一種從繡球菌子實體中提取水溶性β葡聚糖的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從繡球菌子實體中提取水溶性β葡聚糖的方法及其產(chǎn)品。屬于中藥的活性成分提取領域。
【背景技術】
[0002]繡球菌，又名繡球菇，拉丁學名為Sparassiscrispa，是非褶孔菌目、繡球菌科、繡球菌屬。繡球菌的最大特點是含有大量β葡聚糖。根據(jù)日本食品分析中心的分析，每100g繡球菌含有葡聚糖高達43.6g，比靈芝和姬松茸高出3~4倍。可以說，繡球菌所含的β-葡聚糖為菇類之最。葡聚糖是由葡萄糖單體聚合而成的多糖，分為α型和β型，α型葡聚糖如淀粉等，是機體能量的主要來源，不具備生物活性。β型葡聚糖是一種生物活性物質(zhì)，經(jīng)醫(yī)學研究證實，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗輻射、降血糖、降血月旨、保肝等多種功能。研究還發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)具有抗腫瘤活性的多糖都是帶有β (1-6)糖苷鍵分支的β (1-3)D葡聚糖。有研究證明，來自真菌的β (1-3)D葡聚糖通常具有抑制的腫瘤作用。繡球菌中的葡聚糖70%以上是β (1_3)D葡聚糖，具有良好的抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)以及提尚造血功能等功效。
[0003]隨著繡球菌的應用越來越廣泛，繡球菌的活性成分提取成為了一個比較熱門的課題。繡球菌多糖是繡球菌的主要活性成分之一，對于繡球菌多糖的提取液已經(jīng)有了一些報道。但是這些文獻都只是對繡球菌總多糖的提取，繡球菌多糖在繡球菌中以α和β兩種構型共存，目前對于繡球菌總多糖的工藝研究的文獻都沒有提到這兩種構型的分離，僅僅是從提取總多糖本身入手，對提取的總多糖進行進一步純化，分離得到某一種構型的多糖均一體。
[0004]多糖分子量從幾千到幾百萬不等，分子量越大其水溶性越差，繡球菌多糖也不例夕卜。繡球菌多糖大分子量部分水溶性較差，在分離提取中用水做溶劑很難提取完全，即使使用堿液提取，雖然提取率高，但是干燥后得到多糖產(chǎn)品應用時仍然不溶解于水。人體對于這種大分子繡球菌多糖吸收不好。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明主要解決的技術問題為:1、繡球菌子實體中提取β葡聚糖的工業(yè)化生產(chǎn)問題?，F(xiàn)有技術提取通常提取的是總多糖，而本發(fā)明的方法提取得到了 β葡聚糖，并可應用于工業(yè)生產(chǎn)。2，解決β葡聚糖的水溶性問題，更有利于繡球菌β葡聚糖的吸收利用和產(chǎn)品開發(fā)。分子量大的葡聚糖不溶于水本發(fā)明利用酸水解技術降低了大分子量繡球菌多糖的分子量。提高了繡球菌多糖的收率，增加了水溶性，更有利于人體吸收。
[0006]為了解決上述技術問題，本發(fā)明的目的在于提供一種從繡球菌菇子實體中提取水溶性β葡聚糖的方法。
[0007]—種從繡球菌子實體中提取水溶性β葡聚糖的方法，其特征在于:包括以下步驟:步驟1、制備繡球菌粗多糖：
取繡球菌子實體，粉碎得到粉末，粉末用堿液浸提，過濾除去殘渣，濾液中加入乙醇，靜置，過濾得到沉淀，得繡球菌粗多糖；
步驟2、制備繡球菌β葡聚糖：
取繡球菌粗多糖，干燥后加水攪拌，加入α淀粉酶水解，水解液過濾，棄去濾液，得到殘渣，得繡球菌β葡聚糖；
步驟3、制備水溶性β葡聚糖：
取繡球菌β葡聚糖，加堿液攪拌提取，提取液調(diào)酸堿度至ΡΗ2. 0—6. 8,加熱水解，水解液過濾，濾液中加入乙醇，靜置，分離沉淀并干燥，得到水溶性β葡聚糖。
[0008]所述步驟1中，將繡球菌子實體粉碎后過50目的篩，得到粉末。
[0009]所述步驟1中，向粉末中加入5-20倍重量的堿液浸提取1-10小時，所用堿液的濃度優(yōu)選是〇. 1-1.0摩爾/升。
[0010]所述步驟1中，過濾采用濾布進行過濾，其中濾布孔徑為〇. 5-5微米。
