一種新的貝殼杉烷類二萜化合物及其制備方法和治療肝癌的醫(yī)藥用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及從冬凌草的干燥全草中分離得到的一種具有 治療肝癌作用的貝殼杉燒類二祗化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 冬凌草系唇形科植物碎米啞Rabdosiarubescens化emsl. )Hara的全草，主要分布 在于河南及黃河流域W南。其味甘苦，性微寒。有清熱解毒、消炎止痛，健胃活血等功能，主 要用于咽喉腫痛、扁桃腺炎、蛇蟲咬傷等癥。該植物抗腫瘤作用良好，毒性不明顯，被譽(yù)為 "紫杉醇第二"。
[0003] 冬凌草中含有單祗、二祗、=祗等祗類化合物，此外還含有揮發(fā)油、醬體、黃酬、生 物堿、氨基酸、有機(jī)酸、單糖等成分。二祗類成分是冬凌草的主要成分，主要骨架構(gòu)型包括對 映貝殼杉燒型（ent-kaurane)和螺斷貝殼杉燒型（seco-ent-kaurane)兩大類。
[0004] 抗腫瘤作用是冬凌草最重要藥理作用，冬凌草中的許多二祗類成分對癌細(xì)胞都有 抑制作用，其中最主要抗癌活性成分為冬凌草甲素（0RI)和冬凌草乙素（P0N)，一些多糖類 物質(zhì)也具有抗腫瘤活性。體外實(shí)驗(yàn)表明，冬凌草對20多種腫瘤細(xì)胞等都有較強(qiáng)抑制作用。 冬凌草甲素對小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞引起的致炎作用和神經(jīng)功能素亂有調(diào)節(jié)作用，用脂多糖對大 鼠小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行刺激，結(jié)果發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素可W通過減少NO、TNF-a、IL-1P、IL-6 釋放停止或減輕炎癥反應(yīng)，同時(shí)抑制DM與逆轉(zhuǎn)錄酶因子NF-KB結(jié)合，另外冬凌草甲素對 神經(jīng)營養(yǎng)因子有正調(diào)節(jié)作用。研究還發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素對金黃色葡萄球菌及甲、乙型溶血性 鏈球菌有明顯抗菌作用。冬凌草多糖具有抗腫瘤作用及其免疫活性。冬凌草甲素能明顯清 除黃嚷嶺/黃嚷嶺氧化酶系統(tǒng)產(chǎn)生的超氧自由基W及化nton反應(yīng)中的徑自由基。冬凌草 甲素對多形核白細(xì)胞（PMN)呼吸爆發(fā)時(shí)產(chǎn)生活性自由基同樣顯示明顯清除作用。冬凌草還 具有降壓作用和抗突變作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從冬凌草的干燥全草中分離得到的一種具有治療肝癌 作用的貝殼杉燒類二祗化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得W實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008]
[0009] 所述的化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：(a)將冬凌草的干燥全草 粉碎，用80~90 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋 和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化）步 驟（a)中乙酸乙醋萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用80%乙醇 洗脫8個(gè)柱體積，收集80 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得80 %乙醇洗脫物浸膏；（C)步驟化）中 80 %乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、50:1、35:1、15:1和1:1的二氯 甲燒-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用 體積比為25:1、15:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分 2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫， 收集8~10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0010] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0011] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為85 %。
[0012] 一種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的 載體。
[0013] 所述的化合物（I)在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 W及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物W單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】 陽〇1引圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物（I)理論ECD值與實(shí)驗(yàn)ECD值比較；
