一種分離自臭辣樹的化合物及其抗蟲用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明設(shè)及植物病害防治技術(shù)，具體設(shè)及分離自臭辣樹的化合物及其抗蟲用途?！颈尘凹夹g(shù)】 陽00引臭辣樹（Tetradiumgl油ri化Iium)，蕓香科四數(shù)花屬，為落葉喬木，多生于向陽的 山坡地上，濕潤樹叢中，分布于江西、浙江及長江上、下游各地。臭辣樹W果入藥，主治麻疹 后咳嗽。目前對(duì)于臭辣樹果實(shí)的認(rèn)識(shí)僅僅是具有藥用活性，未曾有研究報(bào)道過臭辣樹果實(shí) 的抗蟲活性。 陽003]南方根結(jié)線蟲（Meloidogyneincognita)是一種高度專化型的雜食性植物病原 線蟲，雌雄異體，主要危害各種蔬菜的根部，表現(xiàn)為側(cè)根和須根較正常增多，并在幼根的須 根上形成球形或圓錐形大小不等的白色根瘤，有的呈念珠狀，被害株地上部分生長矮小、緩 慢、葉色異常，結(jié)果少，產(chǎn)量低，甚至造成植株提早死亡。目前，對(duì)南方根結(jié)線蟲的防治主要 采用化學(xué)防治的方法，常用殺線蟲劑多為有機(jī)憐或氨基甲酸醋類的單劑或復(fù)配制劑，如嚷 挫憐、硫線憐、涕滅威、克百威等。化學(xué)防治在根結(jié)線蟲的防治過程中占有重要地位，見效 快、防效好，是果農(nóng)、菜農(nóng)深受青睞的方法。但目前使用的化學(xué)殺線劑存在毒性大、環(huán)境污染 嚴(yán)重、易產(chǎn)生抗藥性等諸多問題。因此，隨著農(nóng)民環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)和線蟲抗藥性的增加，化 學(xué)殺線蟲劑的應(yīng)用前景黯淡。因此，需要開發(fā)一種毒性小、不易使線蟲產(chǎn)生抗藥性的環(huán)保型 藥物，提高蔬菜的產(chǎn)量和品質(zhì)，保護(hù)人類健康。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為滿足上述領(lǐng)域的需求，本發(fā)明提供一種從臭辣樹的乙醇浸膏中分離的新化合 物，該化合物能夠有效殺滅根結(jié)線蟲。本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)的技術(shù)方案如下： 陽00引如式（I)所示的化合物：
[0006]
[0007] 權(quán)利要求I所述的化合物與無機(jī)酸或有機(jī)酸形成的鹽。
[0008] 權(quán)利要求1所述的化合物或權(quán)利要求2所述的鹽在防治線蟲中的用途。
[0009] 權(quán)利要求1所述的化合物或權(quán)利要求2所述的鹽在制備抗蟲制品中的用途。
[0010] 一種抗蟲制品，其特征在于，其抗蟲活性成份包含權(quán)利要求1所述的化合物或權(quán) 利要求2所述的鹽。
[0011] 所述抗蟲制品的制備方法，包括W下步驟：W臭辣樹為原料進(jìn)行分離提純并獲得 權(quán)利要求1所述的化合物或權(quán)利要求2所述的鹽。
[0012] 所述分離提純包括采用乙醇浸提、=氯甲燒萃取和硅膠柱層析。
[0013] 臭辣樹在防治線蟲中的用途。
[0014] 一種抗蟲制品，其特征在于，其藥效成分為臭辣樹的乙醇浸膏。
[0015] 本發(fā)明提供一種新化合物，其結(jié)構(gòu)如圖1所示，所述新化合物是采用硅膠 柱層析方法從臭辣樹乙醇浸膏中分離而得。經(jīng)鑒定，該化合物是一種生物堿，為無 色針狀結(jié)晶，艦化祕(mì)鐘反應(yīng)顯陽性，分子式為C17H15N3O,分子量為277,其化學(xué)命名是 7,8, 13, 14-tet;r址y化obenzo[3, 4] [1,引diazonino[6, 7-b]indol-5 巧H) -one。將所述化合 物對(duì)南方根結(jié)線蟲二齡幼蟲進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，結(jié)果表明該化合物具有殺線蟲活性。與殺 線蟲化合物巧喃丹相比，新化合物的LDw是陽性對(duì)照巧喃丹的1.8倍，與陽性對(duì)照的殺線活 性相當(dāng)，有望成為新一代生物農(nóng)藥。
[0016] 本發(fā)明分離獲得的新化合物，可使用二甲苯、甲苯、。。芳控、乙醇、乙臘等作為溶 劑，加入吐溫、甘油等作為助溶劑，制成抗蟲制品，用于殺滅線蟲，提高蔬菜的產(chǎn)量和品質(zhì)。 由于本發(fā)明分離獲得的新化合物是從臭辣樹植物中提取而得，在自然條件下易分解，因此 不會(huì)引起生物富集現(xiàn)象，并且對(duì)人畜安全，可W作為天然農(nóng)藥長期使用而不會(huì)產(chǎn)生環(huán)境污 染的問題。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述抗蟲制品也可W包含化學(xué)上相容的其它的本領(lǐng) 域已知的具有抗蟲活性的化合物，從而增強(qiáng)抗蟲效果。
[0017] 在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，將本發(fā)明的新化合物與無機(jī)酸或有機(jī)酸形成生理上可 接受的鹽，使化合物結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定，有利于保存和制備抗蟲制品，發(fā)揮抗蟲活性。
