,從而實(shí)現(xiàn)了核酸同時在多個不同反應(yīng)體系下進(jìn)行光學(xué)檢測。
[0022]主管內(nèi)設(shè)有納米磁珠。反應(yīng)液上方的分隔層內(nèi)包裹有載體及反應(yīng)組份,當(dāng)核酸納米磁珠所攜帶的核酸被清洗后,反應(yīng)液上方的分隔層被熔化,從而使納米磁珠可進(jìn)入反應(yīng)液,且在納米磁珠進(jìn)入反應(yīng)液時將載體及反應(yīng)組份也帶入反應(yīng)液中。
[0023]實(shí)現(xiàn)上述方法的核酸檢測管,如圖1所示:包括主管1和主管1下方的支管2,支管2內(nèi)設(shè)有第一分隔層3 (石蠟)和第二分隔層4 (石蠟),第一分隔層3位于管1和支管2的連接處,第二分隔層4位于第一分隔層3下方;所述主管1內(nèi)設(shè)有裂解液5,裂解液5內(nèi)設(shè)有可被磁化的混勻裝置14 ;第一分隔層3和第二分隔層4之間設(shè)有清洗液6,第二分隔層4下方設(shè)有反應(yīng)液7。主管1內(nèi)設(shè)有納米磁珠8,第二分隔層4內(nèi)包裹有可被磁化的載體10及反應(yīng)組份。所述主管1下方設(shè)有多個支管2。所述支管2的數(shù)目為兩個,其中一個支管2的第一分隔層3內(nèi)包裹有納米磁珠8,另一個支管2的第一分隔層內(nèi)包裹有內(nèi)控系統(tǒng)使用的核酸或者微生物9 ;每個支管2的第二分隔層4內(nèi)包裹有載體10及反應(yīng)組份。所述主管1上端為開口處,開口處設(shè)有止流圈11,止流圈11上封有封口膜12,封口膜12上設(shè)有預(yù)壓縫,且開口處外側(cè)設(shè)有上蓋13。所述支管2為直徑小于主管的細(xì)管。
[0024]本發(fā)明的工作原理(以2個支管的檢測管為例):
首先通過刺穿封口膜將待測樣品,然后通過外部磁性體控制檢測管內(nèi)的可被磁化的混勻裝置上下移動,使之與裂解液充分混勻,期間外部熱源加熱裂解液使樣品發(fā)生裂解,實(shí)現(xiàn)核酸抽提。然后熱源使第一分隔層熔化,外部磁性體帶動納米磁珠,使納米磁珠攜帶核酸進(jìn)入清洗液進(jìn)行清洗,接著第二分隔層熔化,納米磁珠攜帶核酸和可被磁化的載體及反應(yīng)組份進(jìn)入反應(yīng)液,核酸在反應(yīng)液中洗脫后,納米磁珠離開反應(yīng)液。外部熱源使支管底部維持恒溫,核酸在反應(yīng)液中進(jìn)行CPA擴(kuò)增反應(yīng),反應(yīng)液中引入分子信標(biāo),使得通過外部光學(xué)檢測(熒光定量檢測)即可實(shí)時觀察到CPA擴(kuò)增反應(yīng),并通過分析熒光值得到樣品核酸的數(shù)量。其中兩個支管內(nèi)可設(shè)置不同的反應(yīng)液(有不同的特異性引物),實(shí)現(xiàn)不同體系下的檢測。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種新型的核酸檢測方法,其特征在于:通過在檢測管內(nèi)設(shè)置多個分隔層將檢測管內(nèi)的裂解液、清洗液和反應(yīng)液進(jìn)行隔離,同時通過外部熱源的控制,使分隔層在檢測的不同階段分別熔化以控制各個檢測階段的時序,并在裂解液中使用受外部磁性體控制運(yùn)動的可被磁化的混勻裝置對加入檢測管內(nèi)的樣品進(jìn)行混勻并實(shí)現(xiàn)樣品的核酸提取和純化,然后利用外部磁性體帶動檢測管內(nèi)的納米磁珠經(jīng)過清洗液后進(jìn)入反應(yīng)液,納米磁珠所攜帶的核酸在清洗液中純化后在反應(yīng)液中洗脫,同時通過外部磁性體的運(yùn)動控制和外部熱源的控制使可被磁化的載體移入反應(yīng)液,并使載體上的反應(yīng)組分溶入和混勻在反應(yīng)液中,核酸在反應(yīng)液中發(fā)生擴(kuò)增反應(yīng),最后外部設(shè)備通過光學(xué)檢測實(shí)現(xiàn)對樣品核酸的檢測,從而實(shí)現(xiàn)在同一個檢測管內(nèi)進(jìn)行核酸提取和純化、清洗、洗脫和擴(kuò)增反應(yīng)多個步驟。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸檢測方法,其特征在于:所述檢測管下部設(shè)置多個分支管,多簇納米磁珠在外部磁性體的作用下,攜帶著核酸分別在多個分支管中進(jìn)行獨(dú)立的清洗和反應(yīng),從而實(shí)現(xiàn)了來自一份樣本的核酸同時在多個不同反應(yīng)體系下進(jìn)行核酸檢測。