短小芽孢桿菌、分離方法、糖脂類表面活性劑制備方法
【專利說明】短小芽抱桿菌、分離方法、糖脂類表面活性劑制備方法 【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及微生物醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種短小芽抱桿菌、分離方法、糖脂類 表面活性劑制備方法。 【【背景技術(shù)】】
[0002] 生物表面活性劑具有合成表面活性劑所沒有的結(jié)構(gòu)特征，大多有著發(fā)掘新表面活 性功能的可能性，人們正希望開發(fā)出生物降解性和安全性及生理活性都好的生物表面活性 劑。
[0003] 由AcinetobacterSP.ATCC31012分泌而制備的一種聚合糖類的生物表面活性劑， 可W在高濃度鹽的環(huán)境中，非常有效地將一采、二采后仍遺留在油井中的脂肪控、芳香控和 環(huán)燒控徹底乳化，同時其本身基本不會被地層中泥沙、砂石所吸收，并且用量非常小。運種 生物表面活性劑在清洗膽油罐、油輪膽倉、輸油管道W及各種運油車時也非常有效，首先其 用量很小，僅需處理油污量的千分之一到萬分之一，并且最后形成的乳液用通常的物理和 化學方法便可破乳，洗下的油可W回收。
[0004] 生物表面活性劑還大量應用于乳化、破乳、潤濕、發(fā)泡及抗靜電等方面，如日本花 王化AO)公司將Pseudomonas、Corynebacterium、No-cardia、Arthrobacter、Bacillus和 Alkaligenessp.產(chǎn)生的生物表面活性劑用于穩(wěn)定水煤漿W便輸送。處理煉油廠廢水時，若 在活性污泥處理池中加入鼠李糖脂，會大大加快正構(gòu)燒控的生物降解過程，生物表面活性 劑在紡織、醫(yī)藥、化妝品、食品等工業(yè)領(lǐng)域中都能有重要應用。 陽0化]由于生物體內(nèi)的表面活性劑是在極其復雜的生物物質(zhì)群中微量地存在，因此大量 提取純制品非常困難。近來發(fā)現(xiàn)微生物在其菌體外較大量地產(chǎn)生、積蓄微生物表面活性劑。 運已在石油=次回收劑、石油環(huán)境污染的無公害處理劑及功能性表面活性劑等許多領(lǐng)域得 到應用和開發(fā)。
[0006] 由控分解性細菌產(chǎn)生的生物表面活性劑產(chǎn)量低，還沒有達到實用的生產(chǎn)水平。W 發(fā)酵生產(chǎn)的糖脂為起始物，用有機化學方法可生產(chǎn)出更有用的衍生物，但目前在技術(shù)上尚 有困難，還不能應用于各種工業(yè)生產(chǎn)中。 【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0007] 有鑒如此，有必要提供一種糖脂類表面活性劑，W改善現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷。
[0008] 為此，本發(fā)明提供一種短小芽抱桿菌度acilluspumilus)，所述菌株為心2，保藏 單位：武漢大學中國典型培養(yǎng)物保藏中屯、，保藏日期：2015年7月9日，保藏號：CCTCCM 2015438。
[0009]所述菌株的16SrDNA基因序列為沈QIDNo. 2。
[0010] 本發(fā)明另一方面提供了一種短小芽抱桿菌的菌株分離方法，包括下述步驟：
[0011] 于溫度為28~30°C的條件下，將勸海沉積物在固體培養(yǎng)基活化培養(yǎng)1~2天后分 離得到，其中，所述述固體培養(yǎng)基的質(zhì)量組分如下： 陽01引蛋白腺0. 5~0. 75份，酵母粉0. 8~1.O份、瓊脂1.O~1. 5份，滅菌陳海水100份，抑為7. 5~8. 0。
[0013] 本發(fā)明再一方面提供了一種糖脂類表面活性劑的制備方法，包括下述步驟：
[0014] 步驟SlO:將所述短小芽抱桿菌心2菌株接種于液體種子培養(yǎng)基，在28~30°C條 件下振蕩培養(yǎng)12~15小時，獲得種子培養(yǎng)液，其中，所述種子培養(yǎng)液質(zhì)量組分如下：蛋白腺 0. 5~0. 75份，酵母粉0. 8~1. 0份，滅菌陳海水100份，pH為7. 5~8. 0;
[0015] 步驟S20 :按體積比為1~5%將所述種子培養(yǎng)液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng) 后，離屯、取上清，制得發(fā)酵液，其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量組分如下：蛋白腺0. 1~0. 5份， 酵母粉0. 8~1. 2份，CaC12 0. 002~0.Ol份，化2HP04 0. 005~0. 02份，滅菌陳海水100 份，抑為8.0 ;
[0016] 步驟S30 :將所述發(fā)酵液冷卻后加入電解質(zhì)，使發(fā)酵液分為上層澄清部分和下層 沉淀部分，將所述上層澄清部分過濾，濾液經(jīng)乙酸萃取后，再用蒸饋水滲析，冷凍干燥后得 到所述糖脂類表面活性劑。
