一種檢驗棉拭子及其制備方法和檢驗方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及醫(yī)療器械技術領域，具體設及一種檢驗棉拭子及其制備方法和檢驗方 法。
【背景技術】
[0002] 藥敏檢驗是對細菌耐藥性進行檢測的試驗?，F(xiàn)有的藥敏檢驗方法使用的培養(yǎng)基分 為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基兩種，其檢驗方法通常為紙片檢驗法和濃度檢驗法，紙片檢驗 法使用固體培養(yǎng)基，濃度檢驗法使用液體培養(yǎng)基。紙片檢驗法是通過觀察藥物紙片當貼于 含有特定細菌的固體培養(yǎng)基表面后而形成的藥物抑菌圈的大小，來確定該菌對藥物的敏感 性；濃度檢驗法是通過觀察檢測不同藥物和不同藥物濃度影響細菌生長的情況來確定細菌 對藥物的敏感性。
[0003] 紙片檢驗法或濃度檢驗法，其整個藥敏檢驗過程通?？煞譃榧毦蛛x培養(yǎng)、細菌 增殖、藥敏檢驗Ξ個步驟。目前魚細菌病藥敏的檢測方法多為紙片檢驗法，其操作步驟為： ①用無菌樣本棉拭子從病魚組織取樣；②接種于固體培養(yǎng)基如瓊脂培養(yǎng)基進行分離培養(yǎng)， 37Γ培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時左右，把單個細菌培養(yǎng)成細菌菌落；③取少量的細菌菌落（1-3 個），將其溶解分散成濃菌液；④接種于固體培養(yǎng)基例如瓊脂培養(yǎng)基表面上；⑥在固體培養(yǎng) 基表面上貼上藥物紙片；⑧放入37Γ培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時左右，觀察藥物抑菌圈，確定細 菌對藥物的敏感性。現(xiàn)有的紙片檢驗法的優(yōu)點是操作方便、設備簡單，但其存在的缺點為： (1)整個檢驗操作繁瑣，所需的時間長，整個檢驗過程至少需要48小時左右。如果在藥敏檢 驗得到結(jié)果后再使用藥物治療，就會嚴重影響魚病治療控制時機。而實際生產(chǎn)中在沒有藥 敏檢驗的情況下隨便使用抗生素藥物，不但不能取得有效的治療效果，反而會導致細菌耐 藥的嚴重后果。
[0004] 現(xiàn)有的濃度檢驗法主要有兩種方式：一種是在細菌分離培養(yǎng)、細菌增殖濃集階段 采用固體培養(yǎng)基，其步驟與現(xiàn)有的紙片檢驗法相同，但藥敏檢驗階段的步驟與現(xiàn)有的紙片 檢驗法不同，具體為：從固體培養(yǎng)基上取增殖或分離培養(yǎng)獲得的細菌菌落（1-3個）、將其溶 解分散成菌懸液、將菌懸液倒入按不同的藥物和不同的濃度配制成的多個試驗容器中、制 成對比試驗標本、觀察檢測試驗容器中細菌生長情況、確定細菌對藥物的敏感性。運種檢驗 方法的優(yōu)點是設備簡單，投資?。坏浯嬖赪下缺點：（1)所需的時間長、（2)操作煩瑣、（3) 在配制多個藥物濃度過程中容易被其他細菌污染，運樣就可能造成錯誤的檢驗結(jié)果。另一 種是在細菌分離培養(yǎng)、細菌增殖階段采用液體培養(yǎng)基；運種檢驗方法通常采用儀器檢驗，例 如抓公司的BACTEC9000MB全自動快速細菌培養(yǎng)鑒定藥敏系統(tǒng)，其優(yōu)點是操作簡單，檢驗 過程時間短，但其存在的缺點是儀器設備使用成本高。
[0005] 總之，現(xiàn)有的常規(guī)細菌藥敏檢驗方法存在W下缺點：（1)整個檢驗過程所需的時 間長、（2)操作麻煩、（3)成本高，幾乎不可能用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的藥敏快速檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了克服現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種檢驗棉拭子，采用該棉拭 子用于檢驗細菌藥敏性所需時間短、成本低，且操作簡單。
[0007] 為解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術方案如下：
[0008] -種檢驗棉拭子，其包括棉拭子柄和棉拭子頭，所述棉拭子頭浸入抗生素后插入 固體培養(yǎng)基中在棉拭子頭表面形成固體培養(yǎng)基層。
[0009] 進一步的，本發(fā)明所述的抗生素恩諾沙星、鹽霉素、恩拉霉素、泰樂菌素、沃尼妙 林、氣洛芬、阿莫西林、氣苯尼考、頭抱嚷巧、±霉素、金霉素、鹽霉素、莫能霉素中的一種或 兩種W上復合；或者是四環(huán)素、巧喃挫響、慶大霉素、青霉素重量份、氨節(jié)青霉素、苯挫青霉 素、頭抱氨節(jié)、頭抱挫嘟、頭抱拉定、頭抱巧辛、頭抱曲松、頭抱嚷朽、頭抱贓酬、鏈霉素、慶大 霉素、霉卡那素、下胺卡那霉素、紅霉素、阿奇霉素、克拉霉素、羅它霉素、地紅霉素、麥迪霉 素、螺旋霉素、交沙霉素、氯霉素、班巧氯霉素、林可霉素、克林霉素、橫胺喀晚、復方新諾明、 氣贓酸、氧氣沙星、環(huán)丙沙星中的一種或兩種復合。
