姜黃素類化合物及其提取方法和抗肝纖維化的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及從中藥姜黃中分離的有效成分，具體為姜黃素類化合物及其提取方法 和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 姜黃化rcuma longa來(lái)自姜科姜黃屬植物。在傳統(tǒng)中醫(yī)理論中，其干燥根莖被稱 為中藥"姜黃"，用W行氣解郁。姜黃的化合成分已被廣泛研究，研究表明姜黃富含姜黃類色 素和倍半祗類化合物。但是目前尚未對(duì)姜黃所含的有效物質(zhì)進(jìn)行充分的提取和應(yīng)用研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 針對(duì)上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種提取方法W及對(duì)所得的提取物進(jìn)行確定和應(yīng) 用，具體的技術(shù)方案為：
[0004] 姜黃素類化合物的提取方法，包括W下步驟：
[000引 （1) 5kg干燥的姜黃根莖經(jīng)過(guò)粉碎后，用甲醇提取3次，分別為，第1次用64升甲醇 提取3小時(shí)，第2次用48升甲醇提取2小時(shí)，第3次用32升甲醇提取2小時(shí)，最終得到提 取物浸膏812g;
[000引 似將浸膏W水溶解，置于水和乙酸乙醋中萃取分層，得到乙酸乙醋層600g;
[0007] (3)將乙酸乙醋層600g通過(guò)硅膠柱用不同比例的氯仿：甲醇溶劑分段梯度洗脫， 氯仿與甲醇體積比例為從90:10至5:95 ;依次得到10個(gè)饋分，編號(hào)為饋分1~饋分10 ;選 取6. 5g的饋分3進(jìn)一步由0DS反相柱分離，0DS反相柱分離使用的甲醇：水體積比分別為 40:60、55:45、60:40、75:25、95:5,依次得到編號(hào)饋分3-1~饋分3-5的5個(gè)饋分，其中饋分 3-4 為 1.5g，饋分 3-5 為Ig;
[0008] (4)饋分3-4和饋分3-5進(jìn)一步通過(guò)Se地adex LH-20甲醇凝膠反復(fù)除去色素得到 400mg饋分3-4-3 ;
[0009] (5)饋分3-4-3進(jìn)一步W半制備液相色譜進(jìn)行制備，Agilent 1200 HPLC Series; YMC ODS-A column, 5μηι, 10X250mm,4。日1:〇]1；[付;[16/!120作為洗脫相，分別得到^種姜黃素 類化合物的單體純品，包括：40mg姜祗素A, Acetonitrile/HzO洗脫比例：50:50, 3血/min, 出峰時(shí)間1：[；=125111；[]1;1〇1]^姜祗素8,4。61:〇]1；[付;[16/!120洗脫比例：50:50,3血/111；[]1,出峰 時(shí)間tR=llOmin ;10mg姜祗素C,Acetonit;rile/H2〇洗脫比例：50:50,3mL/min,出峰時(shí)間 ?κ= 140min。
[0010] 其中，姜祗素A, curcubis油olin A的化學(xué)結(jié)構(gòu)為：
[0011]
[0012] 姜祗素B，cur州bis油olinB的化學(xué)結(jié)構(gòu)為：
[0013]
[0014] 姜祗素C，cur州bis油olinC的化學(xué)結(jié)構(gòu)為：
[0015]
[0016]Ξ種姜黃素類化合物可W用于制備預(yù)防或治療肝纖維化或肝硬化的臨床藥物或 保健食品。
[0017] 本發(fā)明提供的姜黃素類化合物及其提取方法，利用硅膠柱層析、反相柱層析、葡聚 糖凝膠LH-20柱層析和制備高效液相色譜法，從姜黃中分離得到新的姜黃素類化合物，運(yùn) 些新化合物的結(jié)構(gòu)通過(guò)一維、二維NMR技術(shù)W及質(zhì)譜手段得W確認(rèn)和闡明，體外實(shí)驗(yàn)表明 所分離的Ξ種化合物都具有顯著降低膽總管扎結(jié)和CCL4誘導(dǎo)的肝纖維化模型大鼠血清中 ALT/AST的濃度，改善肝纖維化癥狀，表明該類化合物在制備預(yù)防或治療肝纖維化或肝硬化 的臨床藥物或保健食品開發(fā)上具有潛在的價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 結(jié)合實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】。
[001引 實(shí)施例1
[0020] 提取分離姜黃素類化合物：
[0021] (1) 5kg干燥的姜黃根莖經(jīng)過(guò)粉碎后，用甲醇提取3次，分別為，第1次用64升甲醇 提取3小時(shí)，第2次用48升甲醇提取2小時(shí)，第3次用32升甲醇提取2小時(shí)，最終得到提 取物浸膏812g;
[002引 似將浸膏W水溶解，置于水和乙酸乙醋中萃取分層，得到乙酸乙醋層600g;
[002引 （3)將乙酸乙醋層600g通過(guò)硅膠柱用不同比例的氯仿：甲醇溶劑分段梯度洗脫， 氯仿與甲醇體積比例為從90:10至5:95 ;依次得到10個(gè)饋分，編號(hào)為饋分1~饋分10 ;選 取6. 5g的饋分3進(jìn)一步由0DS反相柱分離，0DS反相柱分離使用的甲醇：水體積比分別為 40:60、55:45、60:40、75:25、95:5,依次得到編號(hào)饋分3-1~饋分3-5的5個(gè)饋分，其中饋分 3-4 為 1.5g，饋分 3-5 為Ig;