[0020] 圖3為化合物（I)對胎pG2及L02細(xì)胞增殖的影響（n= 3)。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。 陽02引實(shí)施例1 :化合物（I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0023] 試劑來源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0024] 制備方法：（a)將冬凌草的干燥全草（8kg)粉碎，用85%乙醇熱回流提?。?^X3 次），合并提取液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油酸（3LX3次）、乙酸乙醋（3LX3次）和 水飽和的正下醇0LX3次）萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（359g)和正下 醇萃取物；化）步驟（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10 %乙醇洗脫6個(gè) 柱體積，再用80 %乙醇洗脫8個(gè)柱體積，收集80 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得80 %乙醇洗脫物 浸膏（138g) ;(c)步驟化）中80%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1(8 個(gè)柱體積）、50:1 (8個(gè)柱體積）、35:1化個(gè)柱體積）、15:1 (8個(gè)柱體積）和1:1巧個(gè)柱體積） 的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4 (32g)用正相硅膠進(jìn)一步 分離，依次用體積比為25:1 (8個(gè)柱體積）、15:1 (10個(gè)柱體積）和5:U6個(gè)柱體積）的二氯 甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分2 (17g)用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I) (29mg)。 陽0巧]結(jié)構(gòu)確證出R-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z401. 1604,結(jié)合核磁特征可得分子式為C20H2607,不飽和度為 8。核磁共振氨譜數(shù)據(jù) 5h(卵m，DMS0-de，400MHz) 32,t，J= 8. 4)，H-2 (2. 43,m)，H-2 (2. 14,m)，H-3 (3. 79,d，J= 4. 4)，H-5 (3. 99,d，J= 3. 3)，H-6 (5. 87， d，J= 3.3)，H-9 (2.22,d，J= 10. 6)，H-11 (4.45,m)，H-12 (2. 61，overlap),H-12 (1.66， m)，H-13 (2.49,m)，H-14 (3.84,m)，H-14 (2. 62,overlap),H-17 (1.49,s)，H-18 (1.27， s)，H-19(1.01，s)，H-20(4. 73,d，J= 9. 2)，H-20(4. 19,d，J= 9. 2)，6-0H(4. 52,s)， 16-0H(4.62,s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù) 5c(卵m，DMS0-de，100Hz) :71.5(CH，1-C)，：M.4(CH2， 2-C)，81. 6 (CH，3-C)，42. 3 (C，4-C)，52. 7 (CH，5-C)，109. 1 (CH，6-C)，171. 2 (C，7-C)，56. 1 (C， 8-C)，54. 0 (CH，9-C)，51. 1 (C，10-C)，64. 2 (CH，11-C)，33. 8 (邸2,12-C)，41. 3 (CH，13-C)， 31. 4(細(xì)2, 14-C)，211. 9(C，15-C)，78. 1 (C，16-C)，19. 0(畑3, 17-C)，20. 8(畑3, 18-C)， 28. 3(邸3，19-〇,76. 1(邸2,20-〇 ;碳原子標(biāo)記參見圖1。"CNMR和DEPT譜顯示20個(gè)碳信 號，包括=個(gè)甲基，四個(gè)亞甲基（一個(gè)含氧亞甲基），屯個(gè)次甲基（四個(gè)含氧次甲基），六個(gè) 季碳（一個(gè)含氧季碳，一個(gè)酬幾基碳W及一個(gè)內(nèi)醋幾基碳）。此外，核磁和質(zhì)譜數(shù)據(jù)表明該 化合物在C-3和C-6位上存在一個(gè)氧橋。HMBC譜中(S肥.43，m; 2. 14，m)，H-6 ( 5冊.87， d，J= 3. 3Hz)，Me-18 ( 5HI. 27,S)與次甲基（5C81. 6);質(zhì)子巧.87,d，J= 3. 3Hz)與 C-1 ( 5C71. 5)，C-10 ( 5C51. 1)和C-20 (SC76. 1)的相關(guān)性驗(yàn)證了上述的推論。HMBC譜中 &-14 ( 5 冊.84 和 2. 62)，H-13 (S肥.49)，&-12 ( 5 肥.61 和 1.66)和Me-17 ( 5m. 49)與含 氧季碳C-16 (S口8. 1)的相關(guān)性表明C-16位上連有一個(gè)徑基。R犯SY譜中H-11 (SH4. 45， m)與H-1 ( 5 冊.32,t，J=8. 4Hz)，H-5 ( 5 冊.99,d，J= 3. 3Hz)和H-14P( 5 肥.62， overlap) ;Me-17 與H-12a(5m.66，m)的相關(guān)性表明H-LH-5 和C-16-0H為P構(gòu)型。綜 合氨譜、碳譜、HMBC譜和R0ESY譜，W及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物 的絕對構(gòu)型依次為15,3私5私6私85,95，105，115，135和165，如圖1所示；立體構(gòu)型進(jìn)一步 通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致（圖2)。
[0026] 實(shí)施例2:化合物（I)藥理