一種從藤椒中提取麻味物質(zhì)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種從藤椒中提取麻味物質(zhì)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 藤椒，學(xué)名為竹葉花椒，系蕓香科花椒屬植物?；ń分饕植荚趤喼?、非洲、美洲及 大洋洲的熱帶和亞熱帶地區(qū)。我國是花椒種植大國，全國花椒種植面積約21萬公頃，四川、 貴州、云南、寧夏、陜西、甘肅、河南、河北、山東、迂寧等省都有出產(chǎn)。四川漢源、金陽、茂議， 重慶江津，山東泰安、萊憲，陜西韓城等都是全國著名的花椒種植基地。藤椒中含有多種活 性成分，如多不飽和酷胺、精油、生物堿、木質(zhì)素、多糖等，賦予藤椒抗氧化、抗癌、抑菌、抗衰 老、止癢等特征活性。在藤椒的應(yīng)用中，最重要的仍然是它的風(fēng)味，由多不飽和酷胺引起的 強(qiáng)烈的麻味是藤椒能成為中國"八大味"之一的重要品質(zhì)指標(biāo)。
[0003] 藤椒中的麻味是由酷胺類物質(zhì)（麻味物質(zhì)）引起的，研究表明運(yùn)些物質(zhì)包括a-山 椒素、徑基-a-山椒素、0-山椒素、徑基-0-山椒素、丫-山椒素、徑基-丫-山椒素、徑 基-e-山椒素、徑基-丫-異山椒素、花椒素、異花椒素等，運(yùn)些物質(zhì)是不溶于水而溶于有機(jī) 溶劑的。尋找一種最佳的麻味物質(zhì)提取方法具有重大的科學(xué)意義和工程應(yīng)用價值： 首先，藤椒中的麻味物質(zhì)具有熱不穩(wěn)定性、對紫外線敏感W及膽藏過程中容易發(fā)生降 解等性質(zhì)。因此，藤椒的麻味在膽藏和開發(fā)產(chǎn)品的過程中極易被破壞，從而失去其特殊的 香麻風(fēng)味。如果能有效的提取藤椒中的麻味物質(zhì)，它將作為一種天然麻味提取物應(yīng)用到食 品工業(yè)的各個領(lǐng)域；其次，在科學(xué)研究中，麻味物質(zhì)及其單體是重要的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用來定量 藤椒的麻味大小，評價藤椒的品質(zhì)。再次，由于藤椒作為一種天然產(chǎn)物，其具有的麻味引起 的神經(jīng)電位反應(yīng)是國內(nèi)外眾多科學(xué)家研究的重點，純度較高的麻味物質(zhì)是進(jìn)行細(xì)胞和分子 實驗的重要材料；最后，由于藤椒中的麻味物質(zhì)具有多種生物活性，包括抗氧化、抗癌、降血 糖、抗炎等，因此，將其分離出來可作為天然功能性物質(zhì)應(yīng)用到食品和化妝品領(lǐng)域。綜上所 述，研究出一種有效提取藤椒中麻味物質(zhì)的方法將是食品科學(xué)與工程及化妝品行業(yè)未來發(fā) 展的趨勢。為此，一些科技工作者也做過嘗試，現(xiàn)已公開的報道有： CN102771747B公開了一種提取花椒油麻味物質(zhì)的方法，本發(fā)明設(shè)及一種提取花椒油 麻味物質(zhì)的方法，該方法包括如下步驟：準(zhǔn)確稱取0.Ig花椒油于IOmL容量瓶中，用無水甲 醇定容至刻度，搖勻，30°C下浸提地，冷卻后，轉(zhuǎn)入IOmL刻度離屯、試管中，離屯、，取上清液 0. 1血于10血容量瓶中，用無水甲醇定容至刻度，搖勻，經(jīng)0. 2ym濾膜過濾后即為待測液， 將待測液進(jìn)行半制備型高效液相色譜法分離，進(jìn)行饋分收集，饋分收集器收集開始時間為 9.Omin,結(jié)束時間為11. 6min，收集饋分收集器的流出液，多次進(jìn)樣后，合并流出液，濃縮去 除溶劑，得到花椒油麻味物質(zhì)。本發(fā)明提供了一種制備花椒油麻味物質(zhì)的方法，操作步驟簡 單，且設(shè)備要求不高。
[0004] CN102690208B公開了一種從花椒油中提取徑基山椒素的方法，本發(fā)明公開的一種 從花椒油中提取徑基山椒素的方法，其工藝步驟是：1)將花椒油用甲醇依次進(jìn)行室溫浸提、 離屯、分離、層析除多酪、冷凍、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得濃縮物；2)先將濃縮物用甲醇溶解后，用硅膠柱進(jìn) 行梯度洗脫并等份收集洗脫液，再將薄層層析法初步確定的目標(biāo)物所在的洗脫液進(jìn)行濃縮 干燥；3)將所得濃縮物用制備型液相色譜進(jìn)行細(xì)分純化，并分別收集兩個最大吸收峰的洗 脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)即得徑基山椒素I和II。本發(fā)明提供的方法不僅填補(bǔ)了現(xiàn)有技術(shù)的空 白，為該領(lǐng)域提供了一種可作為花椒麻味定量的標(biāo)準(zhǔn)品，且前處理簡單、操作方便，分離提 純的分離物純度高。
