針對(duì)卵母細(xì)胞能力的標(biāo)志物基因的制作方法
【專利說(shuō)明】針對(duì)卵母細(xì)胞能力的標(biāo)志物基因 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 卵丘細(xì)胞（CC)基因表達(dá)正作為用W選擇具有最高妊娠機(jī)會(huì)的胚胎的形態(tài)學(xué)評(píng)分 的另外方法進(jìn)行探究。本發(fā)明設(shè)及鑒定用于評(píng)估哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞在受精后產(chǎn)生可存能存 活的妊娠的能力的生物標(biāo)志物基因的新型方法，其基于使用活產(chǎn)和胚胎發(fā)育作為在潛在生 物標(biāo)志物基因的外顯子水平分析中將使用的卵母細(xì)胞的終點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明進(jìn)一步提供了由 此鑒定的CC表達(dá)的生物標(biāo)志物基因，W及基于使用本發(fā)明的方法鑒定的生物標(biāo)志物基因 的預(yù)后模型。
[000引發(fā)明背景
[0003] 單胚胎移植（SET)是限制ART后的多胎妊娠的優(yōu)選處理。為了不危及帶回家嬰兒 率，用于第一周期中的移植的胚胎的選擇變得更加重要。緊跟著基于形態(tài)學(xué)的現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)， 目前其它方法正處于研究中。在生長(zhǎng)和成熟期間與卵母細(xì)胞緊密接觸的卵丘細(xì)胞（CC)中 定量基因表達(dá)測(cè)量的使用似乎是有希望的方法化Uang和Wells2010)。自從關(guān)于CC表達(dá) 可能與胚胎發(fā)育相關(guān)的主題的研究首次公開W后（McKenzie等人2004)，其它幾項(xiàng)研究已 探究了運(yùn)種可能性，并嘗試使CC表達(dá)與不同終點(diǎn)關(guān)聯(lián)。所探究的終點(diǎn)的例子是：胚胎發(fā)育 (Anderson等人 2009;Cillo等人 2007;Feuerstein等人 2007;Hasegawa等人 2005;van Mont化OTt等人2008 ;Zhang等人2005)、卵母細(xì)胞的非整倍性階段化ragouli等人2012b)、 卵母細(xì)胞核成熟階段（Ouandaogo等人2011)W及從患者角度來(lái)看可能最重要的：妊娠結(jié)局 (Assidi等人 2011;Assou等人 2008 ;Gebhar化等人 2011;Wathlet等人 2012;Wathlet等 人2011)。不同研究之間的結(jié)果的確認(rèn)在CC基因表達(dá)的分析中似乎并不明顯。在目前的文 獻(xiàn)中，未發(fā)現(xiàn)許多在不同研究中共同的基因。例如，在兩項(xiàng)研究中透明質(zhì)酸合酶2(HAS2)在 質(zhì)量良好的胚胎中相比低胚胎形態(tài)表達(dá)更高（Cillo等人2007 ;McKenzie等人2004)，但在 其它兩項(xiàng)研究中可不與胚胎形態(tài)相關(guān)（Anderson等人2009 !Gebhar化等人2011)。不一致 性可W是由于不同實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、使用不同終點(diǎn)引起的，但基因表達(dá)可受已知因素例如患者的 刺激方案（A化iaenssens等人2009 ;A化iaenssens等人2010 !Grond址1等人2009)或仍未 評(píng)估的因素例如在不同IVF實(shí)驗(yàn)室中使用的培養(yǎng)基的影響。