[0011]所述步驟1或步驟3中，向濾液中加入1-4倍體積的無水乙醇靜置2小時。
[0012]所述步驟2中，繡球菌粗多糖干燥后加5-10倍重量的水攪拌，充分溶解。
[0013]所述步驟3中，堿液濃度是0. 1-0. 4摩爾/升；所述的加熱水解優(yōu)選為加熱至80_100°C，水解時間為1-4小時。
[0014]本發(fā)明的提取方法的具體描述：
繡球菌子實體粉碎得到粉末，粉末用堿液浸提，過濾除渣，濾液中加入乙醇，靜置，過濾得到沉淀；此沉淀即繡球菌粗多糖。繡球菌β葡聚糖是繡球菌粗多糖的一部分，其相當一部分位于真菌的細胞壁上，為了最大限度的提取繡球菌β葡聚糖，本發(fā)明選擇堿液提取，堿液加量為原料重量的5-20倍，堿液的濃度選取0. 1-1. 0摩爾/升中任一濃度均可，提取時間1-10小時。堿液可以用氫氧化鈉，氫氧化鉀，氫氧化鋅，有機堿等配制，考慮到成本問題，堿液一般選取氫氧化鈉溶液。提取液過濾除去殘渣，濾液加1-4倍體積的無水乙醇，靜置2小時后過濾得沉淀即繡球菌粗糖。
[0015]沉淀干燥后加水攪拌，而后加α淀粉酶水解，水解液過濾，棄去濾液得殘渣。
[0016]此步的殘渣即繡球菌β葡聚糖但水溶性較差。此步驟采用上一步中的沉淀(繡球菌粗多糖)為原料，加α淀粉酶(因為不同廠家產(chǎn)品酶活力不一樣，加量相差巨大，本領域技術人員可根據(jù)實際情況和酶的活力確定加入α淀粉酶的用量；用量多一點或者少一點不影響本發(fā)明的效果)將水不溶解的α構型多糖水解變?yōu)榭扇?，棄去水解液，同時水解液也溶解了粗多糖中的大部分殘留單糖和寡糖，起到純化的作用，雖然水解液中也可能存在少量β葡聚糖，但是考慮到回收成本，故舍去。僅對殘渣中的大量β葡聚糖進行下一步處理使其變?yōu)榭扇芙?。α淀粉酶選取市售的各種型號均可。水解條件，酶用量依據(jù)各廠家不同型號的α淀粉酶說明書。
[0017]殘渣加堿液攪拌提取，提取液調(diào)酸度至ρΗ2. 0-6. 8,加熱水解，水解液過濾，濾液中加入乙醇，靜置，分離沉淀并干燥，即得。
[0018]采用步驟b)的殘渣為原料，加堿液提取，堿液加量為原料重量的5-20倍，提取液調(diào)酸堿至PH2. 0-6. 8, 80-100°C加熱水解1-4小時，水解液過濾，濾液加1-4倍體積的無水乙醇進行沉淀，分離沉淀干燥后即本發(fā)明產(chǎn)物，也就是繡球菌菇水溶性β葡聚糖。
[0019]堿堿液可以用氫氧化鈉，氫氧化鉀，氫氧化鋅，有機堿等配制，優(yōu)選氫氧化鈉，液濃度選取0.1-1.0摩爾/升中任一濃度均可。pH可以用鹽酸、醋酸、硫酸、乙酸等。pH2.0-6.8中任何一個值均可，只是不同的pH，水解強度不同，水解后所得最終產(chǎn)物重均分子量不同。
[0020]現(xiàn)有技術中雖然有對繡球菌菇的某一種構型進行了分離并且進一步純化得到了高純度多糖，但是其分離方法與本發(fā)明有本質(zhì)區(qū)別，在經(jīng)過常規(guī)的水提醇沉后現(xiàn)有方法多使用柱層析對粗多糖分離，截去粗多糖中某一特定部分得到高純度的繡球菌多糖以用于科學研究，這和本發(fā)明的工業(yè)化方法有顯著區(qū)別，并且本發(fā)明除了對繡球菌多糖的β構型進行分離提取外，還通過對繡球菌多糖的分子量控制提高了其水溶性。本發(fā)明通過酸水解，水復溶的方法控制繡球菌多糖的分子量在一定范圍內(nèi)增強了繡球菌多糖的水溶性，提高了繡球菌多糖大分子量段的收率，有利于工業(yè)化生產(chǎn)繡球菌β水溶性多糖。
[0021]本發(fā)明提取方法所得到繡球菌子實體多糖是除去了 α構型多糖的β葡聚糖，并且種β葡聚糖具有良好的水溶性。紅外光譜顯示本發(fā)明產(chǎn)物為β葡聚糖，硫酸苯酚法檢測多糖含量大于50%，多糖平均分子量2000-200000道爾頓不等。
【具體實施方式】
[0022]下面結合實施例對本發(fā)明作進一步說明，應該理解的是這些實施例僅用于例證的目的，決不限制本發(fā)明的保護范圍。
[0023]實施例1
一種從繡球菌子實體中提取水溶性β葡聚糖的方法，其特征在于:包括以下步驟: 步驟1、制備繡球菌粗多糖:
取繡球