一種化合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種化合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 骨質(zhì)疏松癥是以骨質(zhì)減少，骨的微觀結(jié)構(gòu)退化為特征的，致使骨的脆性增加以及 易于發(fā)生骨折的一種全身性骨骼疾病。隨著社會(huì)老齡化的加快，骨質(zhì)疏松癥的患病人數(shù)正 在以每年5. 2 %的速度增加。
[0003] 淫羊藿為小檗科植物淫羊藿屬的植物，具有補(bǔ)肝腎、健筋骨、助陽益精等功效，目 前，關(guān)于淫羊藿的基礎(chǔ)研究報(bào)道比較少。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 有鑒于此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種化合物及其制備方法和應(yīng) 用。
[0005] 本發(fā)明提供了一種化合物，具有式（I)結(jié)構(gòu)，
[0007] 本發(fā)明提供了一種式（I)所示化合物的制備方法，包括：
[0008] 1)對(duì)淫羊藿屬的植物進(jìn)行提取，得到清膏；
[0009] 2)將得到的清膏進(jìn)行分離，得到式⑴所示化合物。
[0010] 優(yōu)選的，所述步驟1)所述的提取為采用水提醇沉法提取或醇提。
[0011] 優(yōu)選的，所述步驟2)具體為：
[0012] 將得到的清膏依次通過大孔吸附樹脂柱色譜、硅膠柱色譜、凝膠柱色譜和制備液 相色譜分離得到式（I)所示化合物。
[0013] 優(yōu)選的，所述大孔吸附樹脂柱色譜中的大孔吸附樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂、 HPD-100型大孔吸附樹脂、HPD-100A型大孔吸附樹脂和HPD-300型大孔吸附樹脂中的一種 或幾種。
[0014] 優(yōu)選的，所述通過大孔吸附樹脂柱色譜中色譜分離所用洗脫液為水和乙醇水溶 液。
[0015] 優(yōu)選的，所述通過硅膠柱色譜中色譜分離的洗脫液為二氯甲烷和甲醇的混合液。
[0016] 優(yōu)選的，所述通過凝膠柱色譜中色譜分離的洗脫液為甲醇。
[0017] 優(yōu)選的，所述通過制備液相色譜分離中色譜分離的洗脫液為乙腈和水的混合溶 液。
[0018] 本發(fā)明還提供了一種式（I)所示的化合物在制備治療骨質(zhì)疏松癥的藥物中的應(yīng) 用，
[0020] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供了一種式（I)所示結(jié)構(gòu)的化合物，該化合物能夠治 療骨質(zhì)疏松癥，且通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明所述的化合物對(duì)成骨細(xì)胞的增值有促進(jìn)作用， 且在樣品濃度為10 μΜ時(shí)，增值率可高達(dá)11. 24%。
【附圖說明】
[0021] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1制得的式⑴結(jié)構(gòu)的化合物的HRESI⑴MS譜圖；
[0022] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例1制得的式⑴結(jié)構(gòu)的化合物的1H NMR譜圖；
[0023] 圖3為本發(fā)明實(shí)施例1制得的式⑴結(jié)構(gòu)的化合物的13C NMR譜圖；
[0024] 圖4為本發(fā)明實(shí)施例1制得的式⑴結(jié)構(gòu)的化合物的DEPT135譜圖；
[0025] 圖5為本發(fā)明實(shí)施例1制得的式⑴結(jié)構(gòu)的化合物的HMQC譜圖；
[0026] 圖6為本發(fā)明實(shí)施例1制得的式⑴結(jié)構(gòu)的化合物的HMBC譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 本發(fā)明提供了一種化合物，具有式（I)結(jié)構(gòu)，
[0029] 本發(fā)明還提供了一種式（I)所示化合物的制備方法，包括：
[0030] 1)對(duì)淫羊藿屬的植物進(jìn)行提取，得到清膏；
[0031] 2)將得到的清膏進(jìn)行分離，得到式⑴所示化合物。