[0004] 在本研究中，使用定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（QPCR)回顧性分析來(lái)自47個(gè)胞質(zhì)內(nèi)精 子注射（ICSI)患者的47個(gè)個(gè)體卵丘復(fù)合物。通過(guò)使用目前的樣品集，對(duì)來(lái)自先前研究 (Wathlet等人2012)的妊娠預(yù)測(cè)模型就其預(yù)測(cè)力進(jìn)行了驗(yàn)證。在下一步中，在尋找具有更 強(qiáng)預(yù)測(cè)力的新基因的嘗試中，通過(guò)考慮之前描述的3種基因（肝配蛋白-B2 (EFNB2)、巧/巧 調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶ID(CAMKID)、斯巧素I(STCl))和多種新型基因W及所述基因的剪 接變體，在數(shù)學(xué)模型中構(gòu)建了新的多參數(shù)模型W預(yù)測(cè)卵母細(xì)胞能力（參見表）。
[0005] 我們的患者樣品集實(shí)現(xiàn)了之前從未在文獻(xiàn)中報(bào)道過(guò)的分析：分析了來(lái)自在新移植 周期中不導(dǎo)致妊娠的卵母細(xì)胞的CC和來(lái)自在冷凍胚胎移植（FRET)周期后導(dǎo)致妊娠的其同 胞卵母細(xì)胞的CC(患者曲分析）。就我們所知，運(yùn)是比較來(lái)自如會(huì)在最終臨床應(yīng)用中完成的 SET背景下相同回收周期的妊娠和非妊娠CC的首個(gè)研究。
[0006] 附圖簡(jiǎn)述
[0007] 圖I:在本研究中使用的樣品的概述
[0008] 本圖代表用于本研究中執(zhí)行的不同分析的樣品的分布。灰色背景域限定用于特異 度分析的樣品，其在域的左側(cè)上標(biāo)記。沈T:單胚胎移植；FRET冷凍胚胎移植周期；rFSH:重 組促卵泡激素。a: (Wathlet等人2012)。
[000引 A:妊娠分析（患者間）
[0010] -來(lái)自早期研究a的妊娠模型的驗(yàn)證巧FNB2、CAMKlD和STCl)
[0011] -t檢驗(yàn)分析妊娠相對(duì)于非妊娠
[0012] -用新的基因構(gòu)建新的妊娠模型 [001引B:妊娠分析（患者內(nèi)）
[0014]-配對(duì)t檢驗(yàn)妊娠相對(duì)于非妊娠
[0015]-測(cè)試在患者間分析中發(fā)現(xiàn)的多參數(shù)模型
[0016] 圖2:非妊娠相對(duì)于活產(chǎn)相關(guān)卵丘細(xì)胞樣品的標(biāo)準(zhǔn)化基因表達(dá)值的t檢驗(yàn)。
[0017] 該圖表代表在與卵母細(xì)胞相關(guān)的卵丘細(xì)胞樣品之間的基因表達(dá)中的差異，所述卵 母細(xì)胞在體外受精處理后導(dǎo)致（n= 19)或不導(dǎo)致（n= 28)活產(chǎn)。對(duì)B2M和UBC的平均值 完成標(biāo)準(zhǔn)化。因?yàn)闇y(cè)試多重基因，所W邦弗朗尼校正度onferronicorrection)允許僅將P 值<0. 0042視為顯著的。發(fā)現(xiàn)的表達(dá)總范圍通過(guò)框和須線進(jìn)行描述，所述框和須線分別代 表中屯、為中值的兩個(gè)內(nèi)部和兩個(gè)外部四分位數(shù)。
[001引圖3 :3個(gè)妊娠模型的接受者操作特征（ROC)曲線
[0019] 構(gòu)建多參數(shù)模型W預(yù)測(cè)妊娠的機(jī)會(huì)，所述多參數(shù)模型包括在與卵母細(xì)胞相關(guān)的卵 丘細(xì)胞樣品中測(cè)量的基因表達(dá)水平，所述卵母細(xì)胞在體外受精處理后導(dǎo)致或不導(dǎo)致活產(chǎn)。 對(duì)于模型3,還包括患者和周期特征（根據(jù)表3)。模型1局限于3種基因，且包括EFNB2、 PGR和GSTA4。在模型2中，所有基因均允許進(jìn)入模型，只要它們可W改善模型。對(duì)于模型2 保留五種基因：EFNB2、PGR、GSTA4、GTSA3、GPX3。為了嘗試改善模型2,在模型3中，如果它 們可W改善模型的P值，則允許患者和周期特征進(jìn)入模型：EFNB2、PGR、GSTA4、GTSA3、GPX3、 年齡、相對(duì)E2和促排卵天數(shù)。各自的曲線下面積為0. 79、0. 89和0.90。相對(duì)E2 :對(duì)于卵丘 復(fù)合物數(shù)目在hCG日測(cè)量的E2值。
