酸性測試
[0050] 作為實驗對象的酵母，準備GYK-10和GYK-11，以及作為其親本菌株的NBRC 10055 和 SDT。
[0051] 用YPD液體培養(yǎng)基ImL (30°C，一晚，120rpm)預培養(yǎng)酵母細胞后，用滅菌水ImL洗 凈2次。洗凈細胞以濃度為I X IO6細胞/mL的方式添加到YH)液體體培養(yǎng)基。將YH)細 胞懸浮液100微升添加到微量滴定板的孔中進行總體培養(yǎng)，每隔10分鐘測定600nm的吸光 度。600nm的吸光度使用"讀板儀HiTS-S2"（SCINICS CORPORATION制造）進行測定。
[0052] 此時，作為酵母的耐熱性實驗，將YH)細胞懸浮液的溫度調(diào)節(jié)為30°C、37°C或40°C 進行培養(yǎng)。將結果示于圖6。
[0053] GYK-10和GYK-Il的耐熱性弱于作為親本菌株的SDT，但強于NBRC 10055。GYK-10 和GYK-Il的耐熱性沒有明顯差異。
[0054] 此外，作為酵母的耐酸性實驗，使用YPD (pH 6. 5)、YPD (pH 2. 0)或YPD (pH 3. 0)液 體培養(yǎng)基在30°C下進行培養(yǎng)。將結果示于圖7中。
[0055] GYK-10和GYK-Il在pH2. 0的YPD中可以生長，且耐酸性強于作為親本菌株的SDT 和 NBRC 10055。
[0056] 蔗糖和乙醇的制造方法
[0057] 可以在例如專利文獻1描述的蔗糖和乙醇的制造方法中使用本發(fā)明的蔗糖非同 化性凝集性酵母。即，首先使用本發(fā)明的蔗糖非同化性凝集性酵母使源自植物的糖液發(fā)酵。 用作糖液的原料的植物只要是儲存糖分的植物即可，通?？闪信e甘蔗和甜菜等實例。糖液 也可以是所述植物的榨汁和煮汁等。進而，在糖液中添加本發(fā)明的蔗糖非同化性凝集性酵 母，在厭氧條件下，在給定的溫度下進行適當時間的乙醇發(fā)酵。
[0058] 作為用于使糖液乙醇發(fā)酵的本發(fā)明的蔗糖非同化性凝集性酵母，可以使用GYK-10 或GYK-Il中任一者。此外，可以共用兩者。在一個優(yōu)選的實施方案中，使用GYK-10。GYK-10 的凝集性優(yōu)異，容易從乙醇發(fā)酵后的糖液中去除酵母。
[0059] 本發(fā)明的蔗糖非同化性凝集性酵母具有優(yōu)異的耐熱性，在高達約37°C的溫度，可 以進行發(fā)酵。進行乙醇發(fā)酵的優(yōu)選溫度是35°C以上，其可以減少冷卻設備的成本，并且本發(fā) 明的蔗糖非同化性酵母可使用低成本的設備進行發(fā)酵。
[0060] 通過在進行乙醇發(fā)酵前去除糖液中所含的非糖成分，可以將糖液澄清化。通過上 述操作，糖液中所含雜質(zhì)減少，酵母的反復利用變得容易。本發(fā)明的蔗糖非同化性凝集性酵 母具有凝集能力，發(fā)酵槽中始終存在凝集性酵母并且不分離酵母連續(xù)地進行發(fā)酵的有效的 發(fā)酵方法成為可能。
[0061] 發(fā)酵的結果所得發(fā)酵液中含有酵母、乙醇、水、蔗糖、礦物質(zhì)、氨基酸等。接著，濃縮 發(fā)酵液體，并從所述發(fā)酵液體回收乙醇。
[0062] 可以用本領域技術人員已知的方法進行從發(fā)酵液體回收乙醇，且所述方法是，例 如，通過蒸餾的乙醇分離。當進行通過蒸餾的乙醇分離時，同時將糖液濃縮。因此在糖制造 中無需再進行加熱濃縮，時間和能量均可節(jié)約。
[0063] 從發(fā)酵液體制造糖可用本領域技術人員已知的方法進行，例如可列舉將糖結晶化 等方法。具體而言，將通過發(fā)酵的糖液少量（0.5-1 kl)地在真空抽吸下重復加熱濃縮，取 出一定大小以上的糖結晶，進而利用離心分離機分離為糖結晶和糖液。
[0064] 從糖結晶中分離的糖液通常稱為糖蜜。糖蜜可適量混合在凈化液中而在此用作發(fā) 酵原料。如此，包含在糖液中的糖成分的利用效率進一步提高。 實施例
[0065] 通過以下實施例進一步具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限定于以下實施例。
[0066] 1)發(fā)酵測試
[0067] 用YPD體培養(yǎng)基5L(1LX 5, 30°C，一晚，IOOrpm)預培養(yǎng)酵母細胞（GYK-10)后，用 100L的4%葡萄糖和3%酵母提取物（100L，30°C，一晚，通氣攪拌）進行總體培養(yǎng)。培養(yǎng)完 成后，停止通氣攪拌并回收5. 5kg的凝集沉淀酵母。
