化合物1,3-二油酸-2-亞油酸甘油酯、制劑、制備方法及其應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及有機化學和藥學領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及化合物1,3-二油 酸-2-亞油酸甘油醋、制劑、制備方法及其在抗腫瘤藥物中的應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 意巧仁是禾本科意巧屬植物意巧Coixlacryma-jobiL.varma-yuen(Roman.) Stapf的成熟干燥種仁，為利水滲濕藥，很久W來為藥食兩用品種?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)意巧仁具 有鎮(zhèn)痛抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗?jié)儭⒔笛蜏p肥等藥理作用。近年來，國內(nèi)外學者通過化C、 HPLC-MS、GC等方法對意巧仁的化學成分進行了研究，發(fā)現(xiàn)其主要的活性成分包括醋類、不 飽和脂肪酸類、糖類及內(nèi)醜胺類等。其中，醋類是首先被發(fā)現(xiàn)的具有抗腫瘤活性的成分，也 是報道最多最受關(guān)注的化學成分，在中國臨床上已經(jīng)得到普遍應用的康萊特注射液的有效 成分便是提自意巧仁中的醋類。楊玲等[食品科學，2001，22巧）：59-62]研究表明，意巧仁 油脂中甘油Η醋的摩爾百分比在87. 64% -97. 66%之間，其次為甘油一醋、甘油二醋和脂 肪酸醋。同時，進一步研究表明，意巧仁油甘油Η醋中，相對含量不低于3%的的成分多達8 種，如Η亞油酸甘油醋（1)、二亞油酸油酸甘油醋（2)、蹤擱酸二亞油酸甘油醋（3)、亞油酸 二油酸甘油醋（4)、蹤擱酸亞油酸油酸甘油醋巧）、二蹤擱酸亞油酸甘油醋化）、Η油酸甘油 醋（7)和蹤擱酸二油酸甘油醋，約占甘油Η醋總量的90%W上。由此可見，意巧仁油脂成分 的復雜性，送必然會使實際生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制和臨床用藥安全面臨很大的挑戰(zhàn)。
[0003] 因此，開發(fā)一種安全、有效、可控的治療腫瘤的藥物即成為本發(fā)明關(guān)注的熱點。本 發(fā)明對上述意巧仁油甘油Η醋成分之一一亞油酸二油酸甘油醋進行了分離，首次制備得 到了一種具有式（I)結(jié)構(gòu)的化合物，即1,3-二油酸-2-亞油酸甘油醋，目前尚未見關(guān)于 此化合物及其藥物制劑用于治療腫瘤的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種具有式（I)結(jié)構(gòu)化合物，即1，3-二油酸-2-亞油酸 甘油醋：
[0005]
[0006] 本發(fā)明的又一目的在于提供一種含有式（I)結(jié)構(gòu)化合物的藥物組合物，其還可 含有藥學上可接受的載體。
[0007] 本發(fā)明的目的還在于提供一種具有式（I)結(jié)構(gòu)化合物的制備方法，其包括如下 步驟：
[0008] (1)意巧仁油的制備；
[0009] 似1，3-二油酸-2-亞油酸甘油醋的初步分離；
[0010] (3) 1，3-二油酸-2-亞油酸甘油醋的二次分離。
[0011] 其中，
[001引步驟（1)中意巧仁油的制備方法為：
[0013] 取水分《10%的意巧仁粉碎成10~300目，采用超臨界流體萃取，分離得到意巧 仁粗油；加入意巧仁粗油重量40%~58%的石油離，及適量堿溶液堿煉，分液后取有機相， 加入中性氧化鉛和/或高嶺±，過濾，150~18(TC減壓回收溶劑，干熱滅菌，冷卻過濾，得意 巧仁油。
[0014] 優(yōu)選的，
[0015] 所述超臨界流體萃取溶媒為二氧化碳，萃取溫度30~6(TC，萃取壓力19~ 24Mpa，分離溫度30~60°C，分離壓力6~15Mpa，二氧化碳流量10~5000L/h，連續(xù)萃取 1 ~4h;
[0016] 所述堿溶液可W為0.5%~3%的氨氧化鐘、氨氧化鋼的水溶液；
[0017] 所述加入中性氧化鉛和/或高嶺±的過程為；首先加入意巧仁粗油重量3 %~8 % 的活化中性氧化鉛過濾，濾液加熱至40~5(TC，又加入意巧仁粗油重量2 %~6 %經(jīng)活化的 高嶺±過濾，減壓除溶劑，再加入意巧仁粗油重量8%~12%活化中性氧化鉛過濾即可。 [001引更優(yōu)選的，