[0020] 圖4 :關(guān)于患者曲分析妊娠相對(duì)于非妊娠的配對(duì)t檢驗(yàn)
[0021] 該圖比較對(duì)于每個(gè)患者，在后續(xù)單胚胎冷凍移植周期中，對(duì)應(yīng)于不導(dǎo)致妊娠的卵 母細(xì)胞的卵丘復(fù)合物與導(dǎo)致妊娠的卵母細(xì)胞的卵丘復(fù)合物的基因表達(dá)。每個(gè)患者卵母細(xì)胞 源于一個(gè)回收周期。一個(gè)患者具有2個(gè)連續(xù)的冷凍周期，第一個(gè)未導(dǎo)致妊娠。一種顏色代 表一個(gè)患者。虛線顯示（僅在具有主要趨勢(shì)的圖表中：從非妊娠到妊娠向上或向下，其中 P<0. 1)該對(duì)未遵循主要趨勢(shì)。運(yùn)些對(duì)還在表7中用…標(biāo)記。
[0022] 圖5 :預(yù)測(cè)妊娠的最強(qiáng)模型用患者內(nèi)分析獲得，AUC=曲線下面積。公式：預(yù)測(cè)妊 娠的機(jī)會(huì)=3. 23+2. 57巧FNB2+1. 87*NC0A7p= 0. 0127。（至少0. 5的值指妊娠，更低的值 指無(wú)妊娠）。
[002引圖6 :在GnRH括抗劑和rF甜預(yù)處理后，用患者間分析獲得的預(yù)測(cè)妊娠的最強(qiáng)模型 之一，AUC=曲線下面積。公式：妊娠=-1. 36999+1. 79393*CAMK1D外顯子9+0. 89385地SPHl 外顯子2-0. 73763*NC0A7 (陽(yáng)性值指妊娠，陰性值指無(wú)妊娠）。
[0024] 圖7:在GnRH括抗劑和HP-hMG預(yù)處理后，用患者間分析獲得的預(yù)測(cè)妊娠的最強(qiáng)模 型之一，AUC=曲線下面積。公式：妊娠=0. 46786+0. 90886*SA甜1-0. 2264*CAMK1D外顯子 1 (陽(yáng)性值指妊娠，陰性值指無(wú)妊娠）。
[00幼發(fā)明概述
[0026] 本發(fā)明設(shè)及用于檢測(cè)生物標(biāo)志物基因或其剪接變體的方法，所述生物標(biāo)志物基因 或其剪接變體用于評(píng)估哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞導(dǎo)致分娩、植入、形成植入前胚泡或胚胎和/或 導(dǎo)致受精的能力；所述方法包括：
[0027] -使用活產(chǎn)或胚胎發(fā)育作為待使用的卵母細(xì)胞的選擇終點(diǎn)；
[002引-在樣品的微陣列實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行基因表達(dá)的外顯子水平分析，所述樣品包含與卵母 細(xì)胞聯(lián)合的至少一個(gè)顆粒細(xì)胞或卵丘細(xì)胞；
[0029] -進(jìn)行基因表達(dá)的所述外顯子水平分析的基于患者內(nèi)的比較訊
[0030] -對(duì)于能夠評(píng)估哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞導(dǎo)致分娩、植入、形成植入前胚泡或胚胎和/或 導(dǎo)致受精的能力的生物標(biāo)志物基因，僅將在配對(duì)t檢驗(yàn)中的P值<0. 05視為顯著的。
[0031] 在備選實(shí)施方案中，在所述外顯子水平基因分析的差異表達(dá)的情況下，其中所述 差異表達(dá)是至少20%不同于對(duì)照或參考標(biāo)準(zhǔn)中的所述基因的外顯子水平表達(dá)時(shí)，基因被視 為評(píng)估卵母細(xì)胞的能力的生物標(biāo)志物基因。
