(3r,6s)-3,6-二取代哌嗪-2,5-二酮,其制備及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及了下面結(jié)構(gòu)式所示的小分子U-PA抑制劑，涉及它的制備方法和作為 U-PA抑制劑在抑制腫瘤侵襲和遷移、止血和抗炎方面的應(yīng)用。本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
[0002]

【背景技術(shù)】
[0003] 纖溶酶原激活系統(tǒng)由纖溶酶原激活劑（Pas)，纖溶酶原激活抑制劑（PAIs)和細(xì)胞 外纖溶酶原激活劑受體（PAR)組成。纖溶酶原激活系統(tǒng)涉及細(xì)胞遷移，血管生成，傷口愈 合，胚胎發(fā)育，腫瘤細(xì)胞擴散和轉(zhuǎn)移等一系列過程。在哺乳動物體內(nèi)主要有組織型纖溶酶原 激活劑（t-PA)和尿激酶型纖溶酶原激活劑（U-PA)兩種纖溶酶原激活劑。
[0004] 尿激酶型纖溶酶原激活劑（U-PA)是從人尿或腎細(xì)胞組織培養(yǎng)液中提取的一種絲 氨酸蛋白酶，屬雙鏈尿激酶型纖溶酶原活化劑（tcu-PA)，分子量為55000或33000,是外源 性纖維溶解系統(tǒng)的激活劑。U-PA可W直接裂解纖溶酶原的精氨酸巧60)-鄉(xiāng)氨酸（561)膚 鍵，使無活性的單鏈纖溶酶原轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘碾p鏈纖溶酶。
[0005] 在腫瘤組織中，U-PA激活纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶，纖溶酶直接或間接造成細(xì)胞外 基質(zhì)降解，進一步導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的浸潤，轉(zhuǎn)移和血管生成，促進腫瘤的增殖。在血液循環(huán)中， U-PA通過激活纖溶酶原參與調(diào)節(jié)血管內(nèi)凝血-纖溶的平衡，對抑制血栓起重要作用。
[0006] 在炎癥應(yīng)答過程中，U-PA通過與炎癥細(xì)胞表面的U-PAR結(jié)合，參與調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞 對血管和組織的滲透能力，促進炎癥細(xì)胞向炎癥部位遷移，促進炎癥反應(yīng)W及炎癥因子的 釋放，而炎癥因子的釋放又會誘導(dǎo)U-PA表達上升。
[0007] 由于U-PA的酶活性貫穿在腫瘤-纖溶-炎癥復(fù)雜的交叉聯(lián)系中，所W影響U-PA 的活性會影響復(fù)雜的交叉聯(lián)系。也就是說，發(fā)明優(yōu)秀活性的U-PA抑制劑對于抑制U-PA在 腫瘤-血栓-炎癥交叉聯(lián)系有重要意義。送種意義體現(xiàn)在70%W上癌癥病人死于癌轉(zhuǎn)移； 有大約10%的癌癥晚期病人出現(xiàn)出血癥狀，例如出現(xiàn)幾乎無法預(yù)測鼻，咽，肺或胃腸道大 出血；摘除腫瘤手術(shù)發(fā)生的出血，也惡化病人的預(yù)后。針對送種狀況，本發(fā)明提出了（3R， 6巧-3- (4- 了氨基）-6-(剛巧-3-己基）-脈嗦-2, 5-二麗，其制備及治療作用。
[0008] 此前，發(fā)明人曾報道下面結(jié)構(gòu)的二麗脈嗦包括CIPPC是U-PA抑制劑（結(jié)構(gòu)見圖 1)，有優(yōu)秀的止血活性。Inmol/kg劑量下，CIPPC能顯著降低小鼠鼠尾出血時間巧3,34]。 不幸的是，在lOnmol/kg劑量下CIPPC能促進血栓生成。血栓是腫瘤本人重要的并合癥，是 造成腫瘤本人死亡的重要因素。CIPPC能促進血栓生成的作用為腫瘤病人帶來了新的威脅。 對比之下，（3R，6巧-3-(4- 了氨基）-6-(巧隙-3-己基）-脈嗦-2, 5-二麗的意想不到的優(yōu) 勢是，除了與CIPPC-樣有優(yōu)秀的止血活性外，還有抑制腫瘤細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移，抑制腫瘤本 人并發(fā)炎癥作用，同時不會引起血栓形成。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的第一個內(nèi)容是提供下面結(jié)構(gòu)式的U-PA抑制劑（3R，6巧-3-(4- 了氨 基）-6-(巧隙-3-己基）-脈嗦-2, 5-二麗；