[0019] 取水分《10 %的意巧仁粉碎成10~300目，采用超臨界二氧化碳萃取裝置萃 取，將意巧仁粉裝入萃取蓋，加熱二氧化碳預熱器、萃取蓋和分離柱，使萃取溫度達到30~ 6(TC，分離溫度達到30~6(TC，升高壓力，使萃取壓力達到19~24Mpa，分離壓力達到6~ 15Mpa，萃取意巧仁油后的超臨界二氧化碳流體進入解析蓋解析循環(huán)，解析蓋可根據(jù)需要設 一至多個，控制解析溫度30~6(TC，解析壓力2~6Mpa，整個循環(huán)保持二氧化碳流量10~ 5000LA，連續(xù)萃取1~地，自分離柱下端分離得到意巧仁粗油；
[0020] 將上述意巧仁粗油加入油重量40 %~58 %的石油離，再加入適量的2 %化0H溶 液堿煉，分液后取有機相用純化水進行水洗，取水洗后有機相加適量丙麗破乳后，取上層油 溶液，加入粗油重量3%~8%的活化中性氧化鉛過濾，取濾液加熱到40~5(TC后，加入 粗油重量2%~6%經(jīng)活化的高嶺±過濾，濾液減壓回收溶劑后，再加粗油重量8%~12% 活化中性氧化鉛過濾得油，過濾后的油再經(jīng)150~18(TC減壓干熱滅菌1~化，冷卻后經(jīng) 《0. 2μm微孔濾膜過濾，得意巧仁油。
[0021] 其中，
[0022] 步驟（2)中1，3-二油酸-2-亞油酸甘油醋的初步分離方法為：
[0023]采用Gilson制備型高效液相色譜儀和蒸發(fā)光散射檢測器聯(lián)用；制備型色譜柱為 AgilentZorbaxSB-C18(250mmX21.2mm, 7um);流動相為流動相A(己膳）和流動相B(四 氨巧喃：己臘=1:1)，采用梯度條件洗脫；流動相B;0~27min，50% - 60%，27~35min， 60% - 90%，35 ~45min，90% - 100%;流速；18ml/min。進樣體積為 200 ~300μ1 ;收集 響應設置；peaklevelmin= 30mV;
[0024] 供試品配制；用流動相B配制成0.Ig/ml的意巧仁油溶液；
[0025] 收集保留時間約為16min前后的色譜峰流分，低溫減壓抽干溶劑。
[002引 其中，
[0027]步驟（3)中1，3-二油酸-2-亞油酸甘油醋的二次分離方法為：
[002引一次制備條件為；AgilentllOO分析型高效液相色譜儀，DAD檢測器，，色譜柱：VenusilXBPC18 化）（10 巧 50mm，5μm，150Λ)，流動相，己臘；四氨巧喃= 75:25，流速；4mL/ min;檢測波長；205nm;供試品配制；取1，3-二油酸-2-亞油酸甘油醋的初步分離樣品，加 入適量正己焼，超聲促溶后備用，進樣量；60μ1，收集保留時間約為19min的色譜峰流分， 將此流分氮吹濃縮；
[0029] 二次制備條件為：色譜柱，VenusilCAα0*250mm，5μm，l{K)0裘），流動相，正己焼： 己醇=95:5,紫外檢測波長；205nm，流速：4血/min;供試品配制；取一次制備的流分樣品若 干，加入適量正己焼，超聲促溶后備用；進樣量；60μ1，收集保留時間約為2. 5min~5min 的色譜峰，氮吹濃縮、低溫凍存。
[0030] 本發(fā)明化合物經(jīng)過理化性質(zhì)、質(zhì)譜、核磁、紫外和紅外光譜的鑒定，確證了其結(jié)構(gòu)， 具體如下：
[0031] 1.實驗儀器
[0032] 高效液相色譜儀;AgilentllOO(DAD，ELSD)(美國安捷倫公司）；
[0033] 核磁共振波譜儀；BRUKERAVANCE500MHZ(美國布魯克公司）；
[0034] 質(zhì)譜儀；MacromassGCT飛行時間質(zhì)譜燈OF)(美國沃特世公司）；
[0035]FinniganTRACEDSQ-MS(美國熱電公司）；
[0036] 液相質(zhì)譜聯(lián)用儀；FinniganLCQadvantageMAX(美國熱電公司）；
[0037] 紅外光譜儀；Nicolet6700(美國熱電公司）；
[0038]旋光儀JascoP-1030 (日本JASC0 公司）。
[00測 2.實驗方法
[0040]HPLC;取純品 20mg于 1ml二氯甲焼溶液中，AgilentllOOHPLC，色譜柱；Agilent ZorbaxSB-C18(250mmX4. 6mm，i.d. 5um)，二氯甲焼-己臘（35:65，v/v)為流動相，進樣量 10μ1。
[0041]LC-MS;按液相條件，在FinniganLCQadvantageMAX上WAPCI正離子模式測定。
[0042] IR;將所得純品分別涂膜于漠化鐘晶體表面，在紅外光譜儀Nicolet6700上測定。
[004引HR-EI與如.-EI;取所得純品5μg，涂于進樣池中，于MacromassGCT飛行時間質(zhì) 譜燈0巧上，WSourceTemp:200°C;SampleTemp:400°C;DIRECT，70eV測定。同樣WSource Temp;25(TC;SampleTemp;25(TC;DIRECT，70eV條件在FinniganTRACEDSQ-MS上測定。
[0044]NMR;將所得純品取30~40mg，置于核磁管中，加0.