一種翅莢決明中抗病毒活性的異喹啉生物堿類化合物及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物化學技術領域，具體設及一種源于云南翅芙決明樹皮中異哇嘟生 物堿類化合物及其制備方法與應用。
【背景技術】
[000引翅芙決明（仍斯fiaa知iaL.)為豆科決明屬下的一個種。原產美洲熱帶地區(qū)，廣 布于全世界熱帶地區(qū)，在我國分布于廣東和云南南部地區(qū)。該植物花色艷麗，有較高的觀賞 價值，常用作園林綠化樹種。同時，它也是重要的藥用植物，具有殺真菌的作用，可W用來治 療皮膚病，是香皂、洗發(fā)液、洗液的常用原料之一。它的種子含有的皂角巧可W作為驅除腸 道寄生蟲的驅蟲劑；其葉水煎液常被用來治療高血壓、胃病、發(fā)燒、哮喘、毒蛇咬傷、性病等。
[0003]目前國內外學者對臘腸樹進行過一些研究，主要報道的化學成分有色酬、黃酬、 祗、醬體、生物堿等類化合物。異哇嘟類生物堿是生物堿類成分的重要組成部分，該類生物 堿數(shù)量多（目前發(fā)現(xiàn)有1000多種），結構類型復雜，藥用價值大突出，具有多方面的生理活 性。為充分利用我國豐富的資源，進一步尋找新的活性天然產物，本發(fā)明對翅芙決明化學成 分進行了研究，并從中分離到一個新的異哇嘟生物堿，該化合物具有明顯的抗輪狀病毒活 性。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種結構新穎的異哇嘟生物堿類化合物；第二目的在 于提供所述異哇嘟生物堿類化合物的制備方法；第Ξ目的在于提供所述異哇嘟生物堿類化 合物在制備抗輪狀病毒藥物中的應用。
[0005] 本發(fā)明的第一目的是運樣實現(xiàn)的，所述異哇嘟生物堿類化合物從云南翅芙決明 (CassiaaiaiaL)樹皮中分離得到，其分子式為C13H13NO3,具有下述結構：
該化合物命名為翅芙決明堿A，英文名為alatalkaloidA;英文系統(tǒng)命名為：1-(6, 7-dimethoxyisoquinolin-l-yl)eth曰none〇
[0006] 本發(fā)明的第二目的是運樣實現(xiàn)的，所述異哇嘟生物堿類化合物從云南翅芙決明 (仍ssiaa知紅L.)樹皮為原料，經浸膏提取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離步驟，具體 為： A、浸膏提取：將翅芙決明（仍斯fiaa知紅L.)樹皮粉碎到20~40目，用60~100%有機溶 劑浸泡并提取2~4次，每次12h~72h，合并提取液、過濾，減壓濃縮濃縮成浸膏； B、 硅膠柱層析：浸膏用有機溶劑溶解后，用浸膏重量比1~1.6倍量的60~120目硅膠 拌樣，再用浸膏重量比2~5倍量的160~300目硅膠干法裝柱進行硅膠柱層析；W體積配比 10:0~5:5的氯仿-甲醇溶液進行梯度洗脫，洗脫液的9:1部分用硅膠層析柱繼續(xù)分離，用 體積配比15:1-2:1的氯仿-丙酬溶液進行梯度洗脫，將其先后劃分成6個部分，收集各部 分洗脫液并濃縮； C. 高壓液相色譜分離：B步驟洗脫液的6:4部分進一步用高壓液相色譜分離純化即得 所述的異哇嘟生物堿類化合物。
[0007] W上述方法制備的異哇嘟生物堿類化合物的結構是通過W下方法鑒定出來的： 本發(fā)明化合物為黃色膠狀物；紫外光譜(溶劑為甲醇)，Jm。、（logε) :218 (4. 32)、260 (3.53)、295 (3.22)、330 (3.48)nm;紅外光譜(漠化鐘壓片）Vmaχ:3135、2964、1662，1618、 1572、1438、1361、1238、1161、1054，846cm-1;高分辨質譜（HRESIMS)顯示本發(fā)明化合物準 分子離子峰聲么254. 0785 [M+Na]+ (計算值254. 0793)，結合古和"CNMR譜（表-1)確 定分子式為?；?NO3。其紅外光譜顯示化合物中有幾基（1662cm1)和芳環(huán)（1618、1572、 1438cmi)信號，紫外光譜在218、260、295、330nm有最大吸收也證實化合物中存在芳環(huán) 結構?；衔锏墓藕?C-NMR譜（表-1)顯示其含有13個碳和13個氨，包括，一個 1，6,7-取代的異哇嘟母核（C-1~C-10;H-3，H-4，H-5，和H-8)，一個乙酷基（-CO-CH3; C-1'和C-2' ; &-2')和兩個甲氧基（56. 1q和 56.8q;3. 78S和 3. 83S)。 化合物中護3和01、(：-4、(：-10出-4和（：-3、09、(：-10出-5和（：-4、(：-9、010;^及護8 和C-1、C-9、C-10的HMBC相關（圖3)也證實了異哇嘟母核的存在?；衔锏哪负舜_定 后，剩余的取代基，乙酷基和兩個甲氧基的位置也可W通過進一步分析其HMBC相關譜確 定。乙酷基取代在C-1位可由&-2'(2. 42)和C-1 (155. 3)的HMBC相關確 定；兩個甲氧基取代在C-6和C-7位可由甲氧基氨（《H3. 78,3.83)與C-6 (《cl52. 1) 和C-7(《C154.4)的HMBC相關確定。至此化合物的結構得到確認，命名為翅芙決明堿 A，英文名為alata化aloidA;英文系統(tǒng)命名為：1-(6, 7-dimethoxyisoquinolin-l-yl) eth過noneD