[0010]
[0011] 本發(fā)明的第二個內(nèi)容是提供（3R，6S)-3-(4-了氨基）-6-(日引巧-3-己基）-脈 嗦-2, 5-二麗的制備方法，該方法包括下面四個反應(yīng)步驟：
[0012] (1)在DCC和冊Bt存在下D-T巧-OBzl在無水四氨巧喃中與kBoc-Lys狂）縮合為 kBoc-Lys狂）A-hp-〇Bzl;
[001引 似在氯化氨-己酸己醋溶液中L-Boc-Lys(Z) -D-T;rp-0Bzl脫去Boc生成kLys狂）A-hp-0Bzl;
[0014] (3)在己酸己醋和5 %Na肥〇3存在下I^-Lys狂)-D-T巧-OBzl生成（3S， 6巧-3-(4-了氨基予基）-6-(日引巧-3-己基）-脈嗦-2, 5-二麗；
[0015] (4)在Pd/C和&存在下，在甲醇中（3R，6S)-3-(4-了氨基予基）-6-(日引巧-3-己 基）-脈嗦-2, 5-二麗反應(yīng)生成（3R, 6S) -3- (4- 了氨基）-6-(剛B朵-3-己基）-脈嗦-2， 5-二麗。
[0016] 上面的四個反應(yīng)步驟可W用圖2的合成路線描述。
[0017] 本發(fā)明的第H個內(nèi)容是評價小分子U-PA抑制劑（3R，6S) -3- (4- 了氨基）-6-(剛 巧-3-己基）-脈嗦-2, 5-二麗在抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移方面、W及止血和抗炎等方面的 作用。
【附圖說明】
[001引圖1此前發(fā)明人報道的U-PA抑制劑二麗脈嗦CIPPC的結(jié)構(gòu)。
[0019] 圖2合成（3R，6巧-3-(4-了氨基）-6-(日引巧-3-己基）-脈嗦-2, 5-二麗的路線 Li)DCC，HOBt，NMM，THF;ii)HCl/EA(4N);iiDEA，5%rfeW〇3(3a)orEA，TEA，8(rC(3b，3c); iv)CH3〇H，Pd/C，&。
[0020] 圖3 (3R，6巧-3-(4-了氨基）-6-(剛巧-3-己基）-脈嗦-2, 5-二麗在體外對UK 激活纖溶酶原活力的影響。其中1列為單組分的人纖溶酶原（PLG)，2列為UK與PLG的 共賠育；3列為IOOyg(3R，6巧-3-(4-了氨基）-6-(剛巧-3-己基）-脈嗦-2,5-二麗和 5ULUK(400U/血）與5ULPLG(5mg/血）的共賠育組分；4列為50U邑伽，6S) -3- (4-T氨 基）-6-(巧隙-3-己基）-脈嗦-2，5-二麗和5ULUK(400U/mL)與5ULPLG巧mg/mL)的共賠 育組分；5列為10yg(3R，6巧-3- (4- 了氨基）-6-(日引巧-3-己基）-脈嗦-2,5-二麗和5yL UK(400U/mL)與 5ULPLG巧mg/mL)的共賠育組分；6 為 500Ug的EACA和 5ULUK(400U/ mL)與 5ULPLG巧mg/mL)的共賠育組分；7 為 250U邑的EACA和 5ULUK(400U/mL)與 5UL PLG巧mg/mL)的共賠育組分。
【具體實施方式】
[0021] 為了進一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。送些實施例完全是例證性的，它 們僅用來對本發(fā)明進行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā)明的限制。
[0022] 實施例 1 制備L-Boc-Lys狂)-D-T巧-OBzl(1)
[0023] 將1. 9g巧.Ommol)kBoc-Lys(幻混懸于20血無水四氨巧喃，室溫攬拌下向溶液中 加入0. 675g巧.0mmol)H0Bt，冰浴攬拌下加入1. 133g巧.5mmol)DCC，得到反應(yīng)液I，冰浴下 攬拌30分鐘。將1. 47g(5. 0mmol)D-T巧-OBzl混懸于20血無水四氨巧喃中，然后逐漸加入 NMM，調(diào)節(jié)抑至8-9,得到反應(yīng)液II。將反應(yīng)液II加入反應(yīng)液I中，先在冰浴下攬拌比，再在 室溫攬拌，TLC監(jiān)測至原料點消失。后處理；減壓過濾除去DCU，將濾液減壓濃縮除去四氨巧 喃，殘留物用ISOmL己酸己醋溶解，將得到的溶液置于250mL分液漏斗中，依次用5%K服〇4 水溶液洗和飽和化Cl水溶液各洗3次，己酸己醋層用無水Na2S〇4干燥30min，減壓過濾， 濾液減壓濃縮至干，得到的黃色泡狀物，經(jīng)硅膠柱層析純化（CH2CI2:CHsOH=IOO: 1~ 20 : 1)，得到 2. 722g(83%)標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/e) ;657[M+H]\
