0. 05, #表示與模型組比較P< 0. 05
[0103] 由表7可知，樣品二膚胸腺指數(shù)、脾指數(shù)和肝臟指數(shù)高于模型組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)（P < 0. 0巧。
[0104] 3. 2對(duì)免疫低下小鼠吞瞻指數(shù)和吞瞻系數(shù)的影響
[0105] 表8對(duì)免疫低下小鼠吞瞻指數(shù)和吞瞻系數(shù)的影響
[010引注*表示與正常組相比P< 0. 05, #表示與模型組比較P< 0. 05
[0109] 由表8可知，樣品二膚吞瞻指數(shù)和吞瞻系數(shù)高于模型組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)（P< 0. 05)。
[0110] 3. 3對(duì)免疫低下小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)和血清中溶血素生成的影響
[0111] 表9對(duì)免疫低下小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)和血清溶血素生成的影響
[0113] 注*表示與正常組相比P< 0. 05, #表示與模型組比較P< 0. 05
[0114] 由表9可知，樣品二膚小鼠血清中溶血素水平高于模型組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0115] (P< 0. 05)。上述實(shí)驗(yàn)表明該二膚可W提高免疫力低下的人群。
[0116] 實(shí)施例8提高老齡鼠免疫機(jī)能
[0117] 1、實(shí)驗(yàn)材料
[om] 樣品；按實(shí)施例1制得的樣品。
[0119] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；SPF級(jí)80周ICR雄性小鼠，SPF級(jí)6周齡ICR雄性小鼠10只，分組進(jìn)行 實(shí)驗(yàn)。
[0120] 實(shí)驗(yàn)方法；將大鼠80周齡老鼠隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性組及樣品二膚-CD14劑量組， 配成）。0. 5mg/ml每組10化共16組；并同步設(shè)置6周齡的正常小鼠組，每組10只。將樣 品配制成受試液后給小鼠灌胃，正常組和模型組給予等量生理鹽水，陽(yáng)性組按20mL/kg給 予黃茂精，連續(xù)給藥30天。
[0121] 2、提高免疫力功能評(píng)價(jià)方法
[0122] 通過(guò)實(shí)驗(yàn)前后免疫低下小鼠免疫器官指數(shù)：胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、肝指數(shù)和吞瞻指 數(shù)、吞瞻系數(shù)，用分光光度法測(cè)定小鼠血清中溶血素水平、腦組織中MDA、SOD和總抗氧化的 能力。
[0123] 2、增強(qiáng)免疫力功能評(píng)價(jià)結(jié)果
[0124] 2. 1對(duì)老齡鼠臟器指數(shù)的影響 [01巧]表10老齡鼠臟器指數(shù)的影響
[0127] 注*表示與正常組相比P< 0. 05, #表示與模型組比較P< 0. 05
[0128] 由表10可知，樣品二膚胸腺指數(shù)、脾指數(shù)和肝臟指數(shù)高于模型組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)（P < 0. 0巧。
[0129] 2. 2對(duì)老齡鼠吞瞻指數(shù)和吞瞻系數(shù)的影響
[0130] 表11對(duì)老齡鼠吞瞻指數(shù)和吞瞻系數(shù)的影響
[0132] 注*表示與正常組相比P< 0. 05, #表示與對(duì)照組比較P< 0. 05
[0133] 由表11可知，樣品二膚吞瞻指數(shù)和吞瞻系數(shù)高于模型組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)（P< 0. 05)。
[0134] 2. 3對(duì)老齡鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)和血清中溶血素生成的影響
[0135] 表12對(duì)老齡鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)和血清溶血素生成的影響
[013引注*表示與正常組相比P< 0. 05, #表示與對(duì)照組比較P< 0. 05
[0139] 由表12可知，樣品二膚小鼠血清中溶血素水平高于模型組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（P < 0. 0巧。
[0140] 2. 4對(duì)老齡鼠腦組織中衰老相關(guān)指標(biāo)的影響
[0141] 表13老齡鼠腦組織中衰老相關(guān)指標(biāo)的影響
[0142]
[014引注*表示與正常組相比P< 0. 05, #表示與對(duì)照組比較P< 0. 05
[0144] 由表13可知，樣品二膚MDA低于模型組，SOD和T-AOC高于模型組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)（P < 0. 0巧。
[0145] 上述試驗(yàn)表示二膚二膚可W很好的提高老年人免疫能力。
[0146] 實(shí)施例9安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)
[0147] (1)樣品；按實(shí)施例1制得的二膚二膚。
[014引 似實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；清潔級(jí)昆明種小鼠和SD大鼠
[0149] (3)安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)方法；對(duì)二膚進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)（MTD法）、遺傳毒性實(shí)驗(yàn)和 大鼠30天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。其中遺傳毒性實(shí)驗(yàn)包括Ames實(shí)驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn) 和小鼠精子崎形實(shí)驗(yàn)。