[0068] 模擬甘蔗的榨汁而調(diào)整以黑糖、葡萄糖、果糖為原料的培養(yǎng)基（Brix 15%、蔗糖 9. 9%、葡萄糖2. 7%、果糖2.8% )后，添加5. 5kg的酵母，進行發(fā)酵（30°C，4小時）。發(fā)酵 結束后停止攪拌，使酵母凝集沉淀。之后，回收上部發(fā)酵液，通過離心分離機去除微量殘存 酵母，獲得澄清液。
[0069] 所述澄清發(fā)酵液體中蔗糖、葡萄糖和果糖的濃度通過液相層析法測定。管柱使用 SCR-101N(SHIMADZU CORPORATION制造），流動相使用水，管柱烘箱的溫度設定為60°C。將 結果示于表2。
[0070]表 2
[0072] 如發(fā)酵測試所示，GYK-10在糖液的發(fā)酵過程中凝集、沉淀。此外，GYK-10沒有將蔗 糖同化，而選擇性地將還原糖同化。
[0073] 2)糖制造測試
[0074] 將發(fā)酵測試中獲得的糖液減壓濃縮，獲得Brix 60%的濃縮液。將濃縮液（Brix 60%，IOkg)減壓加熱后，添加作為籽晶的粒徑250 μ m的蔗糖lkg?；旌衔镞M一步進行減壓 加熱而使結晶成長。將經(jīng)結晶化的糖和糖液的混合物利用0. 35X4mm有孔型離心分離機進 行離心分離1500Xg、5分鐘，而回收糖。蔗糖的回收率為59.4%。將所述方法的物質(zhì)收支 示于圖8。
[0075] 作為對照，使用未進行選擇性發(fā)酵的糖液（Brix 15%、蔗糖9. 9%、葡萄糖2. 7%、 果糖2. 8%)代替經(jīng)澄清化的發(fā)酵液，用相同的方式回收蔗糖。蔗糖的回收率是43. 6%。所 述方法的物質(zhì)收支示于圖9。
[0076] 如糖制造實驗所示，糖液的選擇性發(fā)酵提高了蔗糖的回收效率。
[0077][保藏編號]
[0078] 釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)GYK-10 菌株于 2013 年4 月 11 日保藏于獨 立行政法人制品評價技術基礎機構專利微生物保藏中心（Incorporated Administrative Agency National Institute of Technology and Evaluation Patent Microorganisms Depositary)，其位于 #122, 2_5_8 Kazusakamatari，Kisarazu_shi，Chiba 292-0818,日本， 并給予保藏編號"NITE BP-1587"。
[0079] 釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)GYK-11 菌株于 2013 年 4 月 11 日 保藏于獨立行政法人制品評價技術基礎機構專利微生物保藏中心，其位于# 122， 2-5_8Kazusakamatari，Kisarazu-shi，Chiba 292-0818，日本，并給予保藏編號"NITE BP-1588"。
[0080] 釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae) SDT 菌株于 2013 年 4 月 11 日 保藏于獨立行政法人制品評價技術基礎機構專利微生物保藏中心，其位于# 122， 2-5_8Kazusakamatari，Kisarazu-shi，Chiba 292-0818，日本，并給予保藏編號"NITE BP-1589"。
【主權項】
1. 一種酵母菌株，其以保藏編號NITEBP-1587表示。2. -種酵母菌株，其以保藏編號NITEBP-1588表示。3. -種使用權利要求1或2的酵母菌株制造糖和乙醇的方法。
【專利摘要】本發(fā)明的一個目的是提供具有凝集能力和經(jīng)證明食品制造性能豐富的蔗糖非同化性酵母。本發(fā)明涉及以保藏編號：NITE？BP-1587表示的酵母菌株。NITE BP-158720130411
【IPC分類】C12R1/865, C12P19/00, C12P7/06, C12N1/18
【公開號】CN105209599
【申請?zhí)枴緾N201480025447
【發(fā)明人】增田隆之, 加藤拓
【申請人】朝日集團控股株式會社
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2014年4月30日
【公告號】EP2994546A1, US20160108438, WO2014181848A1