[0024] 實施例 2 制備kLys狂)-D-T巧-OBzI(2)
[00巧]將純品2. 62g(4mmol)kBoc-Lys狂)-D-T巧-OBzl(1)置于100血茄瓶中，冰浴攬拌 下緩慢向反應(yīng)瓶中滴加30mL4N氯化氨-己酸己醋溶液，加干燥管，冰浴攬拌下反應(yīng)4小時 后TLC監(jiān)測原料點消失，終止反應(yīng)。后處理；攬拌下用水泉將反應(yīng)液減壓抽干，加己酸己醋 溶解后再次用水泉減壓抽干，重復(fù)H次；加無水己離充分混懸后靜置，傾倒出己離，抽干產(chǎn) 物，重復(fù)H次，得2.08g(94. 5%)標(biāo)題化合物，為淡黃色粉末。ESI-MS(m/e) :557[M+田+。
[0026] 實施例3制備（3R，6S)-3-(4-了氨基予基）-6-(日引巧-3-己基）-脈嗦-2, 5-二 麗做
[0027] 將 1. 83g(3. 29mmol)化合物kLys狂）-D-T巧-Cffizl(2)WSOmL己酸己醋溶 解，用H己胺調(diào)抑至9,油浴8(TC反應(yīng)6小時，TLC顯示原料點基本消失。后處理：將 反應(yīng)液直接用硅膠拌樣，硅膠柱層析純化（CH2CI2:CHsOH=IOO: 1-20 : 1)，得到 0.913g(62% )標(biāo)題化合物，為無色固體。ESI-MS(m/e) ;449[M+田[a]D= +45.0。（C= 0. 5,CH3OH).Ihnmr(300MHz，DMS0-d6):5/ppm=10. 89(S，1H)，8.03(S，1H)，7.85(S，1H), 7. 56(d，J= 9. 0Hz，lH)，7. 35(m，6H)，7. 19(t，J=6. 0Hz，lH)，7. 05(m，2H)，6. 95(t，J= 6.OHz，IH)，4. 99(s，2H)，4. 07(s，IH)，3. 25 (dd，J= 3.OHz，J= 15.OHz，IH)，3. 09 (dd，J= 3.OHz，J= 15. 0Hz，lH)，2. 99(s，lH)，2. 91(q，J=6. 0Hz，2H)，1.48(m，2H)，1.24(m，2H)， 1. 16 (m, 2H)。
[002引 實施例4制備（3R，6S)-3-(4-了氨基）-6-(巧隙-3-己基）-脈嗦-2, 5-二麗（4)
[0029]將 0.IOSg(0. 24mm〇U化合物（3S，6R) -3- (4- 了氨基予基）-6-(日引巧-3-己 基）-脈嗦-2,5-二麗（3)置于50血反應(yīng)瓶中，加入10血甲醇溶解，向溶液中加入20mg Pd/C，通入&，室溫攬拌反應(yīng)48小時，TLC顯示原料的基本消失，濾去Pd/C，減壓濃縮得 42mg(55. 5% )標(biāo)題化合物，為無色粉末。ESI-MS(m/e) :315[M+H]+.Mpl83-185°C.IR(邸r): 3223,2926,2862，1670，1456，1327，1099,742cmi.陽〇 = -48.9。k= 0. 28，CH3〇H).1h NMR(300MHz，DMS0-d6) ;S/ppm= 10. 92(s，lH)，8. 04(s，lH)，7. 88(s，lH)，7. 56(d，J= 9. 0Hz，lH)，7. 31(d，J= 9. 0Hz，lH)，7. 06(s，lH)，7. 04(t，J= 9Hz，lH)，6. 94(t，J= 9Hz， 1H)，4. 07(s，lH)，3. 26(dd，J= 3Hz，J= 12Hz，lH)，3. 02(dd，J=6.OHz，J= 15Hz，lH), 2. 98 (m，2田，2. 44 (m，2H)，1. 21 (m，2田，1. 09 (m，2H)."CNMR(200MHz，DMSO-de) : 5/ppm= 168. 00,167. 57,135.