例，而不是全部的實(shí)施例?；诒旧暾堉械膶?shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0028]實(shí)施例1
[0029]—種提取L-異亮氨酸的工藝，包括以下步驟:
[0030]1)混合發(fā)酵液的制備:將谷氨酸棒桿菌ATCC14309種子液和乳酸發(fā)酵短桿菌ATCC13869種子液按照2: 1的體積比混合，得到混合種子液，谷氨酸棒桿菌ATCC14309種子液和乳酸發(fā)酵短桿菌ATCC13869種子液的濃度約為1 X 10sCFU/mL，按照按照5%的接種量轉(zhuǎn)入發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，溫度30°C，PH值7.2，培養(yǎng)時(shí)間60小時(shí)，得到L-異亮氨酸發(fā)酵液；發(fā)酵培養(yǎng)基組分為:葡萄糖12%、玉米漿5%、牛肉膏1%、七水硫酸鎂0.2%、磷酸氫二鉀 0.2%、硫酸亞鐵 0.001%、VB1 0.0001%, pH 7.0。
[0031 ] 2)將發(fā)酵結(jié)束的L-異亮氨酸發(fā)酵液采用陶瓷膜過濾，膜孔徑60-70nm，過濾，收集菌體蛋白和濾液；
[0032]3)將步驟2)獲得的濾液進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，蒸發(fā)至原體積的五分之一，然后添加與濃縮液相同體積的蒸餾水重溶，制得重溶液；
[0033]4)將步驟3)獲得的重溶液采用離子交換法提取L-異亮氨酸:
[0034]①調(diào)節(jié)pH值為5，然后通入強(qiáng)酸離子交換樹脂柱(C100陽離子交換樹脂)，進(jìn)行離子交換，三柱串聯(lián)離子交換，所述強(qiáng)酸離子交換樹脂柱是三個(gè)強(qiáng)酸離子交換樹脂柱通過管道和閥門串聯(lián)在一起，并且每一個(gè)強(qiáng)酸離子交換樹脂柱底部都有一個(gè)收料閥門；
[0035]②濾清液按照流速為樹脂體積的2.0倍速從樹脂柱上部進(jìn)入，下部排出；當(dāng)下排液遇茚三酮顯色時(shí)，將下排液串入第二個(gè)柱，當(dāng)?shù)诙€(gè)柱顯色時(shí)將第二柱的下排液串入第三個(gè)柱；
[0036]③當(dāng)?shù)谌@色時(shí)再繼續(xù)外排連續(xù)2.5小時(shí)，此時(shí)排出的顯色液為谷氨酸、丙氨酸為主，此時(shí)能去除發(fā)酵液中總雜酸的40%左右；
[0037]④排完2.5小時(shí)后，停止第一柱的進(jìn)料，用純水從第一柱到第三柱串洗至前流罐內(nèi)再重新吸附用；
[0038]⑤當(dāng)用純水沖洗結(jié)束時(shí)，將配制好的2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))氨水，流速按照樹脂體積的1倍速將樹脂所吸附的氨基酸解析下來，解析過程中當(dāng)柱下液pH值達(dá)到6.5時(shí)，關(guān)閉收料閥門打開串柱閥門，串洗下一柱子，以此類推當(dāng)?shù)谌齻€(gè)柱子柱下液pH到達(dá)6.5時(shí)繼續(xù)洗脫，不再串柱，當(dāng)pH值達(dá)到8.5時(shí)，開始外排尾液3小時(shí)，停止洗脫；用空氣從第一個(gè)柱子到第三個(gè)柱子將柱內(nèi)的氨水壓回后流罐；這樣三柱串聯(lián)洗脫能有效的雜酸，其中包括有大量的賴氨酸、精氨酸等其它氨基酸；
[0039]⑥將離交柱內(nèi)洗脫的料液濃縮，可以濃縮L-異亮氨酸質(zhì)量濃度為10% ；
[0040]⑦濃縮后的料液經(jīng)添加3%。的活性炭升溫至70°C，調(diào)節(jié)料液pH值在5.5，脫色35分鐘，然后經(jīng)精密過濾機(jī)將活性炭及雜質(zhì)過濾；
[0041]⑧脫色后的料液經(jīng)濃縮結(jié)晶，至濃縮后體積為濃縮前體積的1/6，然后降溫結(jié)晶，當(dāng)溫度降至20°C時(shí)，離心機(jī)高速離心，得濕粗品，其水分含量在17% ;