[0005]上述公開的發(fā)明雖然對提取麻味物質(zhì)進(jìn)行了一定程度的探索，但是其存在的技術(shù) 缺陷較為明顯。首先是運(yùn)些方法的提取對象是花椒油，而不是干花椒或者鮮花椒?；ń酚妥?為一種花椒深加工產(chǎn)品目前已經(jīng)常見于市場，從花椒油中提取麻味物質(zhì)是一種間接方法， 其逃避了該領(lǐng)域的難點，沒有從根本上解決問題；其次，運(yùn)些方法提取出的麻味物質(zhì)純度較 低，不能作為神經(jīng)科學(xué)W及風(fēng)味化學(xué)研究的材料，無法滿足科學(xué)工作者的需要，也無法發(fā)揮 其較好的生物活性，將其應(yīng)用到食品和化妝品工業(yè)中；最后，運(yùn)些方法沒有分離出麻味物質(zhì) 單體，都是包含了多種分子的混合物，因此也就不能評價花椒風(fēng)味的濃郁程度，即"麻"的程 度，也不能作為標(biāo)準(zhǔn)物為其他酷胺類物質(zhì)定量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，所要解決的技術(shù)問題是提供一種 從藤椒中提取麻味物質(zhì)的方法。該方法W干藤椒或鮮藤椒為原料，采用先進(jìn)的分離純化技 術(shù)得到了純度高的麻味物質(zhì)單體，能夠滿足多種需求。
[0007] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下： 一種從藤椒中提取麻味物質(zhì)的方法包括W下步驟： (1) 對藤椒進(jìn)行乙醇回流萃取或進(jìn)行C〇2超臨界萃取，得萃取液； (2) 對萃取液進(jìn)行柱層析，然后進(jìn)行洗脫，得洗脫物； (3) 對洗脫物用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)，得到粗提物； (4) 對粗提物W甲醇為洗脫劑，經(jīng)制備型HPLC分離，分別得到11種麻味物質(zhì)單體提取 物； (5) 另取步驟（1)中所得乙醇回流萃取液離屯、分離得上清液，然后經(jīng)交聯(lián)葡聚糖LH-20 柱用甲醇純化后得到第12種麻味物質(zhì)單體提取物； (6) 將上述12種麻味物質(zhì)單體提取物分別經(jīng)過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)，移除溶劑及其他 雜質(zhì)，分別得到12種麻味物質(zhì)單體；然后將運(yùn)12種麻味物質(zhì)單體懸浮于水中，經(jīng)真空移除 揮發(fā)物，冷凍干燥后分別得到12種粉末狀麻味物質(zhì)單體，真空分別包裝后避光保存。
[0008] 所述步驟（1)中乙醇回流萃取方法可W為： (1) 將干燥后的藤椒葉去掉葉柄，果實去巧，采用小型電動粉碎機(jī)粉碎，過40目篩網(wǎng)， 得干藤椒粉密封避光冷藏備用； (2) 取干藤椒粉用體積濃度95%的乙醇按料液比1:5-10回流萃取1~3個小時，得到萃 取液。
[0009] 所述步驟（1)中C〇2超臨界萃取方法可W為： (1) 將干藤椒或鮮藤椒進(jìn)行C〇2超臨界萃取，得到初級萃取液； (2) 將初級萃取液在2500巧m條件下離屯、5min得到上清液即為萃取液。
[0010] 所述步驟（2)的柱層析方法可W為： 取萃取液進(jìn)行硅膠柱層析，用6個梯度的氯仿-甲醇混合液進(jìn)行洗脫，依次得到6個洗 脫物，命名為化.1，化.2,化.3,化.4,化.5,化.6 ; 將洗脫物化.2再次進(jìn)行硅膠柱層析，用苯-正己燒-丙酬為洗脫劑洗脫，得到洗脫物fr. 2. 1; 將洗脫物化.2. 1過ODS柱并用甲醇洗脫，得到洗脫物化.2. 1. 1。
[0011] 所述6個梯度的氯仿-甲醇混合液中的氯仿、甲醇體積比分別為：10:1 ;5:1 ; 10:3 ;5:2 ;2:1 ;5:3。
[0012] 所苯-正己燒-丙酬為洗脫劑中苯、正己燒、丙酬的體積比為5:2:1或5:3:2或6 : 3:1。
[001引所述步驟（3)為50。C條件下減壓蒸發(fā)2~3小時 所述制備型HPLC分離條件為： 色譜柱：0DS-425化（010X250mm, 5化），流速為1.5血/min;柱溫25°C;紫外檢測 波長270nm;進(jìn)樣量：200化；甲醇-水溶液梯度洗脫，30min;手動收集最大吸收峰的洗脫 液。
