一種具有神經(jīng)保護(hù)作用的異戊烯基化黃酮類化合物的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)藥，特別是一種具有神經(jīng)保護(hù)作用的異戊締基化黃酬類化合物的制 備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 神經(jīng)退行性疾病是神經(jīng)系統(tǒng)的嚴(yán)重疾病，是一種大腦或脊髓的細(xì)胞神經(jīng)元喪失的 疾病狀態(tài)。主要包括阿爾茨海默病、亨廷頓式病、帕金森式病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、多發(fā)性 硬化癥、糖尿病性視網(wǎng)膜病、多發(fā)性腦梗塞性癡呆、黃斑變性等。伴隨著人類老齡化時(shí)代的 到來，神經(jīng)退行性疾病尤其是阿爾茨海默病的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，75歲W上的患病 率為11. 5%，85歲W上高于30%，對(duì)整個(gè)社會(huì)和家庭將造成沉重的負(fù)擔(dān)。目前臨床上使用 的藥物僅是減輕或改善神經(jīng)退行性疾病的癥狀，目前尚未找到有效的方法對(duì)其進(jìn)行徹底的 治療。中草藥應(yīng)用歷史悠久，從中草藥中尋找高效低毒的具有神經(jīng)保護(hù)作用的活性物質(zhì)，研 制選擇性強(qiáng)、毒副作用低的新型防治神經(jīng)退行性疾病的藥物是藥學(xué)科研工作者迫切解決的 首要問題。
[0003] 小葉蓮是小築科桃兒屯屬植物鬼白Sinopodophyllumemodi(Wall.)Ying.的干 燥成熟果實(shí)。鬼白是一種具有悠久歷史的藥用植物，古代《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載：殺大 毒，療咳嗽喉疾，風(fēng)邪煩感，失魄妄見。不入湯。W后的歷代本草亦多有記載，主要用于活血 散結(jié)、桂風(fēng)除濕、蟲蛇咬傷、跌打、屯、胃痛、風(fēng)寒咳嗽、月經(jīng)不調(diào)、鐵棒鍵中毒、風(fēng)濕筋骨痛及 氣管炎等癥。鬼白分布比較廣泛，我國主要分布在四川、青海、西藏、甘肅、陜西。小葉蓮作 為傳統(tǒng)藏藥始載于《月王藥診》，具有悠久的藥用歷史?；瘜W(xué)成分研究表明主要含有木脂素 和黃酬類化合物，其中異戊締基化黃酬是小葉蓮中代表性的活性成分，具有重要而廣泛的 生物活性如抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗骨質(zhì)疏松、預(yù)防老年癡呆、抗糖尿病、屯、腦血管保 護(hù)、雌激素樣等。本發(fā)明所設(shè)及的異戊締基化黃酬類化合物及其生物活性，迄今為止未見有 專利或文獻(xiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對(duì)上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種具有神經(jīng)保 護(hù)作用的異戊締基化黃酬類化合物的制備方法及應(yīng)用，可有效解決制備具有神經(jīng)保護(hù)作用 的異戊締基化黃酬類化合物，實(shí)現(xiàn)制備防治神經(jīng)退行性疾病的藥物問題。
[0005] 本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，該類化合物是從小葉蓮藥材中分離得到的桃兒屯酬 C(SinoflavonoidC)、桃兒屯酬D(SinoflavonoidD)、桃兒屯酬F(SinoflavonoidF)、桃兒 屯酬G(SinoflavonoidG)，分子結(jié)構(gòu)式分別為：
[0006]
[0007] 其制備方法是，W小葉蓮6 - 9kg為原料，W2 - 5倍原料重量、體積比為75% -95%的乙醇加熱回流提取3次，提取溫度為90 - 95°C，每次提取時(shí)間為1. 5 - 2小時(shí)，減壓回 收乙醇，得浸膏狀乙醇提取物，混懸于2 - 3.化的蒸饋水中，依次W石油酸、二氯甲燒、乙酸 乙醋、正下醇萃取3次，每次2 - 3.化，時(shí)間為1. 5 - 2小時(shí)；將乙酸乙醋萃取部位經(jīng)硅膠柱 色譜分離，依次用體積比為 100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、 100:200、0:100的石油酸-丙酬混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度用9. 