發(fā)菜培養(yǎng)基及其制備方法、發(fā)菜培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種發(fā)菜培養(yǎng)基，以及該培養(yǎng)基的制備方法，同時還涉及一種發(fā)菜培養(yǎng)方法，屬于微藻培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]發(fā)菜，又名地毛、頭發(fā)菜，學(xué)名發(fā)狀念珠藻，是一種陸生絲狀藍(lán)細(xì)菌，因其色黑而細(xì)長，似人的頭發(fā)而得名。在生物分類學(xué)上屬于藍(lán)藻門，藍(lán)藻綱，斷殖藻目，念珠藻科，念珠藻屬。發(fā)菜多生長在荒漠和土壤貧瘠地區(qū)，在我國西北干旱、半干旱地區(qū)均有分布。發(fā)菜口味鮮美，具有極高的營養(yǎng)價值，研究證明發(fā)菜含有豐富的蛋白質(zhì)和人體必需的八種氨基酸，以及各種維生素、礦質(zhì)元素等。發(fā)菜同時也是一味極好的藥材，具有平肝潛陽、清腸止痢的功效，可用于清熱解毒、化痰止咳等。
[0003]多糖是生物體主要的天然高分子化合物，廣泛存在于高等植物、動物細(xì)胞膜和微生物細(xì)胞壁中，在生命活動過程中有重要作用。藻類多糖具有抗病毒活性、抗凝血活性、抗腫瘤活性等。尤其發(fā)菜多糖能夠阻斷病毒對寄主細(xì)胞的吸附，阻止病毒在寄主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，對流感病毒、人巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒HSV-1等多種包膜病毒具有較強(qiáng)的抗病毒活性。
[0004]微波是一種低電磁輻射，具有較強(qiáng)的生物效應(yīng)。微波作用下生物體隨之產(chǎn)生各種生理生化反應(yīng)，能促進(jìn)次生代謝物質(zhì)的生成。目前，微波輻照已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、化學(xué)及食品領(lǐng)域，在提高生物有效代謝產(chǎn)物分泌方面具有廣闊的應(yīng)用前景。但是，微波輻照對發(fā)菜培養(yǎng)及發(fā)菜胞外多糖分泌的影響還鮮有研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種營養(yǎng)豐富且能較好促進(jìn)發(fā)菜細(xì)胞生長及增加胞外多糖分泌量的發(fā)菜培養(yǎng)基。
[0006]同時，本發(fā)明還提供一種發(fā)菜培養(yǎng)基的制備方法，該方法工藝簡單，操作簡便。
[0007]最后，本發(fā)明再提供一種發(fā)菜培養(yǎng)方法，該方法便于控制生理環(huán)境，通過微波輻照促進(jìn)發(fā)菜代謝產(chǎn)物分泌，提高發(fā)菜胞外多糖分泌量。
[0008]為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
[0009]發(fā)菜培養(yǎng)基，每100mL培養(yǎng)基由以下組分組成=NaNO30.7?0.8g，CaCl2.2H2025 ?30mg，MgSO4.7Η20 70 ?80mg，Na2S13.9Η20 55 ?65mg，Κ2ΗΡ0435 ?45mg，Η3Β04280 ?290ng，ZnSO4.7Η20 15 ?25ng，NaMoO4.2Η20 35 ?45ng，EDTA *2Na 90 ?110ng，F(xiàn)eS04.7Η20470 ?490ng，MnCl.4H20 170 ?190ng，CuSO4.5H20 5 ?10ng，CoCl20.5 ?1.5ng，檸檬酸55?65ng，鹿糖10?15mg，維生素BI 90?130mg，維生素B6 90?130mg，余量為水。