[0042]⑨粗品按照4% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的濃度投入脫色罐內(nèi)脫色、然后濃縮、結(jié)晶、離心、干燥、粉碎得到精制成品。
[0043]經(jīng)檢測，相同發(fā)酵條件下，本發(fā)明采用混合菌株發(fā)酵，與單一谷氨酸棒桿菌ATCC14309發(fā)酵相比，L-異亮氨酸產(chǎn)量提高了 26% ;
[0044]本發(fā)明獲得的L-異亮氨酸經(jīng)HPLC檢測，純度為99.0%，且外觀潔白透亮，雜氨基酸按量僅為1%，達(dá)到醫(yī)藥級(jí)產(chǎn)品的要求。
[0045]以上列舉的僅是本發(fā)明的最佳具體實(shí)施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種提取L-異亮氨酸的工藝，其包括以下步驟: 1)混合發(fā)酵；2)過濾；3)濃縮重溶；4)離子交換。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工藝，其特征在于，所述工藝包括如下步驟: . 1)混合發(fā)酵:將谷氨酸棒桿菌ATCC14309種子液和乳酸發(fā)酵短桿菌ATCC13869種子液按照2: 1的體積比混合，得到混合種子液，按照5%的接種量轉(zhuǎn)入發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，溫度30°C，PH值7.2，培養(yǎng)時(shí)間60小時(shí)，得到L-異亮氨酸發(fā)酵液； .2)過濾:將L-異亮氨酸發(fā)酵液采用陶瓷膜過濾，收集菌體蛋白和濾液； .3)濃縮重溶:將步驟2)獲得的濾液進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，蒸發(fā)至原體積的五分之一，然后添加與濃縮液相同體積的蒸餾水重溶，制得重溶液； .4)離子交換:步驟3)所得重溶液經(jīng)過離子交換去除雜質(zhì)，得到L-異亮氨酸料液，然后濃縮，濃縮液中L-異亮氨酸質(zhì)量濃度為10%;濃縮液中添加3%。質(zhì)量分?jǐn)?shù)的活性炭，隨后升溫至70°C，調(diào)節(jié)料液pH值在5.5，脫色35分鐘，然后過濾去除活性炭；脫色后的料液濃縮至原體積的1/6，然后降溫結(jié)晶，當(dāng)溫度降至20°C時(shí)，離心機(jī)高速離心，得粗品；將粗品投入脫色罐內(nèi)脫色，然后濃縮、結(jié)晶、離心、干燥、粉碎得到成品。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的工藝，其特征在于，所述谷氨酸棒桿菌ATCC14309種子液和乳酸發(fā)酵短桿菌ATCC13869種子液的濃度均為1 X 10sCFU/mL。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的工藝，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基組分為:葡萄糖12%、玉米漿5 %、牛肉膏1 %、七水硫酸鎂0.2 %、磷酸氫二鉀0.2%、硫酸亞鐵0.001%, VB10.0001%, pH 7.0，以上均為質(zhì)量百分比。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提取L-異亮氨酸的工藝，其包括：1)混合發(fā)酵；2)過濾；3)濃縮重溶；4)離子交換。本發(fā)明工藝發(fā)酵效率高，提取技術(shù)簡便、高效，具有廣闊的市場前景。
【IPC分類】C12P13/06, C12R1/13, C12R1/15, C12P39/00
【公開號(hào)】CN105274179
【申請?zhí)枴緾N201510744298
【發(fā)明人】唐永強(qiáng), 郭英熙, 王紹冰, 沈偉偉, 田輝, 姜守剛
【申請人】新疆阜豐生物科技有限公司
【公開日】2016年1月27日
【申請日】2015年10月28日