[0017] 在一些實施例中，在完成步驟S30后，還包括下述步驟：
[0018] 將所述下層沉淀部分用飽和電解質(zhì)溶液清洗，并離屯、分出上層澄清部分。
[0019] 在一些實施例中，在完成步驟S30后，還包括下述步驟：
[0020] 取所述糖脂類表面活性劑溶于水中，在室溫下加入十六烷基=甲基漠化錠，使其 凝聚沉淀；
[0021] 進行離屯、分離，沉淀部分用蒸饋水清洗，再將洗后的沉淀溶于硫酸鋼溶液中；
[0022] 不溶部分用離屯、方法除去，然后加艦化鐘，形成的十六烷基=甲基艦化錠沉淀通 過離屯、除去；
[0023] 所剩的清液部分用蒸饋水滲析，再冷凍干燥得到白色純凈的糖脂類表面活性劑。
[0024] 在一些實施例中，步驟S30中，所述過濾采用娃藻±過濾或濾膜過濾。
[00巧]在一些實施例中，所述濾膜為0. 45微米孔徑。
[00%] 本發(fā)明的提供的短小芽抱桿菌，具有降解石油組分和產(chǎn)生表面活性劑的雙功能， 拓展了生物醫(yī)療微生物的范圍。
[0027]本發(fā)明提供的糖脂類表面活性劑的制備方法，采用海水加營養(yǎng)物配置成廉價寡養(yǎng) 培養(yǎng)基，進行海洋細菌短小芽抱桿菌L-2菌株的產(chǎn)生物表面活性劑糖脂發(fā)酵，有效降低了 發(fā)酵成本。
[002引此外，本發(fā)明提供的糖脂類表面活性劑的制備方法，由于采用微生物制備生物表 面活性劑，相對于由植物和動物開發(fā)而言，在制備技術(shù)及經(jīng)濟效果方面非常有利，可W大量 生產(chǎn)。 【【附圖說明】】
[0029] 圖1為本發(fā)明提供的一種糖脂類表面活性劑的制備方法步驟流程圖；
[0030] 圖2為實施例1制備的糖脂類表面活性劑紅外光譜圖。 【【具體實施方式】】
[0031] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，下面結(jié)合附圖和具體實施 例對本發(fā)明作進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅用于解釋本發(fā)明，而 非限定本發(fā)明。
[0032] 本發(fā)明提供一種短小芽抱桿菌度acilluspumilus)，所述菌株為心2,保藏單 位：武漢大學中國典型培養(yǎng)物保藏中屯、，保藏日期：2015年7月9日，保藏號：CCTCCM 2015438。 陽03引經(jīng)測定，所述短小芽抱桿菌的菌株16SrDNA基因序列為SEQIDNo. 2,經(jīng)檢索，在Genebank數(shù)據(jù)庫中未發(fā)現(xiàn)完全相同的序列。
[0034] 本發(fā)明的提供的短小芽抱桿菌，具有降解石油組分和產(chǎn)生表面活性劑的雙功能， 拓展了生物醫(yī)療微生物的范圍。
[0035] 本發(fā)明另一方面提供了一種短小芽抱桿菌的菌株分離方法，包括下述步驟：
[0036] 于溫度為28~30°C的條件下，將勸海沉積物在固體培養(yǎng)基活化培養(yǎng)1~2天后分 離得到，其中，所述述固體培養(yǎng)基的質(zhì)量組分如下：
[0037] 蛋白腺0. 5~0. 75份，酵母粉0. 8~1. 0份、瓊脂1. 0~1. 5份，滅菌陳海水100 份，抑為7. 5~8. 0。其中，滅菌陳海水為普通海水靜止四周后得到。
[0038] 上述原料來源廣泛，制備簡單，成本相對較低。
[0039] 請參閱圖1，本發(fā)明再一方面提供了一種糖脂類表面活性劑的制備方法，包括下述 步驟： W40] 步驟SlO:將所述短小芽抱桿菌心2菌株接種于液體種子培養(yǎng)基，在28~30°C條 件下振蕩培養(yǎng)12~15小時，獲得種子培養(yǎng)液，其中，所述種子培養(yǎng)液質(zhì)量組分如下：蛋白腺 0. 5~0. 75份，酵母粉0. 8~1. 0份，滅菌陳海水100份，pH為7. 5~8. 0;
[0041] 步驟S20 :按體積比為1~5%將所述種子培養(yǎng)液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng) 后，離屯、取上清，制得發(fā)酵液，其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量組分如下：蛋白腺0. 1~0. 5份， 酵母粉0. 8~1. 2份，CaC12 0. 002~0.Ol份，化2HP04 0. 005~0. 02份，滅菌陳海水100 份，抑為8.0 ;
[0042]優(yōu)選地，所述步驟S20中的發(fā)酵培養(yǎng)，溫度為28~30°C，時間為26~30h。
[0043] 步驟S30:將所述發(fā)酵液冷卻后加入電解質(zhì)，使發(fā)酵液分為上層澄清部分和下層 沉淀部分，將所述上層澄清部分過濾，濾液經(jīng)乙酸萃取后，再用蒸饋水滲析，冷凍干燥后得 到所述糖脂類表面活性劑。
[0044] 優(yōu)選地，所述過濾采用娃藻±過濾或濾膜過濾，所述濾膜為0. 45微米孔徑
[0045] 進一步地，在完成步驟S30后，還包括下述步驟：
[0046] 將所述下層沉淀部分用飽和電解