[0032] 與現(xiàn)有方法相比較，本發(fā)明的方法的不同之處在于卵母細(xì)胞的選擇終點(diǎn)、基因的 外顯子水平分析和基于患者內(nèi)的比較。使用活產(chǎn)和胚胎發(fā)育作為待用于鑒定生物標(biāo)志物基 因的卵母細(xì)胞的選擇終點(diǎn)的確使本發(fā)現(xiàn)的結(jié)果區(qū)別于本領(lǐng)域，在其中已使用其它終點(diǎn)也稱 為"中間終點(diǎn)"，如受精、基于形態(tài)的胚胎質(zhì)量或胚泡發(fā)育。中間終點(diǎn)對(duì)于完全卵母細(xì)胞能力 的相關(guān)性是有限的，因?yàn)槔缭诘?天時(shí)具有良好（基于形態(tài)的）胚胎發(fā)育能力的卵母細(xì) 胞僅在33%的情況下導(dǎo)致妊娠。適當(dāng)終點(diǎn)的選擇因此對(duì)于獲得本生物標(biāo)志物基因集是關(guān)鍵 的，所述生物標(biāo)志物基因集顯示為獲得至少60%的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（PPV)和陰性預(yù)測(cè)值（NPV)。
[0033] 進(jìn)一步的區(qū)分特點(diǎn)基于基因選擇基于患者內(nèi)比較的事實(shí)。通過(guò)進(jìn)行例如變得妊娠 或未妊娠的患者的回顧性卵丘細(xì)胞分析，數(shù)據(jù)將通過(guò)影響基因表達(dá)的患者間變異而偏倚。 卵丘細(xì)胞基因表達(dá)水平受下述影響：患者特異性特征（例如：年齡、BMI、預(yù)處理）、卵母細(xì)胞 質(zhì)量和其它基因的表達(dá)（A化iaenssens等人2010)。卵母細(xì)胞的能力還通過(guò)在不同過(guò)程中 成功的能力進(jìn)行測(cè)定。通過(guò)使用患者內(nèi)樣品來(lái)代替，所述患者間變異性被壓制，從而增加被 顯示為是可用于具有不同預(yù)處理的患者的活產(chǎn)預(yù)測(cè)的可應(yīng)用基因的本發(fā)明的生物標(biāo)志物 基因的鑒定。
[0034] 最后，卵母細(xì)胞基因表達(dá)分析作為外顯子水平分析執(zhí)行。如下文實(shí)施例中證實(shí)的， 運(yùn)增加預(yù)測(cè)模型的分辨能力。當(dāng)一些基因的總體表達(dá)顯示并非預(yù)測(cè)性的時(shí)，察看運(yùn)些基因 內(nèi)的外顯子表達(dá)水平顯示具有預(yù)測(cè)價(jià)值。當(dāng)察看基因的總體表達(dá)時(shí)，在外顯子水平下相關(guān) 的一些信號(hào)將拉平目的標(biāo)志物的可能喪失。
[0035] 使用前述方法，已獲得預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物基因的最低限度列表，并且呈現(xiàn)于下文 表13中。相應(yīng)地，在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了前述方法，其中對(duì)表13的基因執(zhí)行基因表 達(dá)的外顯子水平分析。該基因列表視為卵母細(xì)胞能力標(biāo)志物基因的儲(chǔ)庫(kù)，其可W用于多參 數(shù)分析中，W選擇對(duì)于活產(chǎn)具有最強(qiáng)預(yù)測(cè)能力的獨(dú)立基因的組合。如本文下文實(shí)施例中證 實(shí)的，在不同類型的輔助生殖技術(shù)（ART)處理后，本發(fā)明人在卵母細(xì)胞能力的預(yù)測(cè)模型中 成功地應(yīng)用運(yùn)些基因的組合。
[0036] 因此，在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了在篩選實(shí)驗(yàn)中使用來(lái)自卵母細(xì)胞的卵 丘細(xì)胞基因表達(dá)檢測(cè)基因或剪接變體的生物標(biāo)志物基因組合模型的方法，其包括：
[0037] a.檢測(cè)使用前述方法鑒定的至少2種生物標(biāo)志物基因；