[0010]優(yōu)選的，每100mL發(fā)菜培養(yǎng)基由以下組分組成=NaNO30.75g，CaCl2.2Η20 27.2mg，MgSO4.7H20 75mg，Na2S13.9H20 58mg，K2HP0440mg，H3B04286ng，ZnSO4.7H20 20ng，NaMoO4.2H20 40ng，EDTA.2Na lOOng，F(xiàn)eSO4.7H20 480ng，MnCl.4H20 180ng，CuSO4.5H208ng，CoCl2Ing,梓檬酸60ng，鹿糖12mg，維生素BI 10mg,維生素B6 10mg,余量為水。
[0011]各組分作用及組分間協(xié)同作用簡述如下:
[0012]NaNO3的作用主要是為發(fā)菜細(xì)胞生長提供充足的N源，能夠與K2HPO4協(xié)同增強(qiáng)發(fā)菜的光合作用和呼吸作用，蔗糖提供碳源，維持培養(yǎng)液低滲環(huán)境，維生素B1、B6促進(jìn)發(fā)菜細(xì)胞分裂，促進(jìn)發(fā)菜細(xì)胞生長。
[0013]上述培養(yǎng)基的制備方法，步驟如下:
[0014]I)按照配方中組分配比稱取CaCl2.2H20、MgSO4.7H20、蔗糖、維生素BI和維生素B6，溶于水中得母液A備用；
[0015]2)按照配方中組分配比稱取 H3BO4' ZnSO4.7H20、NaMoO4.2H20、EDTA.2Na、FeSO4.7H20、MnCl.4H20、CuSO4.5H20、CoCl2和檸檬酸，溶于水中得母液 B 備用；
[0016]3)按照配方中組分配比稱取NaN03、Na2S13.9H20和K2HPO4,溶于水中得母液C備用；
[0017]4)按照配方量將母液A、母液B混合得混合液，混合液與母液C單獨滅菌，再按照配方量混合、定容，即得。
[0018]發(fā)菜培養(yǎng)方法，步驟如下:將發(fā)菜細(xì)胞接種于上述培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)期，采用微波輻照，即可。
[0019]優(yōu)選的，在溫度22?28 °C下對發(fā)菜細(xì)胞液進(jìn)行微波輻照，微波功率100?140W，頻率2400?2500MHz，輻照時間60?80s，每10?14h輻照一次，共照射18?22次。
[0020]本發(fā)明的有益效果:
[0021]本發(fā)明中發(fā)菜培養(yǎng)基易于配制，顏色清淺，便于觀察發(fā)菜菌落形態(tài)，能夠促進(jìn)發(fā)菜細(xì)胞生長、繁殖，促進(jìn)發(fā)菜增加胞外多糖分泌量。其中，NaNOjg為發(fā)菜細(xì)胞生長提供充足的N源，與1(2即04協(xié)同增強(qiáng)發(fā)菜的光合作用和呼吸作用，蔗糖提供碳源，維持培養(yǎng)液低滲環(huán)境，維生素B1、B6促進(jìn)發(fā)菜細(xì)胞分裂，促進(jìn)發(fā)菜細(xì)胞生長。
[0022]本發(fā)明采用微波輻照技術(shù)培養(yǎng)發(fā)菜，方法簡單、操作簡便，獲得的發(fā)菜細(xì)胞液中含有豐富的胞外多糖。由于胞外多糖是發(fā)菜細(xì)胞通過自身對外界環(huán)境的應(yīng)激反應(yīng)得到的天然代謝物質(zhì)，因而保有天然物質(zhì)的生物活性，可用作保健品中功能性添加劑。
[0023]本發(fā)明采用微波輻照促進(jìn)發(fā)菜細(xì)胞增加胞外多糖分泌量，輻射強(qiáng)度低、時間短，不會對發(fā)菜細(xì)胞產(chǎn)生不利影響，在保證細(xì)胞正常生長的同時還能促進(jìn)胞外多糖分泌量，有助于發(fā)菜細(xì)胞的持續(xù)生長和利用，對降低細(xì)胞死亡率，提高胞外多糖產(chǎn)量具有顯著的促進(jìn)作用。
【附圖說明】
[0024]圖1為試驗例中微波輻照時間對發(fā)菜細(xì)胞液中胞外多糖含量的影響。
【具體實施方式】
[0025]下述實施例僅對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制。
[0026]實施例1
