道，是一種新骨架生物堿化合物，命名為Oleracone。
[0032] 表1 :馬齒莧中新生物堿化合物的核磁數(shù)據(jù)。
[0033] 本實施例還提供一種馬齒莧中新生物堿Oleracone的提取分離方法，包括以下步 驟。
[0034] 步驟1、稱取馬齒莧干燥藥材50kg，采用水煎煮提取，水的用量為藥材用量的8-16 倍，煎煮提取兩次，每次2h，水提液過濾，合并濾液直接濃縮，得藥液備用。
[0035] 步驟2、將步驟1中所得藥液直接經(jīng)預處理過的AB-8或D101大孔吸附樹脂吸附除 雜，分別以水和50%乙醇洗脫，對50%乙醇洗脫液進行減壓濃縮，得到濃縮液備用。所述水 的洗脫除雜用量為2-3個柱體積，所述50%乙醇的洗脫用量為沖至顏色變淺為止。所述大 孔吸附樹脂的預處理過程為乙醇浸泡過24小時，上柱，用乙醇洗至滴入水中無混濁，再用 水洗至無醇味。
[0036] 步驟3、將步驟2中濃縮液用乙酸乙酯反復3次萃取，40°C以下減壓回收乙酸乙酯 至浸膏，得到乙酸乙酯萃取物。所述乙酸乙酯與濃縮液的用量比為1:1 (V:V)。
[0037] 步驟4、將步驟3中乙酸乙酯萃取物干法上樣，經(jīng)硅膠柱層析分離，所述硅膠為 200-400目，依次用石油醚-丙酮（1:1，1:2,1:3,1:5,v:v)梯度洗脫得到130個洗脫部位， 按順序記為洗脫部位1-130,經(jīng)薄層色譜進行檢測，顯色，合并90-130洗脫部位，將合并后 的洗脫部位經(jīng)40°C以下減壓濃縮至干，備用。
[0038] 步驟5、將步驟4中所得物再經(jīng)0DS中壓柱（Octadecylsilyl，十八烷基硅烷鍵合 硅膠填料，所述填料粒度為2〇-4〇μπι)層析分離，用甲醇-水（30/70,v/v)等度洗脫，得到10 個洗脫部位，按順序記為部位1-10,經(jīng)薄層色譜進行檢測，顯色，將洗脫部位3在50°C以下 減壓濃縮至干，得濃縮物備用。
[0039] 步驟6、將步驟5中所得濃縮物經(jīng)S印hadexLH-20 (羥丙基葡聚糖凝膠)，以甲 醇-水（50/50,v/v)等度洗脫，根據(jù)顏色黃色帶接，得到本發(fā)明馬齒莧新骨架生物堿化合 物。經(jīng)超高效液相色譜，歸一法測定純度均為90-99%。
[0040] 本發(fā)明馬齒莧中新生物堿Oleracone的抗炎作用。
[0041] 1、實驗原料及相關試劑、分組。
[0042] DMEM高糖培養(yǎng)基、胎牛血清購于美國Hyclone公司；LPS購于美國Sigma公司； Griess試劑購于碧云天生物技術有限公司。
[0043] 分組：共分為三組，即對照組、LPS組和實驗組。
[0044] 2、利用格里斯（Griess)法測定N0的含量，考察本發(fā)明馬齒莧中新生物堿 oleracone對LPS誘導的小鼠巨噬細胞RAW264. 7的N0產(chǎn)生量的抑制作用。小鼠巨噬細胞 RAW264. 7傳代后在含10%胎牛血清的高糖細胞培養(yǎng)基DMEM中培養(yǎng)，實驗組加入不同濃度 的〇16抑〇〇1^(1-5(^1〇，在37°(：，5%0)2條件下孵育111后用1^(終濃度為14 8/1^)誘 導炎癥反應，24h后收集上清液。Griess法測定細胞上清液中N0的含量，根據(jù)不同濃度馬 齒莧來源生物堿對LPS誘導的RAW264. 7細胞釋放N0的影響，用以反映N0水平，如圖12所 示，其中" + "表示有LPS，表示沒有LPS或生物堿。由圖12可知，馬齒莧新骨架生物堿 oleracone能夠抑制LPS誘導的RAW264. 7細胞產(chǎn)生過量炎癥介質N0。