[0032] 按照本發(fā)明，本發(fā)明對(duì)淫羊藿屬的植物進(jìn)行提取，得到清膏；所述淫羊藿屬的植物 優(yōu)選為淫羊藿，在本發(fā)明的提取中，優(yōu)選采用淫羊藿的葉；本發(fā)明對(duì)提取的方法沒有特殊限 制，本領(lǐng)域公知的用于溶劑提取中草藥成分的方法均可，本發(fā)明優(yōu)選采用水體醇沉法或醇 提；
[0033] 具體的，本發(fā)明將淫羊藿屬的植物粉碎過篩后與水混合，提取，將提取液濃縮得 到清膏，向得到的清膏中加入乙醇，靜置，濃縮，得到醇沉清膏；其中，淫羊藿屬的植物與水 的質(zhì)量比為1:20,所述提取的次數(shù)為2~4次，優(yōu)選為3次；所述提取的時(shí)間優(yōu)選為1~ 3小時(shí)，更優(yōu)選為1. 5~2小時(shí)；所述加入乙醇優(yōu)選為使醇沉清膏中醇的含量為60wt%~ 90wt %，更優(yōu)選為70wt %。
[0034] 按照本發(fā)明，本發(fā)明將得到的清膏進(jìn)行分離，得到式（I)所示化合物；所述分離步 驟優(yōu)選為：將得到的清膏依次通過大孔吸附樹脂柱色譜、硅膠柱色譜、凝膠柱色譜和制備液 相色譜分離得到式（I)所示化合物；即：
[0035] 2-1)將得到的清膏通過大孔吸附樹脂柱色譜分離，得到大孔樹脂分離后的粗品；
[0036] 2-2)將大孔樹脂分離后的粗品通過硅膠柱色譜分離，得到硅膠分離后的粗品；
[0037] 2-3)將硅膠分離后的粗品通過凝膠柱色譜分離，得到凝膠分離后的粗品；
[0038] 2-4)將凝膠分離后的粗品通過制備液相色譜分離，得到式（I)所示化合物。
[0039] 具體的，本發(fā)明中，將得到的清膏通過大孔吸附樹脂柱色譜分離，得到大孔樹脂分 離后的粗品；其中，所述大孔吸附樹脂優(yōu)選為DlOl型大孔吸附樹脂、HPD-100型大孔吸附樹 月旨、HPD-100A型大孔吸附樹脂和HPD-300型大孔吸附樹脂中的一種或幾種，更優(yōu)選為DlOl 型大孔吸附樹脂、HPD-100型大孔吸附樹脂、HPD-100A型大孔吸附樹脂或HPD-300型大孔吸 附樹脂；所述洗脫液優(yōu)選為水和乙醇水溶液；且為了充分的分離雜質(zhì)與所需化合物，本發(fā) 明優(yōu)選依次采用水和乙醇與水的體積比為（65~90) : (35~10)的溶液洗脫，更優(yōu)選為依 次采用水和乙醇與水的體積比為（70~85) : (30~15)的溶液洗脫；其中，水的用量優(yōu)選 為3~6倍柱體積的用量，更優(yōu)選為4~5倍柱體積的用量；所述乙醇水溶液的用量優(yōu)選為 3~6倍柱體積的用量，更優(yōu)選為4~5倍柱體積的用量；
[0040] 且為了使大孔樹脂分離后的粗品純度更高，本發(fā)明優(yōu)選將依次用水和乙醇水溶液 分離后得到的粗品再次用大孔吸附樹脂柱色譜分離，其中，所述大孔吸附樹脂優(yōu)選為DlOl 型大孔吸附樹脂、HPD-100型大孔吸附樹脂、HPD-100A型大孔吸附樹脂和HPD-300型大 孔吸附樹脂中的一種或幾種，更優(yōu)選為DlOl型大孔吸附樹脂、HPD-100型大孔吸附樹脂、 HPD-100A型大孔吸附樹脂或HPD-300型大孔吸附樹脂；所述分離過程采用梯度洗脫，所述 梯度洗脫的洗脫液優(yōu)選為乙醇與水的體積比為（X) : (100-x)的溶液，其中，〇<χ<95,更 優(yōu)選為依次采用水，（5~10) %的乙醇水溶液，（15~20) %的乙醇水溶液、（25~30) %的 乙醇水溶液、（35~40) %的乙醇水溶液、（45~50) %的乙醇水溶液、（55~60) %的乙醇 水溶液、（65~70) %的乙醇水溶液、（75~80) %的乙醇水溶液和（90~95) %的乙醇水溶 液溶液洗脫，得到大孔樹脂分離后的粗品；其中，每種洗脫液的用量均為1. 5~4倍柱體積， 更優(yōu)選為2~3倍柱體積。另外需要指出的是，5%的乙醇水溶液是指，乙醇水溶液中乙醇 與水的體積比為5:95,其它百分含量的乙醇水溶液表示的含義與該解釋相同。
[0041] 本發(fā)明中，將硅膠分離后的粗品通過硅膠柱色譜分離，得到硅膠分離后的粗品；其 中，所述硅膠優(yōu)選為100~200目的硅膠；所述洗脫劑優(yōu)選二氯甲烷甲醇溶液，其中，二氯 甲烷與甲醇的體積比優(yōu)選為（0~30) :1;且為了能夠更好分離雜質(zhì)和所需化合物，本發(fā)明 優(yōu)選依次采用二氯甲烷與甲醇的體積比為（30~20) :1、（15~10) :1、（10~5) :1、（3~ 2) :1以及0:1洗脫。
[0042] 本發(fā)明中，將大孔樹脂分離后的粗品通過凝膠柱色譜分離，得到凝膠分離后的粗 品；所述凝膠柱色譜分離用凝膠優(yōu)選為Sephadex LH-20 ;所述洗脫液優(yōu)選為甲醇。
