一種韭菜籽抗氧化六肽及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種韭菜巧天然抗氧化六膚及其制備方法和在食品領(lǐng)域中的應(yīng)用，屬 于食品領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國(guó)是一個(gè)農(nóng)業(yè)大國(guó)，農(nóng)作物的種類繁多，但由于受加工技術(shù)條件的所限農(nóng)作物 的加工大都處于初級(jí)階段，其加工后的殘余物中仍有較大含量的蛋白質(zhì)，而它們大多主要 用于飼料工業(yè)或自然排放，不僅浪費(fèi)了資源，同時(shí)也造成環(huán)境污染。植物活性膚概念的提出 及分離檢測(cè)技術(shù)的提高，使人們開始逐漸重視對(duì)富含蛋白質(zhì)的農(nóng)副產(chǎn)品的深加工并從中獲 得多種活性膚，如酪蛋白憐酸膚、降血壓膚和易消化吸收膚等，植物來源活性膚的研究和開 發(fā)對(duì)提高我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品深加工的附加值具有重要作用。
[0003] 抗氧化劑近些年來在國(guó)內(nèi)外發(fā)展很快，用途也越來越廣。研究人為人體內(nèi)氧化產(chǎn) 生的自由基與人的衰老和許多疾病有關(guān)，因此抗氧化劑不僅用于含脂肪食品的抗氧化，而 且作為功能因子用于保健食品及化妝品等的開發(fā)?？寡趸瘎┑姆N類很多，但一些化學(xué)合成 的抗氧化劑如BHA、BHT等，由于其本身肯能具有毒副作用，各國(guó)政府紛紛對(duì)其強(qiáng)制規(guī)定了 ADI值控制其過量添加。于是人們把目光逐步轉(zhuǎn)向從各種植物和動(dòng)物組織中提取天然抗氧 化劑。抗氧化活性多膚由于低毒、高效等特點(diǎn)，作為食品和機(jī)體的抗氧化劑，被認(rèn)為是人工 合成抗氧化劑的理想替代者。
[0004] 抗氧化膚能有效地清除體內(nèi)過剩的活性氧自由基，保護(hù)細(xì)胞和線粒體的正常結(jié)構(gòu) 和功能，防止脂質(zhì)過氧化的發(fā)生，而氧化與人類及其他動(dòng)物的許多疾病諸如癌癥、老化、動(dòng) 脈硬化等的發(fā)病機(jī)理有關(guān)。適當(dāng)攝入具有抗氧化活性的物質(zhì)可W降低體內(nèi)自由基水平，防 止脂質(zhì)過氧化，幫助機(jī)體抵御疾病。
[0005] 韭菜巧為我國(guó)常見食用蔬菜百合科植物韭菜心iuAero沉Rottl干燥成熟 的種子，韭菜巧(藥典中常稱為韭子）為我國(guó)傳統(tǒng)中藥品種，始載于《名醫(yī)別錄》，列為中品。 據(jù)藥典記載，韭菜巧具有溫補(bǔ)肝腎、壯陽(yáng)固精之功效。韭菜巧作為壯陽(yáng)補(bǔ)腎用入藥在我國(guó)民 間已有數(shù)千年的歷史。2002年我國(guó)衛(wèi)生部將其列為藥食兩用植物天然產(chǎn)物。韭菜巧運(yùn)種植 物種子資源在我國(guó)十分豐富，產(chǎn)量居世界首位。目前國(guó)內(nèi)外一直W來對(duì)韭菜尤其是其種子 韭菜巧的研究很少。國(guó)外還未對(duì)韭菜巧進(jìn)行過化學(xué)成分和功效等方面的研究，國(guó)內(nèi)化學(xué)成 分方面的研究也并不多，迄今為止，對(duì)其活性多膚或藥理研究國(guó)內(nèi)外都還幾乎沒有報(bào)道。 因此，有必要充分利用我國(guó)十分豐富的韭菜(韭菜巧）植物資源，對(duì)其進(jìn)行深入系統(tǒng)研究，為 實(shí)現(xiàn)韭菜巧中藥現(xiàn)代化和開發(fā)新型、高效、安全的健康食品提供科學(xué)依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種制備簡(jiǎn)單，抗氧化活性強(qiáng)的韭菜巧抗氧化六膚，并且可 W將該抗氧化六膚應(yīng)用于保健食品的研制與開發(fā)。
[0007] 本發(fā)明的一種抗氧化六膚，其氨基酸序列為化e-Pro-Leu-Pro-Ser-Phe。用單字母 表示為FPLPSF，即由苯丙氨酸-脯氨酸-亮氨酸-脯氨酸-絲氨酸-苯丙氨酸6個(gè)氨基酸 殘基構(gòu)成。
