顱內(nèi)動脈瘤診治標(biāo)志物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及人CXCL16基因在顱內(nèi)動脈瘤的診斷、治療 中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 顱內(nèi)動脈瘤是指腦動脈內(nèi)腔的局限性異常擴大造成動脈壁的一種瘤狀突出。顱內(nèi) 動脈瘤多因腦動脈管壁局部的先天性缺陷和腔內(nèi)壓力增高的基礎(chǔ)上引起囊性膨出，是造成 蛛網(wǎng)膜下腔出血的首位病因。過去人們稱之為先天性腦動脈瘤，事實上先天性腦動脈瘤占 腦動脈瘤的70 %~80%。
[0003] 目前用于顱內(nèi)動脈瘤的診斷方法包括以下幾類：（1)頭部CT是診斷SAH的首選方 法，頭顱MRI(核磁共振成像）是有壓迫癥狀或無癥狀患者首先檢查的方法。CT血管造影 (CTA)和磁共振血管造影（MRA)，可初步篩選動脈瘤；（2)腦血管造影（DSA):是診斷動脈瘤 的金標(biāo)準(zhǔn)，可動態(tài)以及三維重建了解動脈瘤，是決策治療方案的主要依據(jù)；（3)磁共振成像 MRA或磁共振血管造影DSA:是無創(chuàng)性的檢查方法，可診斷未破裂的動脈瘤。
[0004] 一般的診斷步驟為：首先進(jìn)行CT檢查判斷腦部是否有出血的情況，確認(rèn)腦部有出 血情形，應(yīng)爭取在許可范圍內(nèi)盡早進(jìn)行CTA、MRA或DSA檢查，其中DSA檢查是必須的，因為 DSA檢查目前是診斷動脈瘤的金標(biāo)準(zhǔn)，是最確切的診斷方法。但是上述診斷方法在顱內(nèi)動脈 瘤發(fā)生早期并不適用，因此尋找一種在顱內(nèi)動脈瘤早期即可判斷出疾病存在與否的方法是 亟待解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種可用于顱內(nèi)動脈瘤早期診 斷的分子標(biāo)志物。相比傳統(tǒng)的顱內(nèi)動脈瘤的診斷方法，使用基因標(biāo)志物來診斷顱內(nèi)動脈瘤 的具有及時性、特異性和靈敏性，從而使患者在疾病早期就能知曉疾病風(fēng)險，針對風(fēng)險高 低，采取相應(yīng)的預(yù)防和治療措施。
[0006] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0007] 本發(fā)明提供了檢測CXCL16基因表達(dá)的產(chǎn)品在制備診斷顱內(nèi)動脈瘤的工具中的應(yīng) 用。
[0008] 進(jìn)一步，所述檢測CXCL16基因表達(dá)的產(chǎn)品包括檢測CXCL16基因mRNA水平的產(chǎn) 品、和/或檢測CXCL16蛋白水平的產(chǎn)品。
[0009] 進(jìn)一步，所述檢測CXCL16基因表達(dá)的產(chǎn)品包括：通過RT-PCR、實時定量PCR、免疫 檢測、原位雜交或芯片檢測CXCL16基因表達(dá)以診斷顱內(nèi)動脈瘤的產(chǎn)品。
[0010] 進(jìn)一步，所述用RT-PCR診斷顱內(nèi)動脈瘤的產(chǎn)品至少包括一對特異擴增CXCL16基 因的引物；所述用實時定量PCR診斷顱內(nèi)動脈瘤的產(chǎn)品至少包括一對特異擴增CXCL16基因 的引物；所述用免疫檢測診斷顱內(nèi)動脈瘤的產(chǎn)品包括：與CXCL16蛋白特異性結(jié)合的抗體； 所述用原位雜交診斷顱內(nèi)動脈瘤的產(chǎn)品包括：與CXCL16基因的核酸序列雜交的探針；所述 用芯片診斷顱內(nèi)動脈瘤的產(chǎn)品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括與CXCL16 蛋白特異性結(jié)合的抗體，基因芯片包括與CXCL16基因的核酸序列雜交的探針。
[0011] 所述用實時定量PCR診斷顱內(nèi)動脈瘤的產(chǎn)品至少包括的一對特異擴增CXCL16基 因的引物如SEQIDN0. 3和SEQIDN0. 4所示。
[0012] 所述檢測CXCL16基因表達(dá)的產(chǎn)品可以是檢測CXCL16基因表達(dá)的試劑、也可以是 包含所述試劑的試劑盒、芯片、試紙等，也可以是使用所述試劑的高通量測序平臺。
[0013] 所述診斷顱內(nèi)動脈瘤的工具包括但不限于芯片、試劑盒、試紙、或高通量測序平 臺；高通量測序平臺是一種特殊的診斷顱內(nèi)動脈瘤的工具，隨著高通量測序技術(shù)的發(fā)展，對 一個人的基因表達(dá)譜的構(gòu)建將成為十分便捷的工作。通過對比疾病患者和正常人群的基因 表達(dá)譜，容易分析出哪個基因的異常與疾病相關(guān)。因此，在高通量測序中獲知CXCL16基因 的異常與顱內(nèi)動脈瘤相關(guān)也屬于CXCL16基因的用途，同樣在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