[0038]b.使用雙尾t檢驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)所述至少2種生物標(biāo)志物基因的生物標(biāo)志物基因表達(dá)組 合與關(guān)于活產(chǎn)的卵母細(xì)胞能力的關(guān)聯(lián)，并且保留具有I型P<〇. 05的截?cái)嘀档乃鲋辽?種 生物標(biāo)志物基因的組合作為模型，來(lái)預(yù)測(cè)哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞在能夠活產(chǎn)或者用于評(píng)估胚胎 或胚細(xì)胞體外發(fā)育的能力；
[0039] C.進(jìn)行逐步多參數(shù)回歸分析，W確定所述至少2種生物標(biāo)志物的剪接變體是否具 有III型P值<0, 3,并且將所述剪接變體加入步驟b中保留的模型；和
[0040] (U則定包含步驟C的剪接變體的模型的總體P值，并且當(dāng)總體P值進(jìn)一步降低時(shí)， 將所述剪接變體保留在所述模型中。
[0041] 如由下文實(shí)施例顯而易見的，在一個(gè)實(shí)施方案中，前述篩選實(shí)驗(yàn)是微陣列實(shí)驗(yàn)或 QPCR實(shí)驗(yàn)。
[0042] 在備選方法中，替代地從如表13中呈現(xiàn)的基因的至少2種生物標(biāo)志物基因的組合 開始。在特定實(shí)施方案中，用于建立生物標(biāo)志物基因表達(dá)模型的基因選自下表8中列出的 11種基因。使用因此鑒定的生物標(biāo)志物基因和生物標(biāo)志物基因的組合，本發(fā)明進(jìn)一步提供 了所述基因和基因組合在體外方法中的用途，所述體外方法評(píng)估哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞導(dǎo)致分 娩、植入、形成植入前胚泡或胚胎和/或?qū)е率芫哪芰Α?br>[0043] 因此，在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于評(píng)估哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞導(dǎo)致分娩、植 入、形成植入前胚泡或胚胎和/或?qū)е率芫哪芰Φ捏w外方法；所述方法包括下述步驟：
[0044]-在包含與卵母細(xì)胞聯(lián)合的至少一個(gè)顆粒細(xì)胞或卵丘細(xì)胞的樣品中，測(cè)定使用上 述方法鑒定的生物標(biāo)志物基因表達(dá)水平；或使用前述方法鑒定的生物標(biāo)志物組合的生物標(biāo) 志物基因表達(dá)水平，W檢測(cè)基因或剪接變體的生物標(biāo)志物基因組合模型；和
[0045]-基于所述表達(dá)水平，評(píng)估卵母細(xì)胞導(dǎo)致分娩、植入、形成植入前胚泡或胚胎和/ 或?qū)е率芫哪芰Α?br>[0046] 在前述方法中，評(píng)估卵母細(xì)胞的能力使用生物標(biāo)志物基因組合模型來(lái)完成，所述 生物標(biāo)志物基因組合模型使用本發(fā)明的方法測(cè)定。特別地，使用如本文描述的生物標(biāo)志物 基因組合模型之一。在所述模型中，基因的表達(dá)水平將用于提供所述卵母細(xì)胞的妊娠概率 (巧的數(shù)學(xué)公式（下文）中。在一個(gè)實(shí)施方案中，用于評(píng)估卵母細(xì)胞的能力的表達(dá)水平是標(biāo) 準(zhǔn)化的表達(dá)水平。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，如本文提供的用于評(píng)估卵母細(xì)胞的能力的體外 方法進(jìn)一步包括使表達(dá)水平標(biāo)準(zhǔn)化的步驟。在另一個(gè)實(shí)施方案中，它包括使表達(dá)水平標(biāo)準(zhǔn) 化的步驟，其中通過(guò)比較其表達(dá)與并非標(biāo)志物的基因（例如組成性表達(dá)的看家基因）的表 達(dá)校正所述標(biāo)志物的絕對(duì)表達(dá)水平來(lái)使所述生物標(biāo)志物基因的表達(dá)水平標(biāo)準(zhǔn)化。在一個(gè)實(shí) 施方案中，用于使所述生物標(biāo)志物基因的表達(dá)水平標(biāo)準(zhǔn)化的看家基因選自UBC、B2M、肌動(dòng)蛋 白、64口0山冊(cè)31\〔口8、66口0、組蛋白肥4和線粒體核糖體蛋白8 18(：基因（也稱為1?酷1855); 特別是UBC或B2M。