[0150] (4)安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果
[015。 急性經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn)；SD大鼠和昆明種小鼠的急性經(jīng)口MD均大于20g/kg.bw屬于 實(shí)際無(wú)毒類(lèi)。遺傳毒性實(shí)驗(yàn)Ames實(shí)驗(yàn)；小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)和小鼠精子崎形實(shí) 驗(yàn)3項(xiàng)遺傳毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陰性，表明本產(chǎn)品無(wú)致突變和致崎作用。大鼠30天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)： 最高劑量為人體推薦量的100倍，本產(chǎn)品未引起大鼠整體健康狀況生理生化功能和器官組 織形態(tài)學(xué)等各項(xiàng)重要指標(biāo)的異常變化。
[0152] W上試驗(yàn)表明了本專(zhuān)利的二膚可W具有消炎、鎮(zhèn)痛、創(chuàng)面修復(fù)，治療胃潰瘍，免疫 提局等等作用。
[0153] 所述的僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域中的普通技人員 來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明核必技術(shù)特征的前提下，還可W做出若干改進(jìn)，送些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng) 視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種二肽，其特征在于，由脯氨酸和個(gè)氨基酸殘基組成，分子量為186. 23,其氨基酸 序列如SEQID: 1所示。2. -種權(quán)利要求1所述二肽的制備方法，其特征在于包括如下的步驟： a. 合成順序?yàn)閺腃端到N端；取1倍摩爾當(dāng)量的樹(shù)脂放入多肽合成儀反應(yīng)器中，加入 DCM(二氯甲烷）溶脹半小時(shí)，然后抽掉DCM，加入序列中第一個(gè)Fmoc保護(hù)的氨基酸脯氨酸 10mmol，2倍摩爾當(dāng)量的DIEA(二異丙基乙胺），適量的DMF(二甲基甲酰胺）、DCM溶液(適 量是指以可使樹(shù)脂充分鼓動(dòng)起來(lái)為宜)，用氮?dú)夤呐莘磻?yīng)60min;然后加入約5倍摩爾當(dāng)量 甲醇，反應(yīng)半小時(shí)，抽掉反應(yīng)液，用DMF、甲醇洗凈； b. 加入適量哌啶去除Fmoc(9-芴甲氧羰基）保護(hù)基，洗凈，茚三酮檢測(cè)； c. 往反應(yīng)器中加入序列中第二個(gè)氨基酸丙氨酸(也為2倍摩爾當(dāng)量)，2倍摩爾當(dāng)量 HBTU(苯并三氮唑-N，N，Ν'，Ν' -四甲基脲六氟磷酸鹽）及DIEA，氮?dú)夤呐莘磻?yīng)半小時(shí)，抽掉 液體，用DMF，甲醇洗凈，茚三酮檢測(cè)； d. 將樹(shù)脂用氮?dú)獯蹈珊?，從反?yīng)柱中取下并稱(chēng)取重量，倒入燒瓶中，然后往燒瓶中加一 定量的95%TFA(三氟乙酸）切割液，震蕩反應(yīng)2h，目的是將多肽從樹(shù)脂載體上裂解下來(lái)并 去除氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)； e. 濾掉樹(shù)脂，得到濾液，然后向?yàn)V液中加入大量乙醚，析出粗產(chǎn)物，然后離心，清洗即可 得到該序列的粗產(chǎn)物； f. 分析提純和質(zhì)譜檢測(cè)：用ESI(電噴霧電離)離子源質(zhì)譜儀檢測(cè)該序列分子量的正確 性，用高效液相色譜將粗品提純至要求純度； g. 收集純化好的目標(biāo)寡肽溶液放入凍干機(jī)中進(jìn)行濃縮，凍干成白色粉末。3. -種如權(quán)利要求1所述的二肽在制備抗炎或鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。4. 一種如權(quán)利要求1所述的二肽在制備修復(fù)創(chuàng)面藥物中的應(yīng)用。5. -種如權(quán)利要求1所述的二肽在制備治療皮膚外傷藥物中的應(yīng)用。6. -種如權(quán)利要求1所述的二肽在制備治療消化道潰瘍藥物中的應(yīng)用。7. -種如權(quán)利要求1所述的二肽在制備免疫提高藥物中的應(yīng)用。8. 權(quán)利要求1所述的二肽可作為普通食品、保健品或者藥品的組成部分。9. 含有權(quán)利要求1所述的一種或多種寡肽的組合物，其中含有藥學(xué)可以接受的載體。10. 權(quán)利要求9所述的組合物可以以藥物制劑形式存在，該藥物制劑形式藥物組合物 可以按照制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種二肽分子及其制備方法和應(yīng)用，具體公開(kāi)了脯-丙二肽的氨基酸序列如SEQID:1所示，可以采用合成，提取或者基因工程等方式制備二肽，二肽在制備治療抗炎鎮(zhèn)痛、創(chuàng)面修復(fù)以及提高免疫的藥物中有較好的治療效果。
【IPC分類(lèi)】A61P1/04, A61K38/05, C07K5/078, C07K1/06, C07K1/04, A61P17/02, A61P37/04, A61P29/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105294830
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410272579
【發(fā)明人】陳光健
【申請(qǐng)人】陳光健
【公開(kāi)日】2016年2月3日
【申請(qǐng)日】2014年6月18日