[0014] 本發(fā)明還提供了一種診斷顱內(nèi)動脈瘤的工具，所述工具包括檢測CXCL16基因表 達(dá)的試劑；所述試劑包括檢測CXCL16基因mRNA的引物和/或探針、和/或檢測CXCL16蛋 白的抗體。
[0015] 所述工具包括但不限于芯片、試劑盒、試紙、或高通量測序平臺。
[0016] 其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白質(zhì)芯片；所述基因芯片包括固相載體以及固 定在固相載體的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針包括用于檢測CXCL16基因轉(zhuǎn)錄水平的 針對CXCL16基因的寡核苷酸探針；所述蛋白質(zhì)芯片包括固相載體以及固定在固相載體 的CXCL16蛋白的特異性抗體；所述基因芯片可用于檢測包括CXCL16基因在內(nèi)的多個基 因（例如，與顱內(nèi)動脈瘤相關(guān)的多個基因）的表達(dá)水平。所述蛋白質(zhì)芯片可用于檢測包括 CXCL16蛋白在內(nèi)的多個蛋白質(zhì)（例如與顱內(nèi)動脈瘤相關(guān)的多個蛋白質(zhì)）的表達(dá)水平。通過 將多個與顱內(nèi)動脈瘤的標(biāo)志物同時檢測，可大大提高顱內(nèi)動脈瘤診斷的準(zhǔn)確率。
[0017] 其中，所述試劑盒包括基因檢測試劑盒和蛋白免疫檢測試劑盒；所述基因檢測試 劑盒包括用于檢測CXCL16基因轉(zhuǎn)錄水平的試劑；所述蛋白免疫檢測試劑盒包括CXCL16蛋 白的特異性抗體。進(jìn)一步，所述試劑包括使用RT-PCR、實時定量PCR、免疫檢測、原位雜交或 芯片方法檢測CXCL16基因表達(dá)水平過程中所需的試劑。優(yōu)選度，所述試劑包括針對CXCL16 基因的引物和/或探針。根據(jù)CXCL16基因的核苷酸序列信息容易設(shè)計出可以用于檢測 CXCL16基因表達(dá)水平的引物和探針。
[0018] 所述試紙包括檢測CXCL16基因表達(dá)的試劑。
[0019] 所述高通量測序平臺包括檢測CXCL16基因表達(dá)的試劑。
[0020] 與CXCL16基因的核酸序列雜交的探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或 其它衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結(jié) 合，任何長度都可以。所述探針的長度可短至25、20、15、13或10個堿基長度。同樣，所述 探針的長度可長至60、80、100、150、300個堿基對或更長，甚至整個基因。由于不同的探針 長度對雜交效率、信號特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個堿基對，最 長一般不超過30個堿基對，與目的核苷酸序列互補的長度以15-25個堿基對最佳。所述探 針自身互補序列最好少于4個堿基對，以免影響雜交效率。
[0021] 進(jìn)一步，所述CXCL16蛋白的特異性抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體。所述 CXCL16蛋白的特異性抗體包括完整的抗體分子、抗體的任何片段或修飾（例如，，嵌合抗 體、80?￥、？&13、？(313'）2、？￥等。只要所述片段能夠保留與0乂〇^16蛋白的結(jié)合能力即可。用 于蛋白質(zhì)水平的抗體的制備時本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且本發(fā)明可以使用任何方法來制 備所述抗體。
[0022] 在本發(fā)明的具體實施方案中，所述檢測CXCL16基因mRNA的引物包括SEQIDN0. 3 和SEQIDNO. 4所示的引物對。
[0023] 本發(fā)明還提供了CXCL16基因和/或其表達(dá)產(chǎn)物的抑制劑在制備治療顱內(nèi)動脈瘤 的藥物中的應(yīng)用。所述抑制劑包括抑制CXCL16基因表達(dá)的試劑、和/或抑制CXCL16基因 表達(dá)產(chǎn)物的試劑。
[0024] 進(jìn)一步，所述抑制CXCL16基因表達(dá)的試劑包括抑制基因轉(zhuǎn)錄的試劑、抑制基因翻 譯的試劑；所述抑制CXCL16基因表達(dá)產(chǎn)物的試劑包括抑制CXCL16基因mRNA的試劑、抑制 CXCL16蛋白的試劑。所述抑制CXCL16基因mRNA的試劑包括抑制mRNA穩(wěn)定性的試劑、抑制 mRNA翻譯活性的試劑。所述抑制CXCL16蛋白的試劑包括抑制CXCL16蛋白穩(wěn)定性的試劑、 抑制CXCL16蛋白活性的試劑、抑制CXCL16蛋白功能的試劑。
[0025] 進(jìn)一步，抑制CXCL16基因mRNA的試劑包括針對CXCL16基因mRNA的雙鏈核糖核 酸；抑制CXCL16蛋白功能的試劑包括CXCL16抗原蛋白的腫瘤疫苗、抑制CXCL16蛋白功能 的抗體。所述抗體可以是多克隆抗體，或是單克隆抗體。
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