例如STC-I細胞的CCK釋放能力的新型多 膚、W及編碼該多膚的多核巧酸。在另一方面，本發(fā)明涵蓋鑒定具有誘發(fā)例如STC-I細胞的 GLP-I釋放能力的新型多膚、W及編碼該多膚的多核巧酸。在另一方面，本發(fā)明涵蓋鑒定具 有誘發(fā)例如STC-I細胞的CCK和GLP-I釋放能力的新型多膚、W及編碼該多膚的多核巧酸。
[0010] 在其它方面，本發(fā)明涵蓋包含本發(fā)明的多膚的產(chǎn)品（例如包含可食用材料和本文 所述多膚的食物產(chǎn)品或包含本文所述多膚的補充劑）。
[0011] 在其它方面，本發(fā)明涵蓋誘發(fā)細胞如STC-I細胞釋放CCK的方法，運是使所述細胞 接觸本發(fā)明多膚的結果。在其它方面，本發(fā)明涵蓋誘發(fā)細胞如STC-I細胞釋放GLP-I的方 法，運是使所述細胞接觸本發(fā)明多膚的結果。在其它方面，本發(fā)明涵蓋誘發(fā)細胞如STC-I細 胞釋放CCK和GLP-I的方法，運是使所述細胞接觸本發(fā)明多膚的結果。在具體方面，該細胞 是STC-I細胞。
[0012] 在其它方面，本發(fā)明涵蓋誘發(fā)飽腹感的方法。在誘發(fā)飽腹感方法的其它方面，提供 本發(fā)明的多膚并誘發(fā)細胞釋放CCK。在誘發(fā)飽腹感方法的其它方面，提供本發(fā)明的多膚并誘 發(fā)細胞釋放GLP-I。在誘發(fā)飽腹感方法的其它方面，提供本發(fā)明的多膚并誘發(fā)細胞釋放CCK 和化P-I。
【附圖說明】 陽01引圖1.CCK釋放劑量響應曲線，用于SEQIDNO:1。SEQIDNO:1用固相方法合成， 并且用于刺激STC-I細胞如所述釋放CCK。數(shù)據(jù)擬合邏輯函數(shù)。根據(jù)回歸數(shù)據(jù)，估計EC50 將為43yM。
[0014] 圖2.GLP-I釋放劑量響應曲線，用于沈QIDNO:1。沈QIDNO:1用固相方法合 成，并且用于刺激STC-I細胞如所述釋放GLP-1。數(shù)據(jù)擬合邏輯函數(shù)。根據(jù)回歸數(shù)據(jù)，估計 ECSO將為 186yM。
[0015] 圖3.截短膚的CCK釋放活性。全長SEQIDNO:1的N-末端和C-末端截短膚用 固相方法合成，并且用于刺激STC-I細胞如所述釋放CCK。數(shù)據(jù)表示=個獨立實驗的結果， 并且表達為由全長膚刺激的CCK釋放活性的百分比。
[0016] 圖4.截短膚的化P-I釋放活性。全長SEQIDNO:1的N-末端和C-末端截短膚 用固相方法合成，并且用于刺激STC-I細胞如所述釋放GLP-I。數(shù)據(jù)表達為由全長膚刺激的 GLP-I釋放活性的百分比。
【具體實施方式】
[0017]CCK和化P-I促進飽腹感和緩慢的胃排空，從而賦予受試者飽的感覺。目前已發(fā) 現(xiàn)包含氨基酸序列SEQIDNO:1及其變體的新型多膚具有誘發(fā)細胞如STC-I細胞釋放CCK 和GLP-I的能力。本發(fā)明的新型多膚W及它們的變體如本文所示進行了較充分的描述。
[0018] 食物攝取對食欲和進一步的食物攝取施加一個瞬時抑制效應。在食物的所有特性 中，總能量含量和宏量營養(yǎng)素組合物（例如脂肪、碳水化合物、或蛋白）看起來是此類飽腹 感相關的主觀感受的主要決定因素。大量證據(jù)表明=種宏量營養(yǎng)素在抑制饑餓和能量攝取 的程度上存在差異。蛋白已經(jīng)顯示出比脂肪更致飽，脂肪繼而比碳水化合物更致飽。來源 于親本食物蛋白的一些特定多膚結構具有生物活性的發(fā)現(xiàn)已經(jīng)刺激了對可能導致飽腹感 誘發(fā)產(chǎn)品（例如食物產(chǎn)品）開發(fā)的膚的研究，該產(chǎn)品目標在于控制食物攝取并由此影響體 重。
[0019]I.新巧《化巧編碼其的《核巧酸。
[0020] 本發(fā)明的一個特定方面設及分離的多膚，其具有與SEQIDNO:1至少50%，至少 55%，至少65%，至少70%，至少75%，至少80%，至少85%，至少90%，至少91%，至少 92%，至少93%，至少94%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%，或100% 相同的序列同一性。在另一個特定方面，本發(fā)明的多膚具有與SEQIDNO:1至少50%，至 少55%，至少65%，至少70%，至少75%，至少80%，至少85%，至少90%，至少91 %，至少 92%，至少93%，至少94%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%，或100% 相同的序列同一性，該多膚也具有誘發(fā)例如STC-I細胞釋放CCK和/或GLP-I的能力。
[0021] 在其它方面，本發(fā)明的多膚包含SEQIDNO:1或其變體的氨基酸序列、基本上由該 序列組成、或由該序列組成，并且具有誘發(fā)例如STC-I細胞釋放CCK和/或GLP-I的能力。 就包含本發(fā)明多膚的多膚而言，運些多膚可由無限的氨基酸組成，或者可由有限的氨基酸 組成，有限的氨基酸具有的上限為約1，000個氨基酸，約975個氨基酸，約950個氨基酸，約 925個氨基酸，約900個氨基酸，約