M-0. 02M TRIS(三羥甲基氨 基甲烷）、〇. 03M-0. 06M檸檬酸鈉、0. 02M-0. 04M賴氨酸鹽酸鹽、0. 1M-0. 15M氯化鈉，其余為 水；溶解緩沖液中同時(shí)加入肝素鈉，加入量為3000-12000IU/kg溶解緩沖液1 ;所述溶解緩 沖液 1 的 ΡΗ6· 50-7. 50。
[0013] 3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)制備高純?nèi)四蜃覸III及人纖維蛋白原的 方法，其特征在于：步驟（5)所述的陰離子交換柱所用填料為Capto DEAE，Q_Sepharose FF，Q-Sepharose 4FF，Q-Sepharose HP及Capto Q中的任意一種；所述的平衡緩沖液1 組成為(λ 01M-0. 02M TRIS，0· 03M-0. 06M 檸檬酸鈉，0· 02-0. 04M 賴氨酸鹽酸鹽，0· 1M-0. 15M 氯化鈉，0. 005M-0. 015M氯化鈣，其余為水；所述平衡緩沖液1的PH6. 50-7. 50 ;所述洗滌 緩沖液1的組成為〇. 01M-0. 02M TRIS，0. 2M-0. 3M氯化鈉，0. 005M-0. 015M氯化鈣，其余為 水；所述洗滌緩沖液1的PH6. 50-7. 50 ;所述洗脫緩沖液1的組成為0. 01M-0. 02M TRIS， 0. 5M-2. 0M氯化鈉，0. 001M-0. 005M氯化鈣，其余為水；所述洗脫緩沖液1的PH6. 50-7. 50。
[0014] 4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)制備高純?nèi)四蜃覸III及人纖維蛋白 原的方法，其特征在于：步驟（6A)所述的疏水柱所用填料為Capto Phenyl (LS)，Phenyl Sepharose 6FF (LS)，Octyl Sepharose 4FF中的任意一種；所述的平衡緩沖液2組成為 0. 01M-0. 02M TRIS，1. 8M-2. 5M氯化鈉，0. 01M-0. 02M氯化鈣，其余為水；所述的平衡緩沖 液1的PH6. 50-7. 50 ;所述的洗滌緩沖液2的組成為0. 01M-0. 02M TRIS，0. 6M-1. 6M氯化 鈉，0. 01-0. 02M氯化鈣，其余為水；所述的洗滌緩沖液2的PH6. 50-7. 50 ;所述的洗脫緩沖 液2的組成為0. 01M-0. 02M TRIS，0. 001M-0. 003M氯化鈣，其余為水；所述洗脫緩沖液2的 PH6. 50-7. 50。
[0015] 5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)制備高純?nèi)四蜃覸III及人纖維蛋白原的 方法，其特征在于：步驟（7B)所述的溶解緩沖液2組成為0. 01M-0. 02M TRIS，0. 03M-0. 06M 檸檬酸鈉，〇. 5-3%甘氨酸，0. 5-3%精氨酸鹽酸鹽，0. 075M-0. 15M氯化鈉，其余為水；所述 的溶解緩沖液2的PH 6. 50-7. 50。
[0016] 6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)制備高純?nèi)四蜃覸III及人纖維蛋白原 的方法，其特征在于：步驟（9B)所述的溶解緩沖液3組成為0. 03M-0. 06M檸檬酸鈉， 0. 01M-0. 15M氯化鈉，甘氨酸0. 5-3%，精氨酸鹽酸鹽0. 5-3%，其余為水；所述的溶解緩沖液 3 的 PH6. 50-7. 50。