1 - 1化洗脫液，流速 為10 - 15mLmin1，每350 - 500mL為一流份，收集260個(gè)流份，各個(gè)流份經(jīng)硅膠薄層色譜檢測(cè) 分析，用GF254薄層板，分別W體積比1 : 1的石油酸-丙酬和體積比5 : 1的二氯甲燒-甲 醇作為展開劑，W體積比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作為顯色劑，105°C加熱3 - 5min，根據(jù) 薄層色譜檢測(cè)結(jié)果，分別合并流份1 - 35、流份36 - 85、流份86 - 104、流份105 - 115、流份 116 - 132、流份 133 - 144、流份 145 - 157、流份 158 - 163、流份 164 - 170、流份 171 - 182、 流份 183 - 188、流份 189 - 195、流份 196 - 204、流份 205 - 208、流份 209 - 234、流份 235 -260,得到化.1-Fr. 16個(gè)組份；將組份化.2經(jīng)Se地adexLH-20凝膠柱色譜，甲醇洗脫，每 5 -lOmL為一流份，收集35個(gè)流份，各個(gè)流份經(jīng)硅膠薄層色譜檢測(cè)分析，用GF254薄層板， W體積比8 : 1的二氯甲燒-丙酬作為展開劑，W體積比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作為 顯色劑，105°C加熱3 - 5min，根據(jù)薄層色譜檢測(cè)結(jié)果，分別合并流份5 - 18、流份19 - 32、流 份33 - 35,得到3個(gè)亞組份化.2-1，化.2-2,化.2-3 ;將亞組份化.2-1經(jīng)開放0DS柱色譜， 用體積比60 : 40、體積比65 : 35、體積比70 : 30、體積比75 : 25的甲醇-水作洗脫液 進(jìn)行梯度洗脫，收集體積比60 : 40甲醇-水洗脫液得桃兒屯酬F、收集體積比65 : 35甲 醇-水洗脫液得桃兒屯酬C、收集體積比70 : 30甲醇-水洗脫液得桃兒屯酬D、收集體積 比75 : 25甲醇-水洗脫液得桃兒屯酬G。
[0008] 本發(fā)明制備的具有神經(jīng)保護(hù)作用的異戊締基化黃酬類化合物桃兒屯酬C、桃兒屯 酬D、桃兒屯酬F、桃兒屯酬G具有保護(hù)神經(jīng)的作用，有效用于制備防治神經(jīng)退行性疾病的藥 物，具有實(shí)際的臨床意義，經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益顯著。
【具體實(shí)施方式】
[0009]W下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說明。
[0010] 本發(fā)明在具體實(shí)施中可由W下實(shí)施例給出。
[0011] 實(shí)施例1
[0012] 本發(fā)明在具體實(shí)施中，具有神經(jīng)保護(hù)作用的異戊締基化黃酬類化合物可由小葉 蓮9kg為原料，W1化、體積比為95 %的乙醇加熱回流提取3次，提取溫度為95°C，每次提 取時(shí)間為1. 5小時(shí)，減壓回收乙醇，得浸膏狀乙醇提取物，混懸于3.化的蒸饋水中，依次W 石油酸、二氯甲燒、乙酸乙醋、正下醇萃取3次，每次3.化，時(shí)間為1. 5小時(shí)；將乙酸乙醋萃 取部位經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用體積比為100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、 100:70、100:100、100:200、0:100的石油酸-丙酬混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度用13L 洗脫液，流速為15mLmin1，每500mL為一流份，收集260個(gè)流份，各個(gè)流份經(jīng)硅膠薄層色譜 檢測(cè)分析，用GF254薄層板，分別W體積比1 : 1的石油酸-丙酬和體積比5 : 1的二氯甲 燒-甲醇作為展開劑，W體積比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作為顯色劑，105°C加熱3-5min， 根據(jù)薄層色譜檢測(cè)結(jié)果，分別合并流份1 - 35、流份36 - 85、流份86 - 104、流份105 - 115、 流份 116 - 132、流份 133 - 144、流份 145 - 157、流份 158 - 163、流份 164 - 170、流份 171 -182、流份 183 - 188、流份 189 - 195、流份 196 - 204、流份 205 - 208、流份 209 - 234、流份 235 - 260,得到化.1-Fr. 16個(gè)組份；將組份化.2經(jīng)Se地adexLH-20凝膠柱色譜，甲醇洗 脫，每lOmL為一流份，收集35個(gè)流份，各個(gè)流份經(jīng)硅膠薄層色譜檢測(cè)分析，用GF254薄層 板，W體積比8 : 1的二氯甲燒-丙酬作為展開劑，W體積比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作 為顯色劑，105°C加熱3 - 5min，根據(jù)薄層色譜檢測(cè)結(jié)果，分別合并流份5 - 18、流份19 - 32、 流份33 - 35,得到3個(gè)亞組份化.2-1，化.2-2,化.2-3 ;將亞組份化.2-1經(jīng)開放0DS柱色 譜，用體積比60 : 40、體積比65 : 35、體積比70 : 30、體積比75 : 25的甲醇-水作洗脫 液進(jìn)行梯度洗脫，收集體積比60 : 40甲醇-水洗脫液得桃兒屯酬F、收集體積比65 : 35 甲醇-水洗脫液得桃兒屯酬C、收集體積比70 : 30甲醇-水洗脫液得桃兒屯酬D、收集體 積比75 : 25甲醇-水洗脫液得桃兒屯酬G。
