白色粉末。
[0049] 對(duì)得到的三種化合物測(cè)試HPLC分析圖譜（2541111^?NMR圖譜、13CNMR圖譜。經(jīng) 測(cè)試，三種化合物分別為：特女貞苷，約1. 3g;女貞苷G13,約1. 0g;油女貞苷，約0. 2g，純度 均高達(dá)98 %，均可作為化學(xué)對(duì)照品。
[0050] 圖Ι-a為實(shí)施例1得到的女貞子總苷的HPLC分析圖譜（含1 %甲酸的50%甲醇 水溶液，254nm)。
[0051] 圖Ι-b為實(shí)施例1的制備高效液相的制備色譜圖（254nm)。
[0052] 圖2a、2b、2c分別為實(shí)施例1得到的特女貞苷的HPLC分析圖譜（2541111^?NMR圖 譜、13CNMR圖譜。
[0053] 圖3a、3b、3c分別為實(shí)施例1得到的女貞苷G13的HPLC分析圖譜（254nm)JHNMR 圖譜、13CNMR圖譜。
[0054] 圖4a、4b、4c分別為實(shí)施例1得到的油女貞苷的HPLC分析圖譜（254nm)、4NMR圖 譜、13CNMR圖譜。
[0055] 實(shí)施例2
[0056] -種從女貞子中同時(shí)提取三種環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)對(duì)照品的方法，包括以下步驟：
[0057] 1)女貞子總浸膏提取
[0058] 取女貞子藥材500g，粉碎后過50目篩，用1500mL的體積濃度為50 %的乙醇水溶 液加熱回流提取2次，每次3小時(shí)，合并兩次提取液，減壓回收，得到女貞子總浸膏，約195g。
[0059] 2)提取女貞子總苷
[0060] 將女貞子總浸膏加入約200mL水分散，用Diaion大孔樹脂柱（90cm*8cm)進(jìn)行層 析分離，先用2倍柱體積的水洗脫，之后用3倍柱體積的體積濃度為40%的乙醇水溶液洗 脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得到女貞子總苷，約142g。
[0061] 3)反相高效制備液相色譜純化
[0062] 將女貞子總苷用體積濃度為40%的甲醇水溶液溶解，配置成100mg/mL的供試品 溶液，經(jīng)0. 45μm微孔濾膜過濾，得到供試品；
[0063] 采用反相高效制備液相色譜純化分離，制備型高效液相柱填料品牌為 ChromatorexC18鍵合相填料；粒徑為9μm，柱長20cm、直徑7. 5cm;進(jìn)樣體積為5mL，以pH =3 (加入甲酸調(diào)節(jié)）、體積濃度為55 %的甲醇水溶液為流動(dòng)相，流速控制在180mL/min， 紫外檢測(cè)器254nm檢測(cè)，分別收集收集三個(gè)主要色譜峰的流份（保留時(shí)間為4. 0-4. 7min， 9. 0-9. 6min，10. 0-10. 8min)，分別干燥，得到三種化合物，外觀為白色粉末。
[0064] 對(duì)得到的三種化合物測(cè)試HPLC分析圖譜（2541111^?NMR圖譜、13CNMR圖譜。經(jīng) 測(cè)試，三種化合物分別為：特女貞苷，約12. 5g;女貞苷G13,約4. 8g;油女貞苷，約1. 2g，純 度均高達(dá)98 %，均可作為化學(xué)對(duì)照品。
[0065] 圖1-c為實(shí)施例2的制備高效液相的制備色譜圖（254nm)。
[0066] 實(shí)施例3
[0067] -種從女貞子中同時(shí)提取三種環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)對(duì)照品的方法，包括以下步驟：
[0068] 1)女貞子總浸膏提取
[0069] 取女貞子藥材500g，粉碎后過50目篩，用1500mL體積濃度為60 %的乙醇水溶液 加熱回流提取1次，提取時(shí)間3小時(shí)，減壓回收，得到女貞子總浸膏，約130g。
[0070] 2)提取女貞子總苷
[0071] 將女貞子總浸膏加入約150mL水分散，用D101大孔樹脂柱（90cm*8cm)層析分離， 先用2倍柱體積的水洗脫，之后用3倍柱體積的體積濃度為60 %的乙醇水溶液洗脫，收集洗 脫液，減壓回收溶劑，得到女貞子總苷，約ll〇g。
[0072] 3)反相高效制備液相色譜純化
[0073] 將女貞子總苷用體積濃度為60%的甲醇水溶液溶解，配置成200mg/mL的供試品 溶液，經(jīng)0. 45μm微孔濾膜過濾，得到供試品；
[0074] 采用反相高效制備液相色譜純化分離，制備型高效液相柱填料品牌為 ChromatorexC18鍵合相填料；粒徑為9μm，柱長20cm、直徑5cm;進(jìn)樣體積為5mL，以pH =3 (加入甲酸調(diào)節(jié)）、體積濃度為45 %的甲醇水溶液為流動(dòng)相，流速控制在180mL/min， 紫外檢測(cè)器254nm檢測(cè)，分別收集三個(gè)主要色譜峰的流份（保留時(shí)間為6. 0-6. 5min， 12. 0-12. 8min，13. 0-14.Omin)，分別干燥，得到三種化合物，外觀為白色粉末。
[0075] 對(duì)得到的三種化合物測(cè)試HPLC分析圖譜NMR圖譜、13CNMR圖譜。經(jīng) 測(cè)試，三種化合物分別為：特女貞苷，約11. 3g;女貞苷G13,約6. 2g;油女貞苷，約1. 5g，純 度均高達(dá)98 %，均可作為化學(xué)對(duì)照品。
[0076] 對(duì)比例
[0077] 同實(shí)施例1，區(qū)別在于：不加入甲酸調(diào)節(jié)pH。
[0078] 結(jié)果發(fā)現(xiàn)：峰型拖尾，分離度很差。