[0008] 本發(fā)明的第Ξ目的是運樣實現(xiàn)的，即將所述異哇嘟生物堿類化合物應用于抗輪狀 病毒藥物中的制備。
[0009] 本發(fā)明化合物是首次被分離出來的，通過核磁共振和質譜測定方法確定了為異哇 嘟生物堿類化合物，并表征了其具體結構。經對抗輪狀病毒的實驗，其TCw值為182.2媒/ mL、ICs。值為9. 23媒/mU治療指數(shù)TI為19. 74 ;其治療指數(shù)超過對照病毒挫的治療指數(shù) 19. 16;化合物具有很好的抗輪狀病毒活性。W上結果掲示了本發(fā)明的化合物在制備抗輪狀 病毒藥物中有良好的應用前景。本發(fā)明化合物結構簡單活性較好，可作為抗輪狀病毒藥物 研發(fā)的先導性化合物。
【附圖說明】
[0010] 圖1為本發(fā)明化合物的核磁共振碳譜。
[0011] 圖2為本發(fā)明化合物的核磁共振氨譜。
[0012] 圖3為本發(fā)明化合物的主要HMBC相關圖示。
【具體實施方式】
[0013] 下面結合實施例及附圖對本發(fā)明作進一步的說明，但不W任何方式對本發(fā)明加W 限制，基于本發(fā)明教導所作的任何變換或改進，均落入本發(fā)明的保護范圍。
[0014] 本發(fā)明所用原料不受地區(qū)和品種限制，任何來源的翅芙決明（CassiaaiaiaL.) 樹皮均可W實現(xiàn)本發(fā)明，下面W來源于云南的翅芙決明（Cassiaa知iaL.)樹皮為原料對 本發(fā)明做進一步說明。
[0015] 除非另有說明，本發(fā)明中所采用的百分數(shù)均為質量百分數(shù)。
[0016] 本發(fā)明所述的異哇嘟生物堿類化合物是從翅芙決明（仍ssiaa知iaL.)樹皮中分 離得到，其分子式為C13H13NO3,具有下述結構：
命名為翅芙決明堿A，英文名為alata化aloidA;英文系統(tǒng)命名為：l-(6,7-dimethox yisoquinolin-1-yl)eth曰none。
[0017] 本發(fā)明所述的異哇嘟生物堿類化合物的制備方法，是W翅芙決明（仍ssiaa知ia L.)樹皮為原料，經浸膏提取、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離步驟，具體為： A、 浸膏提?。簩⒊彳經Q明（仍斯fiaa知紅L.)樹皮粉碎到20~40目，用60~100%有機溶 劑浸泡并提取2~4次，每次12h~72h，合并提取液、過濾，減壓濃縮濃縮成浸膏； B、 硅膠柱層析：浸膏用有機溶劑溶解后，用浸膏重量比1~1.6倍量的60~120目硅膠 拌樣，再用浸膏重量比2~5倍量的160~300目硅膠干法裝柱進行硅膠柱層析；W體積配比 10:0~5:5的氯仿-甲醇溶液進行梯度洗脫，洗脫液的9:1部分用硅膠層析柱繼續(xù)分離，用 體積配比15:1-2:1的氯仿-丙酬溶液進行梯度洗脫，將其先后劃分成6個部分，收集各部 分洗脫液并濃縮； C.高壓液相色譜分離：B步驟洗脫液的6:4部分進一步用高壓液相色譜分離純化即得 所述的異哇嘟生物堿類化合物。
[0018] 所述A步驟中有機溶劑是乙醇、甲醇或丙酬與水的混合物。
[0019] 所述A步驟中有機溶劑與樹皮的重量比是1. 5~4:1。
[0020] 所述B步驟的有機溶劑是純甲醇、純乙醇或純丙酬。
[0021] 所述B步驟中的氯仿-甲醇溶液體積配比為10:0、9:1、8:2、7:3、6:4和5:5。
[0022] 所述C步驟中高壓液相色譜分離純化是采用21.2mmX250mm，5 的色 譜柱，流動相為48wt%的甲醇水溶液，流動相流速為12mL/min，紫外檢測器檢測波長為 330皿，每次進樣60~150 收集28. 2min的色譜峰，多次累加后蒸干。
[0023] 所述C步驟中高壓液相色譜是指使用時壓力在5-15Mpa的反相制備色譜。
[0024] 所述C步驟中高壓液相色譜分離純化后的物質再次用甲醇溶解，再W甲醇溶液為 流動相，用凝膠柱層析分離，W進一步分離純化。
[0025] 本發(fā)明所述的異哇嘟生物堿類化合物在制備抗輪狀病毒藥物中的應用。
[0026] 實施例1 所用翅芙決明樹皮采于云南德宏。將樹皮取樣3.0kg粉碎W70%的丙酬/水提取3 次，每次提取24h，提取液合并，過濾，減壓濃縮成浸膏，得浸膏150g。浸膏用重量比180g 的純甲醇溶解后用200g的80目粗硅膠拌樣，1.0kg的160目硅膠裝柱進行硅膠柱層析， 用體積配比為10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的氯仿-甲醇梯度洗脫，將其中體積配比為9:1 的氯仿-甲醇洗脫