瘤背石磺肌肉粗蛋白的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品加工領(lǐng)域，具體設(shè)及一種瘤背石橫肌肉粗蛋白的提取方法。
【背景技術(shù)】 陽(yáng)00引瘤背石橫俯ichidiumstruma)在江蘇沿海及上海又名±海參、海癒子、± 雞等，是軟體動(dòng)物口（Mollusc)腹足綱（Gastropoda)肺螺亞綱（Pulmonata)縮眼目 (Stylommato地ora)石橫科俯ichidiidae)的一種生物。瘤背石橫的身體表面分布著許多 瘤狀突起，背部中間有一背眼，可W自由的伸縮，觸角頂端的眼沒(méi)有感光作用，是一種介于 海洋和陸地之間的過(guò)渡帶海洋軟體動(dòng)物。
[0003] 瘤背石橫的肌肉粗蛋白是瘤背石橫中的有效活性成分之一，瘤背石橫的活體肌肉 中含有7種人體必需氨基酸。腹足和外套膜是瘤背石橫的可食部分，兩者肌肉中的谷氨酸 和甘氨酸的比例為6. 51 %和4. 77,同時(shí)還含有鐵、巧、儘、侶等礦物質(zhì)，W及維生素B1、B2 等，與一般的植物蛋白相比更容易消化、吸收和利用，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值也相對(duì)較高，具有抗氧化，抗 腫瘤，降血壓，調(diào)節(jié)免疫等功能。在食品，保健品和藥品等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。
[0004] 通過(guò)對(duì)現(xiàn)有文獻(xiàn)的檢索發(fā)現(xiàn)，申請(qǐng)?zhí)枮?01310516990.X的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)公 開(kāi)了一種采用瘤背石橫酶解提取蛋白多膚的方法。首先將干品瘤背石橫粉碎后按比例加入 蒸饋水浸泡制成料液；然后調(diào)節(jié)料液的抑值并按比例加入木瓜蛋白酶攬拌均勻；接著上述 料液加溫至50~60°C水解蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)水解后升溫進(jìn)行滅酶，自然冷卻至室溫后放入高 速離屯、機(jī)離屯、獲得上清液，并按比例加入粉末活性炭攬勻后加溫至50~60°C，保溫一段時(shí) 間后過(guò)濾去除粉末活性炭；接下來(lái)按比例加入P-環(huán)狀糊精攬勻后升溫至65~70°C后保 溫，自然冷卻至室溫即獲得液態(tài)蛋白多膚；將液態(tài)蛋白多膚采用真空低溫濃縮并真空冷凍 干燥后即制得蛋白多膚成品。然而，該方法中步驟繁瑣，在操作過(guò)程中會(huì)對(duì)瘤背石橫中的蛋 白含量和活性造成損失；酶解時(shí)間巧~lOh)過(guò)長(zhǎng)，成本偏高、蛋白酶解率欠佳的同時(shí)還容 易造成蛋白的損失。并且，該發(fā)明專利申請(qǐng)中并未明確指出究竟酶解的是瘤背石橫內(nèi)臟還 是肌肉蛋白，而根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)調(diào)查顯示，瘤背石橫肌肉蛋白和內(nèi)臟蛋白所含成分是不同的， 因此很有必要分別對(duì)兩者進(jìn)行一些研究，而根據(jù)（黃金田，瘤背石橫營(yíng)養(yǎng)成分分析及品質(zhì) 評(píng)價(jià)）文獻(xiàn)，瘤背石橫肌肉中含有大量氨基酸和蛋白質(zhì)，因此對(duì)肌肉蛋白的研究是很有必 要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供了一種瘤背石橫肌肉粗蛋 白的提取方法。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過(guò)W下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 本發(fā)明設(shè)及一種瘤背石橫肌肉粗蛋白提取方法，所述方法包括如下步驟：
[0008] S1、樣品預(yù)處理：將瘤背石橫致死后解剖，取出內(nèi)臟，用蒸饋水洗凈剩余部分后攬 碎，加入石油酸浸泡去脂，過(guò)濾后加入無(wú)水乙醇浸泡去除石油酸，過(guò)濾洗凈后放入烘箱烘干 至干粉狀，得干粉樣品；
[0009] S2、肌肉酶解：按照80~100血?g1的固液比，在所述干粉樣品中加入蒸饋水，調(diào) 節(jié)抑值為8. 5~9. 5,加入由膜蛋白酶和中性蛋白酶組成的復(fù)合蛋白酶水浴反應(yīng)1~化， 所述水浴反應(yīng)的溫度為40~50°C;在高溫下滅活，冷卻，離屯、后去除沉淀物，取上清液，冷 凍干燥，即得所述瘤背石橫肌肉粗蛋白。
[0010] 在本發(fā)明中，水浴反應(yīng)時(shí)間為1~3h。運(yùn)是由于根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)顯示，在本發(fā)明酶 解過(guò)程中，最佳時(shí)間為化，而超過(guò)化后酶解效果開(kāi)始下降，部分酶開(kāi)始失活。