[0018] 實(shí)驗(yàn)證明，臭辣樹的乙醇浸膏也具有殺線蟲活性，可將其粗提物直接用于殺滅線 蟲，或與適合的溶劑及輔助試劑一起制成抗蟲制品。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，可W將臭 辣樹的乙醇浸膏與本領(lǐng)域公知的具有殺蟲活性的其它化合物同時(shí)使用，發(fā)揮綜合的抗蟲作 用。
【附圖說明】
[0019] 圖1.式（I)化合物的結(jié)構(gòu)式 W20] 圖2.式（I)化合物的Ih-NMR譜圖 [0021] 圖3.式訊化合物的"C-NMR譜圖 陽02引 圖4.式（I)化合物的HMBC譜圖
【具體實(shí)施方式】
[0023] 下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明，需要理解的是，下述實(shí)施方式僅作 為解釋說明，而不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的任何限制。
[0024] 生物材料：
[00巧]臭辣樹：采自浙江溫州麗水。
[00%] 南方根結(jié)線蟲：為中國農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲系人工飼養(yǎng)。
[0027] 實(shí)驗(yàn)儀器：
[0028] BrukerACF300 和AMX500 超導(dǎo)核磁共振儀，瑞:tEJnaker公司；
[0029]玻璃色譜柱：直徑與長度 85X550mm，40X400mm、35X400mm、30X400、 25X400mm、20X350mm，購于北京博美玻璃有限公司。
[0030] 材料與試劑：
[0031] 層析硅膠（200-300目）采自青島海洋研究所；
[0032] 薄層層析硅膠板（GF254)購于青島海洋化工有限公司；
[0033] 石油酸、乙酸乙醋、乙醇、丙酬等均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；
[0034] 95 %酒精采購自北京廣達(dá)恒益有限公司。
[0035] 本實(shí)施例未特別說明的生物化學(xué)試劑均為本領(lǐng)域常規(guī)試劑，可通過本領(lǐng)域常規(guī)方 法配制而得，或商購獲得，規(guī)格為實(shí)驗(yàn)室純級(jí)即可。
[0036] 實(shí)施例1、式（I)化合物的分離
[0037]1、臭辣樹乙醇浸膏的制備
[0038] 將干燥的臭辣樹果實(shí)依次用95%乙醇、75%乙醇、50%乙醇和蒸饋水分別浸泡3 天，在50°C水浴鍋中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至沒有酒精流出，然后經(jīng)過=氯甲燒萃取，將水相棄 去，留=氯甲燒相在40°C水浴鍋中進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮至沒有酒精流出，除去=氯甲燒，即得 到=氯甲燒萃取物，即本發(fā)明中的臭辣樹果實(shí)乙醇浸膏。
[0039]2、提取物的一級(jí)硅膠柱層析分離 W40] (1)確定起始洗脫劑
[0041] 首先采用薄層層析確定起始洗脫劑，具體步驟為：取1yL步驟1獲得的乙醇浸膏， 用丙酬稀釋，用毛細(xì)管點(diǎn)樣于GF254薄層色譜板上，在層析缸中加入1血按一定比例配比 (100:2~0:100)的石油酸：乙酸乙醋洗脫劑。將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開劑中，浸入展 開劑的深度為距薄層板底邊0. 3~0. 5cm，蓋上缸蓋，待展開至距薄層板上沿0. 5~I.Ocm時(shí)，取出薄層板，用電吹風(fēng)吹干溶劑，在紫外燈下觀察展開情況，并將薄層板放入艦缸中顯 色，當(dāng)最前沿斑點(diǎn)的Rf值在0. 2~0. 3時(shí)，即可確定此展開劑為起始洗脫劑。最后確定的 起始洗脫劑的石油酸：乙酸乙醋配比是100:2。 陽0創(chuàng) 似裝柱
[0043] 采用濕裝法裝柱，將玻璃色譜柱（85X550mm)垂直固定在鐵架臺(tái)上，在柱的下端 塞少許脫脂棉花，倒入一藥匙石英砂，防止硅膠泄漏。將200~300目硅膠放入燒杯中，加 入適當(dāng)量的起始洗脫劑，經(jīng)充分?jǐn)埌瑁瑢⒐枘z內(nèi)的氣泡除去后再加入柱內(nèi)，一邊沉降一邊添 加。硅膠加完后，仍使起始洗脫劑流一段時(shí)間，然后使色譜柱中高于硅膠面上的起始洗脫劑 幾乎全部流入接受瓶內(nèi)。然后用橡皮塞在色譜柱外敲打，將硅膠柱內(nèi)的氣泡趕凈。色譜柱 裝好后，使其靜置過夜，W壓實(shí)硅膠，提高分離效果。
[0044] (3)加樣
[0045]樣品的加入，采用干法加樣。待硅膠柱靜置過夜后，先將色譜柱中硅膠面上的多余 洗脫劑放出。用丙酬溶解樣品，加入適當(dāng)量的200-300目硅膠拌勻，用吹風(fēng)機(jī)吹干溶劑成粉 末狀，用小勺將拌勻后的樣品緩慢加入色譜柱中。樣品加入后，用滴管吸取少量起始洗脫劑 緩緩沖洗色譜柱壁，打開活塞將洗脫劑慢慢放出，待柱面上沒有洗脫劑時(shí)，將一塊脫脂棉平 鋪于柱面，壓上玻璃