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的核酸檢測方法,其特征在于:當(dāng)核酸抽提完成后,清洗液上方的分隔層被外部設(shè)備加溫熔化,納米磁珠變可進(jìn)入清洗液;反應(yīng)液上方的分隔層內(nèi)包裹有可被磁化的載體,載體上帶有反應(yīng)組份,當(dāng)納米磁珠所攜帶的核酸在清洗液中純化后,反應(yīng)液上方的分隔層被熔化,從而使納米磁珠可進(jìn)入反應(yīng)液,且在納米磁珠進(jìn)入反應(yīng)液時將載體及反應(yīng)組分也帶入反應(yīng)液中。4.實(shí)現(xiàn)權(quán)利要求1?3任一權(quán)利要求所述方法的核酸檢測管,其特征在于:包括主管(I)和主管(I)下方的支管(2),支管(2)內(nèi)設(shè)有第一分隔層(3)和第二分隔層(4),第一分隔層(3)位于管(I)和支管(2)的連接處,第二分隔層(4)位于第一分隔層(3)下方;所述主管(I)內(nèi)設(shè)有裂解液(5),裂解液(5)內(nèi)設(shè)有可被磁化的混勻裝置(14);第一分隔層(3)和第二分隔層(4)之間設(shè)有清洗液(6),第二分隔層(4)下方設(shè)有反應(yīng)液(7)。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的核酸檢測管,其特征在于:所述主管(I)內(nèi)設(shè)有納米磁珠(8),第二分隔層(4)內(nèi)包裹有可被磁化的載體(10),載體(10)上承載有反應(yīng)組分。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的核酸檢測管,其特征在于:所述個支管(2)的數(shù)量為2個及2個以上。7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的核酸檢測管,其特征在于:所述主管(I)內(nèi)設(shè)有用于內(nèi)控系統(tǒng)的內(nèi)控物(9)。8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的核酸檢測管,其特征在于:所述主管(I)上端為開口處,開口處設(shè)有止流圈(11),止流圈(11)上封有封口膜(12),封口膜(12)上設(shè)有預(yù)壓縫,且開口處外側(cè)設(shè)有上蓋(13)。9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的核酸檢測管,其特征在于:所述第一分隔層(3)和第二分隔層(4)之間設(shè)有一個或多個附加分隔層將清洗液(6)分隔成多層,以實(shí)現(xiàn)多次清洗。10.根據(jù)權(quán)利要求4至9任一權(quán)利要求所述的核酸檢測管,其特征在于:所述支管(2)為直徑小于主管的細(xì)管。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種新型的核酸檢測方法,通過在檢測管內(nèi)設(shè)置多個分隔層將檢測管內(nèi)的裂解液、清洗液和反應(yīng)液進(jìn)行隔離,同時通過外部熱源的控制,使分隔層在檢測的不同階段分別熔化以控制各個檢測階段的時序,并在裂解液中使用受外部磁性體控制運(yùn)動的可被磁化的混勻裝置對加入檢測管內(nèi)的樣品進(jìn)行混勻并實(shí)現(xiàn)樣品的核酸提取和純化,然后利用外部磁性體帶動檢測管內(nèi)的納米磁珠經(jīng)過清洗液后進(jìn)入反應(yīng)液,納米磁珠所攜帶的核酸在清洗液中純化后在反應(yīng)液中洗脫,核酸在反應(yīng)液中發(fā)生擴(kuò)增反應(yīng),最后外部設(shè)備通過光學(xué)檢測實(shí)現(xiàn)對樣品核酸的檢測,從而實(shí)現(xiàn)在同一個檢測管內(nèi)進(jìn)行核酸提取和純化、清洗、洗脫和擴(kuò)增反應(yīng)多個步驟。
【IPC分類】C12Q1/68, C12N15/10, C12M1/34
【公開號】CN105349530
【申請?zhí)枴緾N201510916618
【發(fā)明人】尤其敏, 胡林, 范信龍, 彭山銘, 周艷瓊, 高秋萍, 金榮愉, 齊晨, 孫剛, 余祝君, 賀君麗, 余軍偉, 王莎, 趙芯, 張強(qiáng)中, 王岱桑, 王瑜, 王晨, 黃龍妹, 朱羅羅, 張建勛, 范倻, 付晶, 吳志紅
【申請人】杭州優(yōu)思達(dá)生物技術(shù)有限公司
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年12月11日