[0079] 顯然，本發(fā)明的上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對(duì) 本發(fā)明的實(shí)施方式的限定，對(duì)于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可 以做出其它不同形式的變化或變動(dòng)，這里無法對(duì)所有的實(shí)施方式予以窮舉，凡是屬于本發(fā) 明的技術(shù)方案所引伸出的顯而易見的變化或變動(dòng)仍處于本發(fā)明的保護(hù)范圍之列。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從女貞子中同時(shí)提取三種環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)對(duì)照品的方法，其特征在于，包括 以下步驟： 1) 提取女貞子總浸膏 將女貞子藥材粉碎過篩，在體積濃度為40-60%的乙醇水溶液中加熱回流提取，過濾， 減壓濃縮干燥，得到女貞子總浸膏； 2) 大孔樹脂柱層析分離 將步驟1)得到的女貞子總浸膏進(jìn)行大孔樹脂柱層析分離，以體積濃度為50-60%的乙 醇水溶液作為洗脫劑，洗脫液濃縮干燥，得到女貞子總苷； 3) 反相高效制備液相色譜純化 將步驟2)得到的女貞子總苷用甲醇水溶液溶解，微孔濾膜過濾，得到供試品； 將供試品用反相高效制備液相色譜純化分離，色譜柱的填充填料為C18,柱長 20-22cm、直徑5-7. 5cm，以體積濃度為45-55%的甲醇水溶液為流動(dòng)相，甲醇水溶液的pH用 甲酸調(diào)節(jié)為3,進(jìn)樣體積為l-5mL，流速為80-180mL/min，紫外檢測(cè)器254nm監(jiān)測(cè)，分別收集 三個(gè)主要色譜峰的流份，將三個(gè)流份分別濃縮干燥，得到純度均大于98 %的三種環(huán)烯醚萜 苷類化學(xué)對(duì)照品特女貞苷、女貞苷G13和油女貞苷。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從女貞子中同時(shí)提取三種環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)對(duì)照品的 方法，其特征在于，步驟1)中，藥材粉碎過篩時(shí)，選擇篩子的目數(shù)為30-50目。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從女貞子中同時(shí)提取三種環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)對(duì)照品的 方法，其特征在于，步驟1)中，女貞子藥材與乙醇水溶液的用量比為lg:30mL。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從女貞子中同時(shí)提取三種環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)對(duì)照品 的方法，其特征在于，步驟2)的具體方法為：將步驟1)得到的女貞子總浸膏用水分散，經(jīng) HPD-100、Diaion或D101樹脂柱層析分離，先用水作為洗脫劑，洗脫1-2個(gè)柱體積，之后以 體積濃度為50-60 %的乙醇水溶液作為洗脫劑，洗脫3-5個(gè)柱體積，將洗脫液濃縮干燥得女 貞子總苷。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種從女貞子中同時(shí)提取三種環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)對(duì)照品的 方法，其特征在于，步驟2)中，女貞子總浸膏與分散用水的用量比為lg:0. 9-1. 15mL。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從女貞子中同時(shí)提取三種環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)對(duì)照品的 方法，其特征在于，步驟3)中，將步驟2)得到的女貞子總苷用體積濃度為40-60%的甲醇水 溶液溶解。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從女貞子中同時(shí)提取三種環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)對(duì)照品的 方法，其特征在于，步驟3)中，微孔濾膜為0. 45μm微孔濾膜。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從女貞子中同時(shí)提取三種環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)對(duì)照品的 方法，其特征在于，步驟3)中，將步驟2)得到的女貞子總苷用甲醇水溶液溶解后，女貞子總 苷在甲醇水溶液中的濃度為50-200mg/mL。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種從女貞子中同時(shí)提取三種環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)對(duì)照品的方法，該方法用乙醇水溶液提取得到女貞子總浸膏，用大孔樹脂柱進(jìn)行層析分離得到女貞子總苷，女貞子總苷用反相高效制備液相色譜純化分離，得到純度均大于98％的三種環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)對(duì)照品特女貞苷、女貞苷Gl3和油女貞苷。本發(fā)明經(jīng)過簡單處理即可以同時(shí)得到三種、純度高達(dá)98％的環(huán)烯醚萜苷類化學(xué)對(duì)照品，解決了現(xiàn)有技術(shù)中只能得到一種化合物、步驟繁瑣且純度不夠的問題。
【IPC分類】C07H1/08, C07H17/04
【公開號(hào)】CN105330710
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510696655
【發(fā)明人】劉艷秋, 洪志來, 張曉哲
【申請(qǐng)人】大連醫(yī)科大學(xué)
【公開日】2016年2月17日
【申請(qǐng)日】2015年10月23日