[0011] 優(yōu)選的，步驟S1中，所述瘤背石橫為產(chǎn)自上海崇明濕地的瘤背石橫。
[0012] 優(yōu)選的，步驟S1中，所述蒸饋水的溫度為4~8°C;所述石油酸浸泡去脂的時(shí)間為 6~lOh，所述無(wú)水乙醇浸泡去除石油酸的時(shí)間為4~化，所述烘干時(shí)間為10~15h。發(fā)明 人發(fā)現(xiàn)，未經(jīng)去脂處理的瘤背石橫干粉的粘度較大，會(huì)影響瘤背石橫干粉的酶解過(guò)程，本發(fā) 明通過(guò)石油酸有效的去除瘤背石橫肌肉中的脂質(zhì)，并通過(guò)無(wú)水乙醇去除石油酸，提高了酶 解率。
[0013]優(yōu)選的，步驟S2中，所述抑值是通過(guò)氨氧化鋼溶液和/或稀鹽酸溶液來(lái)進(jìn)行調(diào)節(jié) 的。
[0014]優(yōu)選的，步驟S2中，所述滅活溫度為90~100°C;所述滅活時(shí)間為10~20min。
[0015]優(yōu)選的，步驟S2中，所述離屯、速度為3000~4000r?min1;所述離屯、的時(shí)間為10~20min。
[0016] 優(yōu)選的，步驟S2中，每Ig所述樣品干粉對(duì)應(yīng)的復(fù)合蛋白酶的用量為0.08g~ 0.lOgo
[0017]優(yōu)選的，所述復(fù)合蛋白酶中膜蛋白酶和中性蛋白酶的質(zhì)量比為1 : 2。采用該比例 的復(fù)合蛋白酶時(shí)酶解效果最佳。
[001引優(yōu)選的，所述水浴反應(yīng)過(guò)程中不斷調(diào)節(jié)溶液的抑值為8. 5~9. 5。所述抑值是通 過(guò)氨氧化鋼溶液和/或稀鹽酸溶液來(lái)進(jìn)行調(diào)節(jié)的。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)實(shí)際操作中反應(yīng)液的抑會(huì) 隨著反應(yīng)的進(jìn)行而變化，從而對(duì)酶的水解造成損失，甚至造成酶的失活，因此本發(fā)明在反應(yīng) 過(guò)程中通過(guò)氨氧化鋼和稀鹽酸對(duì)反應(yīng)溶液的抑進(jìn)行控制，維持抑的穩(wěn)定。
[0019] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：
[0020] 1、本發(fā)明利用復(fù)合酶解法提取瘤背石橫肌肉的粗蛋白，雙酶之間的酶切位點(diǎn)相互 互補(bǔ)，運(yùn)樣間接增加了酶切特異位點(diǎn)，從而提高酶解效率；與其他方法相比，本發(fā)明的酶解 法還具有過(guò)程條件易控制、條件溫和、成本低、效率高等優(yōu)點(diǎn)。
[0021] 2、利用本發(fā)明的方法得到的粗蛋白更加易于分離純化，提取率較高，且提取的瘤 背石橫肌肉蛋白具有抗氧化，抗腫瘤，調(diào)節(jié)免疫功能等作用，具有很高的應(yīng)用價(jià)值和良好的 市場(chǎng)開(kāi)發(fā)前景。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。W下實(shí)施例將有助于本領(lǐng)域的技術(shù)人員 進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不W任何形式限制本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員 來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可W做出若干調(diào)整和改進(jìn)。運(yùn)些都屬于本發(fā)明的保 護(hù)范圍。 陽(yáng)似]連施倆11
[0024] 本實(shí)施例設(shè)及一種瘤背石橫肌肉粗蛋白的提取方法；具體包括如下步驟：
[00巧]用4°C蒸饋水洗凈解剖后的瘤背石橫肌肉組織，并加入石油酸浸泡化去脂，過(guò)濾 后加入無(wú)水乙醇浸泡地，過(guò)濾放入烘箱中烘干lOh。稱取Ig瘤背石橫肌肉干粉，置于250mL S角燒瓶中，加入80血蒸饋水，攬拌均勻后，通過(guò)0.Imol?L1的化OH和0.Imol?L1的 肥1調(diào)整溶液抑至8. 5,按照加酶量8% (即Ig干粉對(duì)應(yīng)的復(fù)合蛋白酶的用量為0. 08g)加 入復(fù)合蛋白酶（酶比例，即膜蛋白酶和中性蛋白酶的質(zhì)量比為1 : 2)，將反應(yīng)液放入水浴 鍋中，調(diào)節(jié)水浴鍋溫度為40°C，保持溶液水浴反應(yīng)比，反應(yīng)過(guò)程中不斷通過(guò)0.Imol?L1的 化0H和0.Imol?L1的肥1維持溶液抑為8. 5。反應(yīng)結(jié)束后將水浴鍋溫度設(shè)定為90°C，滅 活lOmin，冷卻后，將溶液分別裝入10ml離屯、管中，放入離屯、機(jī)中，在3000r?min1的轉(zhuǎn)速 下離lOmin，離屯、后收集上清液，冷凍干燥，即得瘤背石橫肌肉粗蛋白。整個(gè)工藝流程操作漸 變，綠色高效，獲得的瘤背石橫肌肉粗蛋白具有良好的活性。