一種用于治療乳腺癌的新的檸檬苦素類化合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及從積殼的干燥未成熟果實中分離得到的一種 具有治療乳腺癌作用的巧樣苦素類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 積殼為蕓香科植物酸澄（CitrusaurantiumL.)及其栽培變種的干燥未成熟果 實。7月果皮尚綠時采收，自中部橫切為兩半，曬干或低溫干燥。味苦、辛、酸。性微寒。歸 脾、胃經(jīng)。具有理氣寬中，行滯消脹之功效。用于胸脅氣滯，脹滿疼痛，食積不化，疲飲內(nèi)停， 臟器下垂。積殼是中藥典型的理氣藥之一，廣泛應(yīng)用于中醫(yī)臨床。
[0003] 積殼所含化學成分較為復雜，目前已知的有效成分主要有黃酬類、揮發(fā)油類、生物 堿類、香豆素類和一些微量元素等。積殼中黃酬類成分主要有：澄皮巧、新澄皮巧、抽皮巧、 抽皮蕓香巧、異抽皮巧、陳皮素、抽皮素、川陳皮素、紅橘素、5-0-去甲基川陳皮素、去甲川陳 皮素、澄黃酬、4'，5, 7, 8-四甲氧基黃酬、4-0-甲基黃琴素、3-徑基-3'，4'，5, 6, 7, 8-六甲氧 基黃酬和5, 6-二徑基-7, 4'-二甲氧基黃酬等。揮發(fā)油主要有巧樣締、芳精醇、2-十一燒酬、 丫-松油締。積殼中所含的生物堿類活性成分主要有辛弗林、N-甲基酪胺、酪胺、大麥芽堿 等。積殼中所含的香豆素類成分主要有葡萄內(nèi)醋、傘形花內(nèi)醋、異前胡素、馬明丙酬化合物、 潑朗弗林、異米拉素、花椒毒酪、5-異戊締氧基線巧喃香豆素、5-甲氧基線巧喃香豆素等。
[0004] 積殼中的澄皮巧具有抗炎、抗氧化、抗癌和保肝等作用；抽皮巧具有抗炎鎮(zhèn)痛、降 血糖等作用；川陳皮素具有抗炎，抗病毒，抗氧化等藥理作用；川陳皮素具有很好的抗腫瘤 的作用；抽皮素具有抗抑郁、保肝、抗氧化、改善大鼠學習記憶障礙、抗血小板聚集的作用。 積殼揮發(fā)油的主要成分是巧樣締。在臨床上，巧樣締膠囊已上市，主要用于膽囊炎、膽管炎、 膽結(jié)石和膽道術(shù)后綜合征等的治療。在積殼揮發(fā)油中，另一重要成分為芳精醇，具有防腐、 抗菌、抗病毒和鎮(zhèn)靜等作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從積殼的干燥未成熟果實中分離得到的一種具有治療 乳腺癌作用的巧樣苦素類化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得W實現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008]
[0009] 所述的化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：(a)將積殼的干燥未成熟果 實粉碎，用75~85 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化） 步驟（a)中乙酸乙醋萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個柱體積，再用75%乙 醇洗脫10個柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（C)步驟化） 中75 %乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、45:1、25:1、10:1和1:1的二 氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟（C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次 用體積比為15:1、10:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟（d)中 組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗 脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0010] 進一步地，所述大孔樹脂為Dioi大孔吸附樹脂。
[0011] 進一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為80 %。
[0012] 一種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學上可接受的 載體。
[0013] 所述的化合物（I)在制備治療乳腺癌的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備治療乳腺癌的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學上可接受的、 對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 W及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物W單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】 陽〇1引圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物（I)理論ECD值與實驗ECD值比較；
[0020] 圖3為不同劑量化合物（I)對乳腺癌細胞增殖活力的影響；
[0021] 圖4為不同劑量化合物（I)對乳腺癌細胞調(diào)亡的影響。
【具體實施方式】
[0022] 下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解，可W對 本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。 陽02引實施例1 :化合物（I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0024] 試劑來源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[00巧]制備方法：（a)將積殼的干燥未成熟果實（IOkg)粉碎，用80%乙醇熱回流提取 (2化X3次），合并提取液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋0LX3 次）和水飽和的正下醇（化X3次）萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（431g) 和正下醇萃取物；(b)步驟（a)中乙酸乙醋萃取物用DlOl大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗 脫8個柱體積，再用75 %乙醇洗脫10個柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙 醇洗脫物浸膏（172g) ;(c)步驟化）中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比 為80:1 (8個柱體積）、45:1 (8個柱體積）、25:1 (8個柱體積）、10:1 (10個柱體積）和1:1 (5 個柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟（C)中組分4 (65g)用正相 硅膠進一步分離，依次用體積比為15:1 (8個柱體積）、10:1 (10個柱體積）和5:1 (8個柱體 積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟（d)中組分2 (37g)用十八烷基娃 燒鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-12個柱體 積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)(45mg)。 陽0%] 結(jié)構(gòu)確證：白色無定形粉末。HR-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z463. 2110,結(jié)合核磁 特征可得分子式為〔2班32〇6,不飽和度為11。核磁共振氨譜數(shù)據(jù)5H(ppm，DMS0-de，500MHz):H-I(6. 68,d，J= 12. 5)，H-2 (5. 79,d，J= 12. 5)，H-5 (2. 22,dd，J= 13. 2,4. 0)，H-6 (1. 77， dd，J= 16. 0,4. 0)，H-6 (I. 57,ddd，J= 16. 0,13. 2,4. 0)，H-7 (4. 54,s)，H-9 (2. 53,d， J= 4. 0)，71，q，J= 4. 0)，H-12(3. 42,t，J= 6.W，H-15(4. 44,q，J= 3.W， H-16 (I. 55,ddd，J= 12. 0,10. 5, 3.W，H-16 (I. 64,dt，J= 12. 0, 5.W，H-17 (3. 19,dd，J =10. 5, 5. 5)，H-18 (0. 55,s)，H-19 (I. 26,s)，H-21 (7. 25,s)，H-22 化.34,s)，H-23 (7. 37， s)，H-28(l. 18，s)，H-29(1.29，s)，H-30(1.42，s)，15-0H(4. 73，d，J= 3. 5);核磁共振碳譜 數(shù)據(jù) 5C(卵m，DMSO-de，125MHz) : 15