[0047] 在備選方法中，通過(guò)比較標(biāo)志物基因表達(dá)的水平與其能力已知的對(duì)照來(lái)評(píng)估哺乳 動(dòng)物卵母細(xì)胞的能力。當(dāng)在表達(dá)水平中存在至少20%差異時(shí)，所述基因的差異表達(dá)指示卵 母細(xì)胞的能力。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞的能力使用如本文描述的生 物標(biāo)志物基因組合模型之一進(jìn)行評(píng)估。在所述實(shí)施方案中，體外方法可W進(jìn)一步包括下述 步驟：使所述基因的外顯子水平基因表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)化；和基于所述標(biāo)準(zhǔn)化的表達(dá)水平，評(píng)估卵 母細(xì)胞導(dǎo)致分娩、植入、形成植入前胚泡或胚胎和/或?qū)е率芫哪芰?。在另一個(gè)實(shí)施方案 中，任選使用標(biāo)準(zhǔn)化的表達(dá)水平，通過(guò)比較標(biāo)志物基因表達(dá)的水平與其能力已知的對(duì)照來(lái) 評(píng)估卵母細(xì)胞，并且其中當(dāng)在所述基因的表達(dá)水平中存在至少20%差異時(shí)，所述卵母細(xì)胞 能夠?qū)е路置?、植入、形成植入前胚泡或胚胎?或?qū)е率芫?br>[0048] 技術(shù)人員熟知可用于測(cè)定所述一種或多種生物標(biāo)志物基因的標(biāo)志物基因表達(dá)水 平的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，它包括借助于使用引物和/或探針的生物測(cè)定法測(cè)量所述 基因的多核巧酸水平，所述引物和/或探針能夠與所述多核巧酸或者所述多核巧酸內(nèi)的一 個(gè)或多個(gè)區(qū)域特異性雜交。在另一個(gè)實(shí)施方案中，它包括借助于生物測(cè)定法測(cè)量相關(guān)基因 產(chǎn)物的蛋白質(zhì)水平，所述測(cè)定法使用針對(duì)所述蛋白質(zhì)、其前體形式、其底物或其代謝產(chǎn)物的 結(jié)合劑、抗體或其片段，。
[0049] 盡管前述方法配置為測(cè)定哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞且特別是人卵母細(xì)胞的能力，但運(yùn)并 非因此暗示樣品局限于此。待用于本發(fā)明中的樣品明顯包括源于卵母細(xì)胞的顆粒細(xì)胞或卵 丘，但還可W基于卵泡液或來(lái)自培養(yǎng)基，其包含與卵母細(xì)胞聯(lián)合的至少一個(gè)顆粒細(xì)胞或卵 丘細(xì)胞。在對(duì)照或參考樣品中，卵母細(xì)胞的能力是已知的，可W使用具有已知有能力或已知 無(wú)能力的卵母細(xì)胞的樣品，其中所述樣品可W得自與待測(cè)試樣品相同或不同的受試者。在 特定實(shí)施方案中，對(duì)照或參考樣品包含與已知無(wú)能力的卵母細(xì)胞聯(lián)合的至少一個(gè)顆粒細(xì)胞 或卵丘細(xì)胞，無(wú)論是否得自與待測(cè)試樣品相同的受試者。
[0050] 如由下文實(shí)施例可見的，已發(fā)現(xiàn)通過(guò)下述基因的外顯子水平分析，允許建立生物 標(biāo)志物基因表達(dá)模型W預(yù)測(cè)樣品中的卵母細(xì)胞的能力：CAMK1D、PTGS2、EFNB2、VCAN、STC1、 STC2、PGR和GPX3。特別地，待用于根據(jù)本發(fā)明的體外方法中的生物標(biāo)志物基因選自包含 SA甜 1、MRO冊(cè)、NC0A7、DNA冊(cè)、服PHl外顯子 2、服PHl外顯子 6、GALNTL6、SPTBN5、CAMKlD外 顯子1、CAMKlD外顯子9和EFNB2的組。本發(fā)明因此提供了用于評(píng)估哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞導(dǎo) 致分娩、植入、形成植入前胚泡或胚胎和/或?qū)е率芫哪芰Φ捏w外方法；所述方法包括下 述步驟：