[0010] 進一步的，本發(fā)明所述的固體培養(yǎng)基包括蛋白腺20-30重量份、玉米淀粉10-20 重量份、葡萄糖1-5重量份、丙酬酸鋼0. 1-2重量份、半脫氨酸鹽酸鹽0. 05-1重量份、硫 酸儀0.1-0. 5重量份、丙橫酸半鋼鹽5-15重量份、憐酸氨二鋼8-15重量份、特異顯色劑 0. 0002-0. 0005重量份、細菌加速生長刺激因子0. 05-0. 2重量份、抑菌劑0. 005-0. 02重量 份、瓊脂12-18重量份；還包括濃度為2-20mg/L的細菌生長指示劑。
[0011] 進一步的，本發(fā)明所述的固體培養(yǎng)基包括蛋白腺25重量份、玉米淀粉14重量份、 葡萄糖2. 5重量份、丙酬酸鋼1.0重量份、半脫氨酸鹽酸鹽0.1重量份、硫酸儀0. 3重量份、 丙橫酸半鋼鹽11重量份、憐酸氨二鋼10. 7重量份、特異顯色劑0. 0005重量份、細菌加速生 長刺激因子0. 1重量份、抑菌劑0. 01重量份、瓊脂15. 2重量份；還包括濃度為2-20mg/L細 菌生長指示劑。
[0012] 進一步的，本發(fā)明所述的固體培養(yǎng)基的抑為7-8。
[0013] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種檢驗棉拭子的制備方法，通過該方法獲得一種檢 驗棉拭子，用于檢驗細菌藥敏性；該制備方法包括W下步驟：
[0014] 1)制備抗生素-藥敏檢驗棉拭子：將抗生素配制成溶液，用0. 1-0. 5μm濾器過 濾，制得抗生素液，然后在無菌條件下將由高壓滅菌的棉拭子的棉拭子頭插入到上述抗生 素液中；
[0015] 2)浸培養(yǎng)基：將固體培養(yǎng)基中加入雙蒸水混合，然后高壓滅菌，待培養(yǎng)基降溫至 50-6(TC時，轉(zhuǎn)入到EP離屯、管中，將步驟1)制備的抗生素-藥敏檢驗棉拭子的棉拭子頭插 入到培養(yǎng)基中1-3秒，取出并放置于無菌培養(yǎng)皿中冷卻，避免棉拭子頭與培養(yǎng)皿壁接觸；即 得到檢驗棉拭子。
[0016] 本發(fā)明還提供了一種利用本發(fā)明所述的檢驗棉拭子檢驗魚病細菌藥敏性的方法， 該方法步驟如下：
[0017] 1)制備樣本溶液：無菌條件下，使用醫(yī)用無菌棉拭子從病魚的細菌感染目標組織 取樣，置于裝有滅菌PBS的EP管中，混合均勻，得樣本溶液；
[0018] 2)無菌條件下，用無菌滴管吸取樣本溶液，滴1滴樣本溶液到上述檢驗棉拭子上， 靜置30-60秒，然后插入高壓滅菌過的凝膠液中10-15秒，取出粘有凝膠液的棉拭子，將其 浸入高壓滅菌過的固化液中10-20秒，將其放入37°C培養(yǎng)12-14小時；根據(jù)其細菌生長菌 落的生長狀況確定細菌對藥物的敏感性。
[0019] 進一步的，本發(fā)明所述的凝膠液由膠體、生理鹽水和抑菌劑組成，其中膠體濃度 為7-20g/L，抑菌劑的濃度為O.Olg/L;所述固化液由固化劑、抑菌劑化及生理鹽水組成，其 中，固化劑的的濃度為10-20g/l，抑菌劑的濃度為0.Olg/L。
[0020] 進一步的，本發(fā)明所述的凝膠為海藻酸鋼、果膠、卡拉膠中的一種。
[0021] 進一步的，本發(fā)明所述的固化劑為棚砂、含有巧離子或儀離子的溶液中的一種。
[0022] 相比現(xiàn)有技術，本發(fā)明的有益效果在于：
[0023] 1本發(fā)明所述的檢驗棉拭子結(jié)構簡單，不需要像紙片檢驗法所必需的設備，生產(chǎn)成 本和使用成本低；
[0024] 2.本發(fā)明所述的檢驗棉拭子中培養(yǎng)基包括有營養(yǎng)組份和緩沖劑，為細菌提供生長 所需的營養(yǎng)和環(huán)境；
[0025] 3.采用本發(fā)明所述的檢驗棉拭子檢驗細菌藥敏性，細菌生長刺激因子可W明顯地 刺激細菌的生長，其增殖培養(yǎng)的時間明顯縮短，從而使整個檢驗過程時間縮短；由于細菌生 長指示劑的存在，可顏色的變化來表示細菌生長菌落狀況，即使在細菌菌落形成的早 期，使用肉眼便可辨知，檢測的靈敏度高。
[0026] 下面結(jié)合附圖和【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步詳細說明。
【附圖說明】
[0027] 圖1為本發(fā)明所述的檢驗棉拭子的結(jié)構示意圖； 圖2為本發(fā)明所述的檢驗棉拭子的藥敏實驗結(jié)果圖； 圖3為普通棉拭子藥敏實驗結(jié)果圖；
[002引其中，各附圖標記為：1、棉拭子柄；2、棉拭子頭；3固體培養(yǎng)基層。
【具體實施方式】
[00