[0022]優(yōu)選地，所述試劑包括針對miR-340的引物和/或探針。包括現(xiàn)有技術中已經(jīng)報道的可用于判斷非小細胞肺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移，或者判斷非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移風險，或者判斷非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移是否復發(fā)的miRNA的引物和/或探針。將多種miRNA的檢測引物和/或探針放置在同一試劑盒中通過檢測多種miRNA指標聯(lián)合判斷非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移的情況也包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
[0023]優(yōu)選地，所述產(chǎn)品為芯片或試劑盒；其中，所述芯片包括固相載體，以及固定在所述固相載體上的寡核苷酸探針。所述寡核苷酸探針包括特異性地對應于miR-340的部分或全部序列，還可包括現(xiàn)有技術中已經(jīng)報道的可用于判斷非小細胞肺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移或者判斷非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移風險或者判斷非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移是否復發(fā)的miRNA的寡核苷酸探針。將多種miRNA的檢測探針放置在同一芯片上通過檢測多種miRNA指標聯(lián)合判斷非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移的情況也包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
[0024]所述固相載體可采用基因芯片領域的各種常用材料，優(yōu)選地，所述固相載體為尼龍膜，經(jīng)活性基團修飾的玻片或硅片，未修飾的玻片、塑料片；更優(yōu)選地，所述活性基團為醛基或/和氨基。
[0025]所述的miRNA芯片的制備可采用本領域已知的生物芯片的常規(guī)制造方法，例如，如果固相載體采用修飾玻片或硅片，探針的端含有氨基修飾的，優(yōu)選地，將寡核苷酸探針配制成溶液，然后采用點樣儀將其點在修飾玻片或者硅片上，排列成預定的序列或陣列，然后通過放置過夜來固定，就可得到本發(fā)明的miRNA芯片。
[0026]所述試劑盒包括用于檢測受試者非小細胞肺癌組織中miR-340的表達水平的試劑。與未發(fā)生轉(zhuǎn)移的非小細胞肺癌組織中的miR-340的表達水平比較，若通過試劑盒檢測非小細胞肺癌組織中miR-340的表達水平顯著升高，則判斷該受試者的非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移風險很高或者已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移，或者再次發(fā)生轉(zhuǎn)移。
[0027]本發(fā)明的miR-340為天然或人工合成，或者使用可以表達miR-340的DNA片段的載體轉(zhuǎn)染細胞獲得。所述可以表達miR-340的DNA片段可以通過如下方式獲取JAmiRNA數(shù)據(jù)庫中(http://infororna.sanger.ac.0k/sequences/)尋找 miR-340 在基因組上的位置及具體序列信息，根據(jù)基因組序列確定miRNA-2116初始miRNA的位置，在miR-340初始miRNA位置的上下游500-800bp區(qū)間內(nèi)設計特異性引物，擴增引物中間的序列即可獲得表達miR-340的DNA片段。
[0028]所述載體包括病毒載體、真核載體。
[0029]優(yōu)選地，所述病毒載體為逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體、腺病毒相關病毒載體、皰疹病毒(例如單純皰疹病毒、痘苗病毒及EB病毒)載體或衛(wèi)病毒載體。
[0030]優(yōu)選地，所述真核表達載體為pCMV-Myc表達載體、pcDNA3.0表達載體、pcDNA3.1表達載體、PEGFP表達載體、pEF Bos表達載體、pTot表達載體或pTRF表達載體；或者在現(xiàn)有市面上的表達載體的基礎上經(jīng)改造的載體，優(yōu)選地，為pRinl38或pCAMBTA1301。
[0031]優(yōu)選地，所述藥物包含miR-340抑制劑。所述miR-340抑制劑能夠抑制miR-340的表達或者能夠抑制miR-340的功能。所述miR-340抑制劑的抑制革E標不限于miR-340本身，還包括miR-340的上下游，例如:編碼miR-340的基因組系列，miR-340靶基因、調(diào)控miR-340的蛋白或者基因。優(yōu)選地，miR-340抑制劑包括蛋白、寡核苷酸、小分子化合物。
[0032]優(yōu)選地，所述miR-340抑制劑是miR-340的反義寡核苷酸或者miR-340模擬物。根據(jù)miR-340序列容易設計出它的反義寡核苷酸，將反義寡核苷酸轉(zhuǎn)移到人體內(nèi)后，它們能夠明顯下調(diào)miR-340的表達。反義寡核苷酸(antisonso- oligonucleotides, AS-Oms或AS0)又稱為反義寡核苷酸，是指長度約為18-26nt (更特別的約19_22nt)的DNA分子或RNA分子或其類似物。