[0051] -在包含與卵母細(xì)胞聯(lián)合的至少一個(gè)顆粒細(xì)胞或卵丘細(xì)胞的樣品中，測(cè)定選自 CAMK1D、PTGS2、EFNB2、VCAN、STC1、STC2、PGR和GPX3的一種或多種生物標(biāo)志物基因的外顯 子水平基因表達(dá)；
[005引-比較生物標(biāo)志物基因表達(dá)的水平與其能力已知的對(duì)照訊
[0053] -基于所述比較，評(píng)估卵母細(xì)胞導(dǎo)致分娩、植入、形成植入前胚泡或胚胎和/或?qū)?致受精的能力。
[0054] 在特定實(shí)施方案中，對(duì)選自SA甜UMRO冊(cè)、NC0A7、DNA冊(cè)、HSPHl外顯子2、HSPHl外 顯子6、GALNTL6、SPTBN5、CAMK1D外顯子UCAMK1D外顯子9和EFNB2的一種或多種基因的 剪接變體執(zhí)行基因表達(dá)的外顯子水平分析。在前述基因集內(nèi)的生物標(biāo)志物的優(yōu)選組合選 自：
[0055] ?EFNB2 和NC0A7 ;
[0056] ?CAMKlD外顯子 9 和HSPHl外顯子 2 和NC0A7
[0057] ?CAMKlD外顯子 9 和HSPHl外顯子 6 和NC0A7
[0058] ?CAMKlD外顯子I和SA甜I;和
[0059] ?EFBN2和SA甜1 ;最終與選自表13中列出的基因的一種或多種另外基因組合； 特別與選自表8中列出的基因的一種或多種另外的更多基因組合；特別與選自CAMK1D、 PTGS2、EFNB2、VCAN、STC1、STC2、PGR和GPX3的一種或多種另外基因組合；更特別與選自 EFNB2、CAMKlD外顯子1、CAMKlD外顯子9、服PHl外顯子2、服PHl外顯子6、NC0A7和SAWl 的基因組合；更特別與選自HSP化外顯子2、服P化外顯子6、NC0A7和SAS化的基因組合。
[0060] 因此，在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于評(píng)估哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞導(dǎo)致分娩、植 入、形成植入前胚泡或胚胎和/或?qū)е率芫哪芰Φ捏w外方法；所述方法包括下述步驟：
[0061] -在包含與卵母細(xì)胞聯(lián)合的至少一個(gè)顆粒細(xì)胞或卵丘細(xì)胞的樣品中，測(cè)定選自 CAMKlD、PTGS2、EFNB2、VCAN、STCl、STC2、PGR和GPX3 的 2、3、4、5、6、7 或 8 種生物標(biāo)志物基 因的外顯子水平基因表達(dá)；
[0062] -使所述基因的外顯子水平表達(dá)基因表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)化；和
[0063] -基于所述標(biāo)準(zhǔn)化的表達(dá)水平，評(píng)估卵母細(xì)胞導(dǎo)致分娩、植入、形成植入前胚泡或 胚胎和/或?qū)е率芫哪芰Α?br>[0064] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于評(píng)估哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞導(dǎo)致分娩、植入、 形成植入前胚泡或胚胎和/或?qū)е率芫哪芰Φ捏w外方法；所述方法包括下述步驟：
[0065] -在包含與卵母細(xì)胞聯(lián)合的至少一個(gè)顆粒細(xì)胞或卵丘細(xì)胞的樣品中，與選自表13 中列出的基因的一種或多種另外基因組合地；特別與選自表8中列出的基因的一種或多種 另外基因組合地；特別與選自HSP化外顯子2、服P化外顯子6、NC0A7和SAS化的一種或多 種更