[0043] 本發(fā)明中，將凝膠分離后的粗品通過制備液相色譜分離，得到式（I)所示化合 物；其中，分離的流動(dòng)相優(yōu)選為乙腈水溶液；所述乙腈水溶液中乙腈與水的體積比優(yōu)選為 (10~30) : (70~90)，更優(yōu)選為（15~20) : (80~85)，最優(yōu)選為18:82 ;所述流速優(yōu)選為 10~30mL/min，更優(yōu)選為15~25mL/min，最優(yōu)選為17~20mL/min ;檢測的波長優(yōu)選為210 和280nm，得到化合物。
[0044] 本發(fā)明對(duì)得到的化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，其檢測結(jié)果見圖1~圖6,其中，圖1為 本發(fā)明實(shí)施例1制得的式（I)結(jié)構(gòu)的化合物的HRESI (+)MS譜圖；圖2為本發(fā)明實(shí)施例1制 得的式⑴結(jié)構(gòu)的化合物的1H NMR譜圖；圖3為本發(fā)明實(shí)施例1制得的式⑴結(jié)構(gòu)的化合 物的13C NMR譜圖；圖4為本發(fā)明實(shí)施例1制得的式⑴結(jié)構(gòu)的化合物的DEPT135譜圖；圖 5為本發(fā)明實(shí)施例1制得的式（I)結(jié)構(gòu)的化合物的HMQC譜圖；圖6為本發(fā)明實(shí)施例1制得 的式（I)結(jié)構(gòu)的化合物的HMBC譜圖；從圖可以看出，由圖1可知，得到的化合物的高分辨質(zhì) 譜 HR-ESI-MS m/z 為 68L 2384 [M+H]+，（計(jì)算值 68L 2389, C32H41O1/)，提示化合物分子量為 680;且通過圖2~圖6的核磁數(shù)據(jù)分析，結(jié)合 1H NMR和13C NMR譜可判斷該化合物為黃酮 類化合物，具體的：
[0045] 1H NMR(400MHz，CD3OD)中，δ 8. 01 (2H，d，J = 7. 6Hz)和 7. 07(2H，d，J = 7. 6Hz) 處的信號(hào)表明存在苯環(huán)上有2個(gè)對(duì)稱的位點(diǎn)，故C環(huán)為4'取代；δ 6. 67 (1H，s)處出現(xiàn)I個(gè) 單峰，故可知在A、B環(huán)上有一個(gè)未取代的氫；δ 3. 89 (3H，s)、1. 27 (6H，s)有3個(gè)甲基信號(hào)； δ 5. 47 (1Η，s)和5. 00 (1Η，d，J = 6. 4Hz)為兩個(gè)糖的端基氫信號(hào)。
[0046] 13C NMR(100MHz，CD3OD)中給出30個(gè)碳信號(hào)，共32個(gè)碳。δ 60. 96可能為葡萄糖 的六位碳信號(hào)，S 16. 15可能為鼠李糖的六位碳信號(hào)，除去兩個(gè)六碳糖還余20個(gè)碳。其中 δ 178. 69有1個(gè)共輒的羰基，δ 154. 21~162. 05有5個(gè)與氧相連的不飽和碳信號(hào)，δ 54. 60 有1個(gè)-OMe的碳信號(hào)，DEPT135譜中給出δ 60. 96和24. 83兩個(gè)012的信號(hào)，δ 72. 93為季 碳信號(hào)。結(jié)合文獻(xiàn)（Fangjiang, Xin-Luan Wang, Nai-Li Wang, et al. 2009)，發(fā)現(xiàn)本化合物 比icarisid B在8位取代基上少了一個(gè)CH2。
[0047] HMQC 譜中，直接相關(guān)的信號(hào)有：δ Η〇· 82-δ c 16.15，δ H 1.27-δ c 22.64，δ H I. 27-Sc 25.37，δ η 3.89-Sc 54.60，δ η 5.00-Sc 100.99，δ η 5.47-Sc 101.74，δ η 6·67_δε 98.04(06)，δΗ 7·07_δε 113. 68(03'，5'），δΗ 8·01_δε 130.93(02'，6'）， 5" 2.92,3.08-5。24.83 和5" 3.76,3.94-5。60.96。結(jié)合1!1匪1?可知，5"0.82-5。 16. 15, δ η L 27- δ c 22. 64 和 δ η L 27- δ c 25. 37 為 3 個(gè)甲基的直接相關(guān)信號(hào)；δ η 2· 92， 3. 08- δ c 24. 83和δ η 3. 76, 3. 94- δ c 60. 96為2個(gè)CH2的直接相關(guān)信號(hào)；其余均為CH的 直接相關(guān)信號(hào)。
[0048] HMBC 譜中，δΗ 8. 01，7.07 和 122