[0033]所述反義核苷酸還包括采用如基于核酸鎖或核酸鏈骨架修飾技術等手段獲得的經(jīng)修飾的反義核苷酸，所述的修飾基本不改變反義核苷酸的活性。優(yōu)選地，所述修飾可提高反義寡核苷酸的穩(wěn)定性、活性或治療效果。核苷酸(locked nucleic acid LNA)通常是指通過一個亞甲基橋?qū)⒑塑账岬难踉雍? /碳原子連接起來的修飾技術?；诤怂徭湽羌艿男揎椉夹g發(fā)展出的反義藥物在可溶性，抗核酸酶降解等方面大有改善，且易于大量合成。寡核苷酸的骨架修飾方法有多種，包括硫代法，例如將脫氧核苷酸鏈硫代修飾為硫代脫氧核苷酸鏈。該方法是將DNA骨架上的磷酸鏈的氯原子用硫原子替代，可抵抗核酸酶降解，應理解，任何能夠保持所述反義寡核苷酸的大部分或全部活性的修飾都包含在本發(fā)明中。
[0034]所述藥物還包括藥物學上可以接受的載體，所述載體優(yōu)選:稀釋劑、緩沖劑、濕懸劑、乳劑顆粒劑、包裹劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、噴霧劑、透皮吸收劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、著色劑、矮味劑或吸附載體。
[0035]優(yōu)選地，將所述藥物制成顯微注射劑、適于轉(zhuǎn)染的劑型、注射液、片劑、粉劑、粒劑或膠囊劑。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學領域的常規(guī)方法制備。
[0036]所述藥物可以單獨施用，或者與其他能夠抑制非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移的藥物進行組合施用。
[0037]所述制劑可以離體施用:將miR-340或者miR-340的表達載體在體外導入或轉(zhuǎn)染人體自身或異體細胞(或異種細胞)，經(jīng)過體外細胞擴增后，輸入人體。
[0038]所述制劑可以體內(nèi)施用:將miR-340或者miR-340的表達載體直接導入體內(nèi)。這種載體可以是病毒型或非病毒性，甚至是裸DNA或RNA0
[0039]miR-340 成熟序列:uccgucucaguuacuuuauagc ant1-miR-340 序列:gcuauaaaguaacugagacgga 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明有益效果在于:本發(fā)明公開了 miR-340在制備非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移或預判非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移的標記物中的應用，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)所述miR-340可靶向下調(diào)死亡相關蛋白激酶的表達水平，而死亡相關蛋白激酶與非小細胞肺癌的轉(zhuǎn)移和耐藥密切相關。因此miR-340的表達水平可用于判斷非小細胞肺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移，或者預判非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移風險，或?qū)熌退?。?jīng)實驗證明，miR-340可促進非小細胞肺癌細胞轉(zhuǎn)移和抵抗化療。miR-340表達增加預示非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移的幾率增加，引發(fā)耐藥，預后不良。在此基礎上，miR-340還可以用作為制備抑制非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移或預防非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移或非小細胞肺癌耐藥的靶點，并進一步推廣應用到其他腫瘤細胞的防治和預后。本發(fā)明為臨床在分子水平上診斷非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移和耐藥提供了新的診斷方法，同時為非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移的基因治療提供了新的藥物靶點。
【附圖說明】
[0040]圖1為實施例2中ant1-miR-340措抗miR-340表達。
[0041]圖2為實施例3中miR-340靶向干擾DAPK表達。
[0042]圖3為實施例4中miRNA對A549細胞粘附能力的影響。
[0043]圖4為實施例5中miR-340對細胞迀移的影響。
[0044]圖5為實施例6中miR-340對細胞侵襲的影響。
[0045]圖6為實施例7中miR-340影響A549細胞對順鉑敏感。
【具體實施方式】
[0046]下面結(jié)合說明書附圖和具體實施例對本發(fā)明做進一步詳細說明，但實施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。除非特別說明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設備為本技術領域常規(guī)試劑、方法和設備。
[0047]肺腺癌細胞株:將肺腺癌細胞株A549于RPMI164