[0014] 所述步驟（4)中11種麻味物質(zhì)單體為：徑基-a-山椒素、 徑基-e-山椒素、徑基-丫-山椒素、徑基-丫-異山椒素、花椒素、異花椒素、a-山椒 素、0-山椒素、丫-山椒素、徑基-e-山椒素、脫氨-丫-山椒素；步驟（5)中第12種麻味 物質(zhì)單體為：多氨花椒素。
[0015]本發(fā)明提供的一種從藤椒中提取麻味物質(zhì)的方法采用了合適的有機(jī)溶劑與合理 的純化手段，不僅得率高，而且分離出了 12種麻味物質(zhì)單體，單體純度高達(dá)98%W上，可作 為神經(jīng)科學(xué)實驗的材料W及化妝品行業(yè)的功能性添加物。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如 下優(yōu)勢： 1、由于本發(fā)明提供的一種從藤椒中提取麻味物質(zhì)的方法選用了氯仿-甲醇運(yùn)一有機(jī) 溶劑組合按照不同比例進(jìn)行梯度洗脫，結(jié)合硅膠柱層析分離得到了 6個組分，極大的降低 了篩選麻味物質(zhì)的時間，提高了分離效率的同時也為后續(xù)純化步驟奠定了基礎(chǔ)。
[0016]2、由于本發(fā)明提供的一種從藤椒中提取麻味物質(zhì)的方法對不同組分的物質(zhì)采用 了不同的純化方法，分別使用了不同質(zhì)量的硅膠柱層析、ODS柱層析W及交聯(lián)葡聚糖LH-20 柱層析，使得極性不同的目標(biāo)物質(zhì)(麻味物質(zhì))高效分離，最終成功獲得12種麻味物質(zhì)單體。 解決了長期W來分離單體困難、所得單體種類少的技術(shù)難題。
[0017]3、由于本發(fā)明提供的一種從藤椒中提取麻味物質(zhì)的方法在對不同組分使用不同 柱層析的基礎(chǔ)上又增加了移除溶劑及其他雜質(zhì)、單體懸浮于水、高真空移除揮發(fā)物等技術(shù) 純化所得麻味物質(zhì)單體，去除了與麻味物質(zhì)結(jié)合緊密的香味成分，進(jìn)一步提高了麻味物質(zhì) 的純度。
[0018]4、由于本發(fā)明提供的一種從藤椒中提取麻味物質(zhì)的方法對純化后的麻味物質(zhì)單 體采用了冷凍干燥兩次的操作，得到了粉末狀的麻味物質(zhì)，運(yùn)一狀態(tài)不僅方便運(yùn)輸與再利 用，而且能夠最好的保持麻味物質(zhì)的穩(wěn)定性，解決了麻味物質(zhì)膽藏過程中極易降解運(yùn)一難 題。
[0019]5、由于本發(fā)明提供的一種從藤椒中提取麻味物質(zhì)的方法采用不同質(zhì)量濃度的甲 醇在制備型HPLC中作為流動相，成功得到了 11種麻味物質(zhì)單體，并且每種單體的得率較 高，解決了使用制備型HPLC時經(jīng)常由于流動相選擇不當(dāng)導(dǎo)致的目標(biāo)物質(zhì)得率低的難題。
【具體實施方式】
[0020] 下面通過實施例對本發(fā)明進(jìn)行具體的描述，有必要在此指出的是W下實施例只用 于對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明，不能理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。該領(lǐng)域的技術(shù)熟練人 員可W根據(jù)上述本發(fā)明的內(nèi)容，對本發(fā)明做出一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整。 實施例
[0021] 從藤椒中提取麻味物質(zhì)的方法： (1) 原料預(yù)處理： 將干燥后的藤椒葉去掉葉柄，果實去巧，采用小型電動粉碎機(jī)粉碎，過40目篩網(wǎng)，得干 藤椒粉密封避光冷藏備用；取干藤椒粉用體積濃度95%的乙醇按料液質(zhì)量比1:5-10回流萃 取1~3個小時，得到萃取液； 或 a將干藤椒或鮮藤椒進(jìn)行C〇2超臨界萃取，得到初級萃取液；b將初級萃取液在2500rpm條件下離屯、5min得到上清液即為萃取液； (2) 取上述萃取液50g進(jìn)行硅膠柱層析，硅膠用量lOOOg，分別用6個梯度的氯仿-甲 醇混合液進(jìn)行洗脫，依次得到6個洗脫物，命名為化.1，化.2,化.3,化.4,化.5,化.6 ;6個 梯度的氯仿-甲醇混合液中的氯仿、甲醇體積比分別為：10:1 ;5:1 ;10:3 ;5:2 ;2:1 ;5:3 ; (3) 將洗脫物化.2再次進(jìn)行硅膠柱層析，硅膠用量250g，用體積比為5:2:1的苯-正 己燒-丙酬為洗脫劑，得到洗脫物化.2.