[0017] 7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)制備高純?nèi)四蜃覸III及人纖維蛋白原 的方法，其特征在于：步驟（8A)所述的FVIII的穩(wěn)定劑為甘氨酸，所述的甘氨酸的濃度為 0. 5-3%〇
[0018] 8.根據(jù)權(quán)利要求1-7所述的一種同時(shí)制備高純?nèi)四蜃覸III及人纖維蛋白原 的方法，其特征在于：分別從冰凍血漿中制取冷沉淀與組分I沉淀，但將冷沉淀與組分I沉 淀混和投料用于FVIII與Fg的生產(chǎn)，且投料時(shí)冷沉淀與組分I均為新鮮組分，未經(jīng)冷凍儲(chǔ) 存。
[0019] 9.根據(jù)權(quán)利要求1-8所述的一種同時(shí)制備高純?nèi)四蜃覸III及人纖維蛋白原 的方法，其特征在于：冷沉淀與組分I沉淀混和投料并充分溶解后用壓濾而不是離心的方 法獲得上清液。
[0020] 10.根據(jù)權(quán)利要求1-9所述的一種同時(shí)制備高純?nèi)四蜃覸III及人纖維蛋白 原的方法，其特征在于：人凝血因子VIII凍干制劑經(jīng)過S/D、納米膜過濾及干熱三步病毒滅 活步驟，人纖維蛋白原制劑經(jīng)過S/D及干熱兩步病毒滅活步驟。
[0021] 本發(fā)明的優(yōu)勢： 1，本發(fā)明采用冷沉淀與組分I沉淀混和后一起投料，同時(shí)制備FVIII與Fg，明顯提高 了生產(chǎn)效率，減少了勞動(dòng)強(qiáng)度，節(jié)省化學(xué)品與耗材，特別是冷沉淀與組分I中所含的Fg同時(shí) 被提取，使得Fg的得率明顯提高，可達(dá)2000瓶/噸血漿以上（0. 5克/瓶）;同樣地，冷沉淀 與組分I中所含的FVIII -同被提取，也使FVIII的得率明顯提高，可達(dá)20萬IU/噸血漿 以上；兩種產(chǎn)品的得率均遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)工藝； 2, 本發(fā)明因采用DEAE S印hadex A-50凝膠吸附去除懸浮液中的維生素 K依賴的凝血 因子（FII，F(xiàn)VII，F(xiàn)IX，F(xiàn)X)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的氫氧化鋁凝膠吸附或PEG沉淀，減少了 FVIII與Fg的 損失，也使FVIII與Fg的得率進(jìn)一步提高； 3, 本發(fā)明采用離子交換層析結(jié)合疏水層析，大幅提高了 FVIII的純度，比活250IU/mg 左右，遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)工藝制備的產(chǎn)品（不大于50IU/mg); 4，本發(fā)明因采用DEAE S印hadex A-50凝膠吸附去除了懸浮液中的維生素 K依賴的 凝血因子（FII，F(xiàn)VII，F(xiàn)IX，F(xiàn)X)，使得Fg在生產(chǎn)過程被凝血酶激活的概率明顯下降，同時(shí)由 于經(jīng)過了柱層析精制，使得Fg的純度明顯提高（>85%)，終產(chǎn)品的品質(zhì)（如復(fù)溶時(shí)間及外觀 等）明顯改善； 5, 本發(fā)明在懸浮液預(yù)處理階段采用壓濾法取代離心法，避免了高速離心過程中強(qiáng)剪切 力及泡沫，從而減少了蛋白變性失活的機(jī)會(huì)，F(xiàn)VIII及Fg產(chǎn)品更加穩(wěn)定； 6, 本發(fā)明生產(chǎn)工藝制備的FVIII為白色均勻海綿狀，復(fù)溶時(shí)間極快，復(fù)溶液澄明，無蛋 白析出，幾乎無乳光； 7, 本發(fā)明生產(chǎn)工藝制備的Fg凍干粉為白色均勻海綿狀，復(fù)溶時(shí)間很快，復(fù)溶液澄明， 無乳光，無蛋白析出亦無蛋白顆粒。