[001引實(shí)施例2
[0014] 本發(fā)明在具體實(shí)施中，具有神經(jīng)保護(hù)作用的異戊締基化黃酬類化合物也可由小葉 蓮6kg為原料，W1化、體積比為95 %的乙醇加熱回流提取3次，提取溫度為95°C，每次提 取時(shí)間為1. 5小時(shí)，減壓回收乙醇，得浸膏狀乙醇提取物，混懸于3.化的蒸饋水中，依次W 石油酸、二氯甲燒、乙酸乙醋、正下醇萃取3次，每次3.化，時(shí)間為1. 5小時(shí)；將乙酸乙醋萃 取部位經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用體積比為100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、 100:70、100:100、100:200、0:100的石油酸-丙酬混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度用9. 1L 洗脫液，流速為lOmLmin1，每350mL為一流份，收集260個(gè)流份，各個(gè)流份經(jīng)硅膠薄層色譜 檢測(cè)分析，用GF254薄層板，分別W體積比1 : 1的石油酸-丙酬和體積比5 : 1的二氯甲 燒-甲醇作為展開劑，W體積比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作為顯色劑，105°C加熱3-5min， 根據(jù)薄層色譜檢測(cè)結(jié)果，分別合并流份1 - 35、流份36 - 85、流份86 - 104、流份105 - 115、 流份 116 - 132、流份 133 - 144、流份 145 - 157、流份 158 - 163、流份 164 - 170、流份 171 -182、流份 183 - 188、流份 189 - 195、流份 196 - 204、流份 205 - 208、流份 209 - 234、流份 235 - 260,得到化.1-Fr. 16個(gè)組份；將組份化.2經(jīng)Se地adexLH-20凝膠柱色譜，甲醇洗 脫，每5mL為一流份，收集35個(gè)流份，各個(gè)流份經(jīng)硅膠薄層色譜檢測(cè)分析，用GF254薄層板， W體積比8 : 1的二氯甲燒-丙酬作為展開劑，W體積比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作為 顯色劑，105°C加熱3 - 5min，根據(jù)薄層色譜檢測(cè)結(jié)果，分別合并流份5 - 18、流份19 - 32、流 份33 - 35,得到3個(gè)亞組份化.2-1，化.2-2,化.2-3 ;將亞組份化.2-1經(jīng)開放ODS柱色譜， 用體積比60 : 40、體積比65 : 35、體積比70 : 30、體積比75 : 25的甲醇-水作洗脫液 進(jìn)行梯度洗脫，收集體積比60 : 40甲醇-水洗脫液得桃兒屯酬F、收集體積比65 : 35甲 醇-水洗脫液得桃兒屯酬C、收集體積比70 : 30甲醇-水洗脫液得桃兒屯酬D、收集體積 比75 : 25甲醇-水洗脫液得桃兒屯酬G。
[001引 實(shí)施例3
[0016] 本發(fā)明在具體實(shí)施中，具有神經(jīng)保護(hù)作用的異戊締基化黃酬類化合物也可由小葉 蓮8kg為原料，W2化、體積比為85 %的乙醇加熱回流提取3次，提取溫度為92°C，每次提 取時(shí)間為1. 5小時(shí)，減壓回收乙醇，得浸膏狀乙醇提取物，混懸于2.化的蒸饋水中，依次W 石油酸、二氯甲燒、乙酸乙醋、正下醇萃取3次，每次2.化，時(shí)間為1. 5小時(shí)；將乙酸乙醋萃 取部位經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用體積比為100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、 100:70、100:100、100:200、0:100的石油酸-丙酬混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度用 11.化洗脫液，流速為13mLmin1，每450mL為一流份，收集260個(gè)流份，各個(gè)流份經(jīng)硅膠薄 層色譜檢測(cè)分析，用GF254薄層板，分別W體積比1 : 1的石油酸-丙酬和體積比