[0008] 韭菜巧抗氧化膚的酶解制備方法：采用減提酸沉法得到韭菜巧蛋白，采用酸性 蛋白酶將其在最佳酶解條件：pH3. 02、酶添加量1345. 7U、底物濃度2% (w/v)、解酶時(shí)間 6. 45h，沸水浴lOmin滅活，經(jīng)12000巧m離屯、20min，取上清液冷凍干燥，即為韭菜巧蛋白質(zhì) 酶解產(chǎn)物； 所述抗氧化六膚分離純化方法：韭菜巧蛋白質(zhì)酶解產(chǎn)物利用Se地adexG-25凝膠色譜 進(jìn)行分離，W去離子水為洗脫液，流速0.3mL/min，測(cè)量洗脫組分214nm波長(zhǎng)處的吸光值； 收集具有最佳抗氧化活性的峰，利用反相高效液相色譜（RP-HPLC)進(jìn)一步分離；RP-HPLC的 洗脫梯度為 0~5min，5〇/〇 ( 乙臘；5~40min，5〇/〇~40〇/〇 ( 乙臘；40-50min，40〇/〇 ( 乙臘；流速為2. 0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)214nm，收集洗脫時(shí)間為36~37min的洗脫峰，冷凍干燥 即得所述抗氧化六膚。
[0009] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于： 所述抗氧化六膚具有強(qiáng)活性，對(duì)DPPH，徑基自由基，超氧陰離子和ABTS自由基都有強(qiáng) 的清除作用，表明其在抗氧化活性開發(fā)和應(yīng)用方面有重要價(jià)值。韭菜巧天然抗氧化六膚 FPLPSF對(duì)DPPH自由基、ABTS自由基和徑基自由基都具有較強(qiáng)的清除活力，當(dāng)濃度為0. 5mg/ mL時(shí)，韭菜巧天然抗氧化六膚FPLPSF對(duì)DPPH自由基、ABTS自由基、徑基自由基和超氧陰離 子自由基的清除率分別為 56. 49 + 0. 38%，93. 90 + 2. 64%，43. 41 + 0. 79% 和 30. 09 + 1. 80〇/〇。
【附圖說明】
[0010] 圖1 :韭菜巧提取物Se地edexG-25凝膠過濾色譜圖。
[0011] 圖2 :凝膠色譜洗脫峰A5反相高效液相色譜圖。
[001引圖3 :抗氧化六膚的質(zhì)譜圖。
[001引圖4:抗氧化六膚對(duì)ABTS自由基的清除作用。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 本實(shí)施例在W本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和過 程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不僅限于下述的實(shí)施實(shí)例。
[001引實(shí)施例1 本發(fā)明所述抗氧化六膚的分離純化包括Se地adexG-25凝膠過濾色譜和反相高效液相 色譜（RP-HPLC)兩個(gè)步驟。
[0016]韭菜巧抗氧化六膚酶解產(chǎn)物的制備：采用酸性蛋白酶在其最佳酶解條件（pH 3. 02,酶添加量1345. 7U，底物濃度2% (w/v))下解酶時(shí)間6. 45h，沸水浴lOmin滅活，經(jīng) 12000巧m離屯、20min，取上清液冷凍干燥，即為韭菜巧蛋白質(zhì)酶解產(chǎn)物； Se地adexG-25凝膠過濾色譜：將韭菜巧酶解產(chǎn)物凍干粉，溶解于去離子水中， 12000巧m離屯、15min。取上清液用0. 22μηι孔徑微濾膜過濾。SephadexG-50凝膠柱 (1.6cmX100cm)用去離子水平衡，將已過濾的樣品上柱。用去離子水洗脫，流速0.3血/ min,于214nm波長(zhǎng)處檢測(cè)洗脫液吸光值，繪制洗脫曲線，如圖1所示。收集洗脫峰峰5,冷 凍干燥，-80 °C低溫保存?zhèn)溆谩?br>[0017] 高效液相色譜：去離子水溶解上述峰5凍干粉，采用RP-HPLC進(jìn)一步分離。液相色 譜系統(tǒng)為L(zhǎng)C-20A，裝配Gemini5μC18 (250mmX10mm)反相柱（Phenomenex，UK)，用水 和乙臘(含0.05% 氣乙酸）構(gòu)成的洗脫系統(tǒng)