[0027]本實施例中的發(fā)菜培養(yǎng)基，每100mL培養(yǎng)基由以下組分組成=NaNO30.7g，CaCl2.2H20 30mg，MgSO4.7H20 70mg，Na2S13.9H20 65mg，K2HP0435mg，H3B04290ng，ZnSO4.7H20 15ng，NaMoO4.2H20 45ng，EDTA.2Na 90ng，F(xiàn)eSO4.7H20 490ng，MnCl.4H20170ng，CuSO4.5H20 10ng，CoCl20.5ng，梓檬酸 65ng，鹿糖 10mg，維生素 BI 130mg，維生素 B690mg，余量為水。
[0028]發(fā)菜培養(yǎng)基的制備方法，步驟如下:
[0029]I)準(zhǔn)確稱取 CaCl2.2H20 3g，MgSO4.7H20 7g，蔗糖 lg,維生素 BI 13g，維生素 B69g，用蒸餾水溶解后定容至lOOOmL，配制成母液A，常溫保存?zhèn)溆茫?br>[0030]2)準(zhǔn)確稱取 H3B04290mg，ZnSO4.7H20 15mg，NaMoO4.2H20 45mg，EDTA.2Na 90mg，F(xiàn)eSO4.7H20 490mg，MnCl.4H20 170mg，CuSO4.5H20 10mg，CoCl20.5mg，檸檬酸 65mg，用蒸餾水溶解后定容至lOOOmL，配制成母液B，4°C冰箱冷藏備用；
[0031]3)準(zhǔn)確稱取Na2S13.9Η20 6.5g，用蒸餾水溶解后定容至lOOOmL，配制成Si液，常溫保存?zhèn)溆茫?br>[0032]4)準(zhǔn)確稱取K2HP043.5g，用蒸餾水溶解后定容至lOOOmL，配制成P液，常溫保存?zhèn)溆茫?br>[0033]5)移液管準(zhǔn)確吸取A液1mL和B液ImL混合，補足蒸餾水至總體積為450mL，121°C下高溫高壓滅菌30min，得混合液A備用；
[0034]6)移液管準(zhǔn)確吸取Si液1mL和P液1mL混合，加入NaNO3并補足蒸餾水至總體積500mL，使NaNOj^濃度為1.4g/L，121°C下高溫高壓滅菌30min，得混合液B備用；
[0035]7)將混合液A、混合液B混合，用滅菌蒸餾水定容至lOOOmL，即得。
[0036]注:為防止高溫條件下培養(yǎng)基中各組分發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生沉淀，步驟5)、6)單獨滅菌。
[0037]發(fā)菜培養(yǎng)方法，步驟如下:
[0038]I)采集發(fā)菜，分離、純化并活化，接種于上述發(fā)菜培養(yǎng)基中，于25 °C恒溫、80 ymol/mVs光照強(qiáng)度條件下培養(yǎng)至對數(shù)期，得發(fā)菜細(xì)胞液；
[0039]2)打開超凈工作臺的紫外燈，預(yù)熱1min ；
[0040]3)分別取1mL發(fā)菜細(xì)胞液，分裝于直徑90mm的玻璃培養(yǎng)皿中，用保鮮膜封口 ；
[0041]4)在25°C恒溫條件下對發(fā)菜細(xì)胞液進(jìn)行微波輻照，微波功率100W，頻率2400MHz，輻照時間60s，每12h輻照一次，共照射22次，即可。
[0042]實施例2
[0043]本實施例中的發(fā)菜培養(yǎng)基，每100mL培養(yǎng)基由以下組分組成=NaNO30.8g，CaCl2.2H20 25mg，MgSO4.7H20 80mg，Na2S13.9H20 55mg，K2HP0445mg，H3B04280ng，ZnSO4.7H20 25ng，NaMoO4.2H20 35ng，EDTA.2Na llOng，F(xiàn)eSO4.7H20 470ng，MnCl.4H20190ng，CuSO4.5H20 5ng，CoCl2L 5ng，梓檬酸 55ng，鹿糖 15mg，維生素 BI 90mg，維生素 B6130mg，余量為水。
[0044]發(fā)菜培養(yǎng)基的制備方法，步驟如下:
[0045]I)準(zhǔn)確稱取 CaCl2.2H20 2.5g，MgSO4.7H20 8g，蔗糖 1.5g，維生素 BI 9g，維生素B6 13g，用蒸餾水溶解后定容至lOOOmL，配制成母液A，常溫保存?zhèn)溆茫?br>[0046]2)準(zhǔn)確稱取 H3B04280mg，ZnSO4.7H20 25mg，NaMoO4.2H20 35mg，EDTA.2Na 110mg，F(xiàn)eSO4.7H20 470mg，