【主權項】
1. 馬齒莧中新生物堿Oleracone，其特征在于，分子式為C 14Η17Ν02,命名為Oleracone， 化學結構式為。2. 如權利要求1所述的馬齒莧中新生物堿Oleracone的提取分離方法，其特征在于，包 括以下步驟： 步驟1、取馬齒莧干燥藥材，采用水煎煮提取，水提液過濾，合并濾液直接濃縮，得藥液 備用； 步驟2、將步驟1中所得藥液直接經(jīng)預處理過的大孔吸附樹脂吸附除雜，分別以水和乙 醇洗脫，對乙醇洗脫液進行減壓濃縮，得到濃縮液備用； 步驟3、將步驟2中濃縮液用乙酸乙酯反復多次萃取，減壓回收乙酸乙酯至浸膏，得到 乙酸乙酯萃取物； 步驟4、將步驟3中乙酸乙酯萃取物經(jīng)硅膠柱層析分離，依次用石油醚-丙酮梯度洗脫 得到130個洗脫部位，經(jīng)薄層色譜進行檢測，顯色，合并90-130洗脫部位，將合并后的洗脫 部位經(jīng)減壓濃縮至干，備用； 步驟5、將步驟4中所得物再經(jīng)0DS柱層析分離，用甲醇-水（30/70, v/v)等度洗脫， 得到10個洗脫部位，經(jīng)薄層色譜進行檢測，顯色，將洗脫部位3減壓濃縮至干，得濃縮物備 用； 步驟6、將步驟5中所得濃縮物經(jīng)Sephadex LH-20 (羥丙基葡聚糖凝膠)，以甲醇-水 (50/50, v/v)等度洗脫得到新骨架生物堿化合物。3. 如權利要求1所述的馬齒莧中新生物堿Oleracone的提取分離方法，其特征在于，所 述步驟2中水的洗脫除雜用量為2-3個柱體積，50%乙醇的洗脫用量為沖至顏色變淺為止。4. 如權利要求1所述的馬齒莧中新生物堿Oleracone的提取分離方法，其特征在于，所 述步驟2中大孔吸附樹脂的預處理過程為乙醇浸泡過24h，上柱，用乙醇洗至滴入水中無混 濁，再用水洗至無醇味。5. 如權利要求1所述的馬齒莧中新生物堿Oleracone的提取分離方法，其特征在于，所 述步驟3中乙酸乙酯與濃縮液的用量比為1:1。6. 如權利要求1所述的馬齒莧中新生物堿Oleracone的提取分離方法，其特征在于，所 述步驟4中石油醚-丙酮的用量為1:1、1:2、1:3、1:5。
【專利摘要】馬齒莧中新生物堿Oleracone及其提取分離方法，從馬齒莧干燥藥材中，用水煎煮提取，過濾，合并濾液，加熱濃縮；經(jīng)大孔吸附樹脂除雜，分別以水與乙醇梯度洗脫，對乙醇洗液進行減壓濃縮；對濃縮液再用乙酸乙酯萃取，減壓回收乙酸乙酯；所得提取物經(jīng)硅膠柱層析分離，依次用石油醚-丙酮梯度洗脫得到130個部位，將90-130部位洗脫物減壓濃縮；再經(jīng)ODS中壓柱以甲醇-水等度洗脫得到10個部位，將部位3減壓濃縮，經(jīng)Sephadex？LH-20以甲醇-水等度洗脫，即得新骨架生物堿化合物，經(jīng)波譜解析、化學方法和X射線單晶衍射實驗確定結構式，并命名為Oleracone。采用本發(fā)明提取分離方法制備的馬齒莧新生物堿Oleracone，可以作為其他化合物合成先導物，以及新藥開發(fā)和藥理活性研究的原料。
【IPC分類】C07D209/52, A61P29/00
【公開號】CN105330588
【申請?zhí)枴緾N201510665485
【發(fā)明人】英錫相, 張文潔, 孟一晗, 英哲銘
【申請人】遼寧中醫(yī)藥大學
【公開日】2016年2月17日
【申請日】2015年10月16日