【附圖說明】
[0022] 圖1是同時(shí)制備高純?nèi)四蜃覸III及人纖維蛋白原的工藝流程圖。
【具體實(shí)施方式】 下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，不能認(rèn)為本發(fā)明的實(shí)施方式僅限于 此，對于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下所做出 的若干簡單的改變或替換，都應(yīng)視為屬于本發(fā)明權(quán)利要求書確定的專利保護(hù)范圍。
[0023] 實(shí)施例一 1，按工藝流程步驟1所述的方法制備冷沉淀與組分I沉淀，稱取冷沉淀與組分I 沉淀各0. 5kg，一起投入10kg預(yù)先配制的溶解緩沖液1中，溶解緩沖液1組成為0. 02M TRIS-HCL，0. 06M檸檬酸鈉，0. 02M賴氨酸鹽酸鹽，0. 15M NaCL，PH6. 90-7. 10 ;溶解緩沖液1 中預(yù)先加入肝素鈉至6000IU/kg ;溫度控制在25-30°C，攪拌2小時(shí)使其充分溶解；然后用 頗爾公司生產(chǎn)的Supradur 50P濾板串聯(lián)0. 45Mm濾芯過濾，收集濾液；過濾前用溶解緩沖液 1預(yù)洗濾板及濾芯； 2,以上濾液中加入預(yù)先溶脹、冷卻并用上一步驟所述的溶解緩沖液1平衡的DEAE S印hadex A-50凝膠，凝膠按干膠計(jì)加入量為5. 5g ;緩慢攪拌1小時(shí)，后靜置10分鐘；然 后用濾布過濾，收集濾液； 3，以上濾液中加入Tween80至1.0% (wt%)，TNBP (磷酸三丁酯）至0.3% (wt%)，攪勻 后升溫至24-26°C，后保溫6小時(shí)，然后用0. 45Mm濾芯過濾，收集濾液； 4,以上濾液上Capto Q柱，柱子預(yù)先用平衡緩沖液1充分平衡，平衡緩沖液1組成 為 0.02M TRIS-HCL，0.03M 檸檬酸鈉，0.02M 賴氨酸鹽酸鹽，0.15M NaCL，0.015MCaCL2， PH6. 80-7. 00);用帶冷媒夾套的不銹鋼罐收集流穿液；上柱結(jié)束后，用平衡緩沖液 1沖洗柱子，沖洗液并入流穿液；用洗滌緩沖液1 (0. 02M TRIS-HCL，0. 2M NaCL， 0.015MCaCL2，ΡΗ6·80-7·00)洗滌柱子，再用洗脫緩沖液 1 (0.02M TRIS-HCL，2.5M NaCL， 0. 002MCaCL2，PH6. 80-7. 00)洗脫，及時(shí)用0. 45Mm濾芯進(jìn)行過濾，收集濾液；濾液直接 上Capto Phenyl (LS)，柱子預(yù)先用平衡緩沖液2充分平衡，平衡緩沖液2組成為0.02M TRIS-HCL, 2. 5MNaCL，0. 01MCaCL2，PH6. 80-7. 00 ;上柱結(jié)束后，用平衡緩沖液2沖洗柱子，后 用洗滌緩沖液2(0. 02M TRIS-HCL，0. 8M NaCL，0. 01M CaCL2，PH6. 80-7. 00)洗滌柱子，再用 洗脫緩沖液 2 (0· 02M TRIS-HCL，0. 002M CaCL2 ,ΡΗ6· 80-7. 00)洗脫，收集洗脫液；用 0· 45Mm 濾芯過濾以上洗脫液，收集濾液；用10K的超濾膜濃縮以上濾液，然后恒體積透析5倍，再 濃縮至凝血FVIII活力高于35IU/ml;后移出超濾膜包并后洗膜包；調(diào)節(jié)FVIII含量至所 30IU/ml，加入甘氨酸至3%，后調(diào)PH值至6. 50-7. 50 ;用0. lMm濾芯串