[0024] (4)饋分3-4和饋分3-5進(jìn)一步通過(guò)Se地adexLH-20甲醇凝膠反復(fù)除去色素得到 400mg饋分 3-4-3 ;
[00巧](5)饋分3-4-3進(jìn)一步W半制備液相色譜進(jìn)行制備，Agilent1200HPLCSeries;YMCODS-Acolumn，5ym，10X250mm，Acetonitrile/H20作為洗脫相，分別得到Ξ種姜黃素 類化合物的單體純品，包括：40mg姜祗素A,Acetonitrile/HzO洗脫比例：50:50, 3血/min, 出峰時(shí)間1：[；=125111；[]1;1〇1]^姜祗素13,4。61:〇]1；[付;[16/!120洗脫比例：50:50,3血/111；[]1,出峰 時(shí)間tR=llOmin;10mg姜祗素C,Acetonitrile/HzO洗脫比例：50:50, 3mL/min,出峰時(shí)間 ?κ= 140min。
[0026] 對(duì)所取得的Ξ種姜黃素類化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定
[0027] 經(jīng)過(guò)全面的一維、二維NMR分析W及高分辨質(zhì)譜分析，3個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)得W闡 明，為全新骨架的姜黃素類化合物。在ESI-MS"分析表明，姜祗素A在負(fù)離子模式產(chǎn)生與 姜黃素相同的m/z217/173/149的分子離子峰；姜祗素B在負(fù)離子模式產(chǎn)生與脫甲氧基姜 黃素相同的m/z217/187/173/143/149/119的分子離子峰；姜祗素C在負(fù)離子模式產(chǎn)生 與雙脫甲氧基姜黃素相同的m/z187/143/119的分子離子峰。此外，姜祗素A的分子離子 峰為m/z601[M-H]，姜祗素B的分子離子峰:m/z571[M-H]，姜祗素C的分子離子峰：m/z 54UM-H]。Ξ種姜黃素類化合物的分子離子峰依次相差30化，為在苯環(huán)上甲氧基（-OCH3) 數(shù)量的差異，與姜黃素、脫甲氧基姜黃素、雙脫甲氧基姜黃素的差異一致。因此，推測(cè)Ξ種姜 黃素類化合物的具有與姜黃素、脫甲氧基姜黃素、雙脫甲氧基姜黃素相同骨架結(jié)構(gòu)。
[002引將Ξ種姜黃素類化合物的與Ξ種已知姜黃素的電NMR和"CNMR列出作為對(duì)比， 如表1和表2所示，最終確定了Ξ種姜黃素類化合物的的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
[0029] 表1為Ξ種姜黃素類化合物（"C-0-C"鏈接）的碳譜（"CNMR)數(shù)據(jù) (400MHz，Aceton)與姜黃素（curcumin)、脫甲氧基姜黃素（DMC)、雙脫甲氧基姜黃素度DMC) 的數(shù)據(jù)列出作為參比。
[0030] 表2為S種姜黃素類化合物（"C-0-C"鏈接）的氨譜伯NMR)數(shù)據(jù) (400MHz，Aceton)與姜黃素（curcumin)、脫甲氧基姜黃素（DMC)、雙脫甲氧基姜黃素度DMC) 的數(shù)據(jù)列出作為參比。
[00引]表1
[0032]
[0033]
[0034] 表 2
[0035]
[0036]
[0037] Ξ種姜黃素類化合物姜祗素A、姜祗素B、姜祗素C的理化常數(shù)及光譜數(shù)據(jù)：
[003引 （1)姜祗素A
[0039] curcubis油olinsA，黃色粉末。高分辨質(zhì)譜（HRESIM巧精確分子式為：[36??. 實(shí)測(cè)值：625. 27719 [M+Na]+，計(jì)算值：625. 27762,forC36H4208化。UVses下顯示黃色巧光， 1H-NMR(400MHz，ACET0N)。古NMR和"CNMR見(jiàn)表 1 和表 2。
[0040] 結(jié)構(gòu)式為：
[0041] 姜祗素A數(shù)據(jù)歸屬如下：
[0042] 4" ' -〇-(1α, 2β, 5β,S-hydroxybis油ola_3,l〇-diene-9-〇ne)-但一4" ')-c urcumin(curcubisabolinsA)；
[0043] Yellow amo;rphous powder(CH3OH), m. p. 100-102 °C ; [a];, 76 k 0. 10,CH3OH); UV(CH30H) AmaxQog ε )421nm(62320) ;IR(KBr) V max 3857, 3747, 3684, 3631，3176, 19 60，1891，1718，1668，1592，1479，1402，1001，716,631;1h匪R ancPc醒R data were shown in Table. 2-land Table. 2-3 ;negative ESIMS。m/z 601[M-田；HRESIMS m/ z 625. 27762 [M+Nar(calcd. for〔36&208化，625. 27719)，641. 25019 [Μ+ΚΓ baled, for CsfftzOsK, 641. 25058)
[0044] 似姜祗素B
[0045]curcubis油olinsB，黃色粉末。高分辨質(zhì)譜（HRESIM巧精確分子式為：〔35成。〇7。 實(shí)測(cè)值：595. 26662 [M+Na]+，計(jì)算值：595. 26739,forC35H4007化。UV365下顯示黃色巧光， 1H-NMR(400MHz，ACETON)。古NMR和"cNMR見(jiàn)表1、表2。
[0046] 結(jié)